近日，第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院全軍神經外科研究所林綠標等人,，在國內首次成功建立神經干細胞移植治療腦缺血的實驗模型,，并觀察到移植后小鼠神經干細胞在貓全腦缺血模型中能夠存活、遷移并分化,。
神經干細胞移植是中樞神經系統(tǒng)損傷修復治療的新希望,。近年來，國內外有關神經干細胞移植治療腦缺血的研究很多,，但由于體內微環(huán)境的復雜性,，在體研究十分困難，進一步的人體試驗更加困難,。因此,，建立一個方便有效的動物模型十分必要。
為建立一個方便有效的動物實驗模型以研究神經干細胞移植治療腦缺血的可行性,，林綠標等人將健康家貓12只,，隨機分為缺血再灌注組10只和假手術組兩只,，參照四血管阻塞法制作貓全腦缺血模型。先用顯微手術的方法分離家貓雙側椎動脈并電凝,，永久性閉塞側椎動脈,。24小時后再分離雙側頸總動脈，用動脈夾阻斷血流,。用含表皮生長因子的無血清培養(yǎng)基原代分離培養(yǎng)小鼠神經干細胞,。將原代培養(yǎng)的小鼠神經干細胞移植到全腦缺血再灌注損傷模型的一側大腦皮層中，假手術組貓大腦皮層注射同量的磷酸鹽緩沖溶液,。用免疫熒光技術檢測移植1個月后的小鼠神經干細胞,。
結果顯示，缺血再灌注組10只家貓經缺血再灌注損傷后死亡兩只,，1只夾閉血管后始終未出現靜息腦電波,，模型制作成功7只，成功率70%,。假手術組家貓全部存活,。缺血再灌注損傷后的家貓均出現不同程度的肢體癱瘓及平衡失調表現。飼養(yǎng)1周后,，肢體癱瘓及平衡失調表現均逐漸有所改善,；原代培養(yǎng)細胞在無血清培養(yǎng)基中生長2~3天后，大部分細胞死亡,，只有少數以單細胞形式懸浮生長,。部分細胞分裂形成幾個到幾十個細胞的細胞團，到7~10天時可生長成有數十個~數百個細胞的細胞團,，也呈懸浮生長,。這些懸浮生長的細胞在含血清培養(yǎng)基中能夠貼壁生長，并部分分化成神經微絲抗原陽性的神經元及膠質纖維酸性蛋白抗原陽性的神經膠質細胞,；細胞移植后,，家貓癥狀有所改善，但移植側與對側肢體癱瘓及平衡失調表現改善無明顯差別,；免疫熒光方法檢測小鼠神經干細胞移植到貓前腦后1個月仍有大量存活,，部分細胞分化為神經元及神經膠質細胞，部分細胞向貓腦組織中遷移,。遷移深度0.1~0.2毫米,，呈彌散性分布。沿針道側壁貼附的細胞呈圓形,，遷移到腦組織深部的細胞大多呈梭形,，海馬及對側腦皮層等遠隔部位未檢測到陽性細胞存在。不同個體間未發(fā)現明顯差異,；缺血再灌注組腦皮層及海馬CA1區(qū)蘇木精-伊紅染色示典型的遲發(fā)性神經元壞死,。
據林綠標介紹,，實驗還觀察到神經干細胞在體內分化細胞中，膠質細胞明顯比神經元多,，由于未行免疫雙標檢測,，還不能得出神經元與神經膠質細胞的相對比例，故進一步的實驗須在改變某種誘導因素的情況下,，用免疫雙標檢測的方法觀察神經元與神經膠質細胞比例的變化,，以期達到體內定向分化的目的。
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