近日,，第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院全軍神經(jīng)外科研究所林綠標(biāo)等人,，在國內(nèi)首次成功建立神經(jīng)干細(xì)胞移植治療腦缺血的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停⒂^察到移植后小鼠神經(jīng)干細(xì)胞在貓全腦缺血模型中能夠存活,、遷移并分化,。
神經(jīng)干細(xì)胞移植是中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷修復(fù)治療的新希望。近年來,，國內(nèi)外有關(guān)神經(jīng)干細(xì)胞移植治療腦缺血的研究很多,，但由于體內(nèi)微環(huán)境的復(fù)雜性，在體研究十分困難,，進(jìn)一步的人體試驗(yàn)更加困難,。因此，建立一個(gè)方便有效的動(dòng)物模型十分必要,。
為建立一個(gè)方便有效的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ鸵匝芯可窠?jīng)干細(xì)胞移植治療腦缺血的可行性,，林綠標(biāo)等人將健康家貓12只，隨機(jī)分為缺血再灌注組10只和假手術(shù)組兩只,，參照四血管阻塞法制作貓全腦缺血模型,。先用顯微手術(shù)的方法分離家貓雙側(cè)椎動(dòng)脈并電凝，永久性閉塞側(cè)椎動(dòng)脈,。24小時(shí)后再分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈,，用動(dòng)脈夾阻斷血流。用含表皮生長因子的無血清培養(yǎng)基原代分離培養(yǎng)小鼠神經(jīng)干細(xì)胞。將原代培養(yǎng)的小鼠神經(jīng)干細(xì)胞移植到全腦缺血再灌注損傷模型的一側(cè)大腦皮層中,，假手術(shù)組貓大腦皮層注射同量的磷酸鹽緩沖溶液,。用免疫熒光技術(shù)檢測移植1個(gè)月后的小鼠神經(jīng)干細(xì)胞。
結(jié)果顯示,，缺血再灌注組10只家貓經(jīng)缺血再灌注損傷后死亡兩只,，1只夾閉血管后始終未出現(xiàn)靜息腦電波，模型制作成功7只,，成功率70%,。假手術(shù)組家貓全部存活。缺血再灌注損傷后的家貓均出現(xiàn)不同程度的肢體癱瘓及平衡失調(diào)表現(xiàn),。飼養(yǎng)1周后,，肢體癱瘓及平衡失調(diào)表現(xiàn)均逐漸有所改善；原代培養(yǎng)細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中生長2~3天后,，大部分細(xì)胞死亡,，只有少數(shù)以單細(xì)胞形式懸浮生長。部分細(xì)胞分裂形成幾個(gè)到幾十個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán),，到7~10天時(shí)可生長成有數(shù)十個(gè)~數(shù)百個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán),，也呈懸浮生長。這些懸浮生長的細(xì)胞在含血清培養(yǎng)基中能夠貼壁生長,，并部分分化成神經(jīng)微絲抗原陽性的神經(jīng)元及膠質(zhì)纖維酸性蛋白抗原陽性的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,；細(xì)胞移植后，家貓癥狀有所改善,，但移植側(cè)與對側(cè)肢體癱瘓及平衡失調(diào)表現(xiàn)改善無明顯差別,；免疫熒光方法檢測小鼠神經(jīng)干細(xì)胞移植到貓前腦后1個(gè)月仍有大量存活，部分細(xì)胞分化為神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,，部分細(xì)胞向貓腦組織中遷移,。遷移深度0.1~0.2毫米，呈彌散性分布,。沿針道側(cè)壁貼附的細(xì)胞呈圓形,，遷移到腦組織深部的細(xì)胞大多呈梭形，海馬及對側(cè)腦皮層等遠(yuǎn)隔部位未檢測到陽性細(xì)胞存在,。不同個(gè)體間未發(fā)現(xiàn)明顯差異,；缺血再灌注組腦皮層及海馬CA1區(qū)蘇木精-伊紅染色示典型的遲發(fā)性神經(jīng)元壞死。
據(jù)林綠標(biāo)介紹,，實(shí)驗(yàn)還觀察到神經(jīng)干細(xì)胞在體內(nèi)分化細(xì)胞中,，膠質(zhì)細(xì)胞明顯比神經(jīng)元多，由于未行免疫雙標(biāo)檢測,，還不能得出神經(jīng)元與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的相對比例，故進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)須在改變某種誘導(dǎo)因素的情況下,，用免疫雙標(biāo)檢測的方法觀察神經(jīng)元與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞比例的變化,，以期達(dá)到體內(nèi)定向分化的目的,。
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