Median of Ratio——MR(比值中間值)Mean Of Ratio(比值平均值)
定義:所有特征像素強(qiáng)度比例值的中間值或平均值,。
生物學(xué)相關(guān)信息:此方法為測定樣品的活性變化提供了另一個(gè)選擇,。用以計(jì)算此比值的像素分布,,顯示于“圖像頁”中的數(shù)據(jù)點(diǎn)查看器中(圖4),。計(jì)算均值比例值的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是可得到比例值的標(biāo)準(zhǔn)差,,為直觀地觀察芯片的比例值分布提供了又一條途徑,。高質(zhì)量的芯片用兩種比例值的計(jì)算方法(整體計(jì)算與逐像素計(jì)算)得到的值將非常相似,。兩者之間較大的差異可能表明芯片的質(zhì)量或?qū)嶒?yàn)的程序有問題,。
圖示:在數(shù)據(jù)點(diǎn)查看器中由黑框框出的值為單個(gè)像素的強(qiáng)度值。RP代表當(dāng)前像素(圓圈標(biāo)出的)的強(qiáng)度比例值,;P代表兩種波長(635nm,、532nm)各自的強(qiáng)度值。
Ratio SD(比例值的標(biāo)準(zhǔn)差)
定義:數(shù)據(jù)點(diǎn)中所有像素的強(qiáng)度比例值的標(biāo)準(zhǔn)差,。該數(shù)值的獲得是以逐個(gè)計(jì)算像素的比例值為基礎(chǔ)的,,并且已去除背景。
生物學(xué)相關(guān)信息:Ratio SD表示當(dāng)前數(shù)據(jù)點(diǎn)比值中間值的分布情況,。在“散點(diǎn)圖”中用Ratio SD與index作圖,,可更方便的根據(jù)用戶的要求來選擇和標(biāo)記數(shù)據(jù)點(diǎn)(例如當(dāng)Ratio SD大于3便標(biāo)為“壞點(diǎn)”)。也可與比值中間值配合,,用來驗(yàn)證表達(dá)差異較大的數(shù)據(jù)點(diǎn),,是否在數(shù)值分布水平方面也是可接受的(Ratio SD<2)。
Rgn Ratio——rR(回歸比例值)
定義:計(jì)算635nm/532nm強(qiáng)度比例值的第三種方法,。它是以兩種熒光的強(qiáng)度(635nm,,532nm)作圖,并通過回歸的方法確定最適曲線的斜率,。
生物學(xué)相關(guān)信息:回歸比例值并不區(qū)分背景像素和特征像素,,在計(jì)算時(shí)也不去除背景。因此回歸比例值可作為獨(dú)立的參照與比值中間值,、中值比例值進(jìn)行比較,。回歸比例值在檢驗(yàn)單個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)的質(zhì)量時(shí)很有效,,這是因?yàn)橛娠柡拖袼睾突覊m引起的過強(qiáng)信號對回歸比例值的計(jì)算的影響很大,。如整張芯片的回歸比例值的顯著大于比值中間值或中值比例值的話,則可能是PMT的設(shè)定過高或是芯片上的灰塵污染較多造成的,。
Rgn R2(回歸修正系數(shù)的平方值)
定義:Rgn R2是計(jì)算給定數(shù)據(jù)點(diǎn)的最小方差回歸擬合時(shí)的一個(gè)系數(shù),它決定了最終回歸的適合度,。它是回歸修正系數(shù)的平方值,,數(shù)值分布于0~1之間。
生物學(xué)相關(guān)信息:Rgn R2代表能用回歸曲線描述的像素?cái)?shù)占所有回歸像素的比例,。Rgn R2為1時(shí)代表所有的回歸像素都能用回歸曲線描述(像素都在一條直線上),;Rgn R2為0時(shí)代表回歸曲線不能描述任何一個(gè)像素。Rgn R2能有效的表述某一數(shù)據(jù)點(diǎn)的一致性,。點(diǎn)的強(qiáng)度不均勻(可能是樣品分布不均或雜交效率低)或意外缺失某一熒光,,將導(dǎo)致Rgn R2的值變小。在某一塊或整個(gè)芯片中大量點(diǎn)的Rgn R2值都較低,,說明可能是點(diǎn)樣的質(zhì)量較差或雜交的程序有問題,。
F Pixels(特征像素?cái)?shù))
定義:數(shù)據(jù)點(diǎn)中像素的數(shù)目,。請注意,這里的特征像素?cái)?shù)指的是構(gòu)成數(shù)據(jù)點(diǎn)的像素?cái)?shù),,而不是數(shù)據(jù)點(diǎn)查看器中的特征像素強(qiáng)度值,。
生物學(xué)相關(guān)信息:特征像素?cái)?shù)是數(shù)據(jù)點(diǎn)中的可觀測的像素?cái)?shù)。
B Pixels(背景像素?cái)?shù))
定義:構(gòu)成當(dāng)前數(shù)據(jù)點(diǎn)背景的像素?cái)?shù),,在數(shù)據(jù)點(diǎn)查看器的底部,緊接著數(shù)據(jù)像素?cái)?shù)(F Pixels)以B=’n’的形式顯示,。
生物學(xué)相關(guān)信息:背景像素?cái)?shù),,作為一項(xiàng)質(zhì)量控制的數(shù)值,可以與芯片上的所有的數(shù)據(jù)點(diǎn)進(jìn)行比較,。也可應(yīng)用于“散點(diǎn)圖”來進(jìn)行快速評價(jià)(用index序號與背景像素?cái)?shù)作圖),。假定整張芯片上的數(shù)據(jù)點(diǎn)的尺寸一致的話,特征像素?cái)?shù)與背景像素?cái)?shù)的之間的比值應(yīng)是穩(wěn)定的(數(shù)目大致相差8倍),。如芯片的背景像素?cái)?shù)異常增大(大于8倍特征像素?cái)?shù)),,說明數(shù)據(jù)點(diǎn)的定位圈比正常的要來的大。這種情況有可能是由于背景異常而引起的數(shù)據(jù)點(diǎn)的定位圈的尺寸增大,,在處理時(shí)要謹(jǐn)慎對待,。
Sum of Median(中間值之和)Sum of Mean(平均值之和)
定義:在兩種波長條件下,已去除背景的像素中間值或平均值的總和,。
生物學(xué)相關(guān)信息:如某一數(shù)據(jù)點(diǎn)的雙熒光的信號都較差,,則將得到較小的中間值之和。當(dāng)像素強(qiáng)度與背景水平相當(dāng)時(shí),,兩種波長的中值任何微小的變化會(huì)使比例值顯著的變大或變小,。因此對于中間值之和較小的數(shù)據(jù)點(diǎn)應(yīng)謹(jǐn)慎處理。與中間值之和相同,,平均值之和也向我們提供了數(shù)據(jù)點(diǎn)的一部分信息,。然而正如前面提到的,用平均值進(jìn)行分析時(shí),,其穩(wěn)定性比用中間值的要來的差些,。
Log Ratio(對數(shù)比例值)
定義:中值比例值的以2為底的對數(shù)。
生物學(xué)相關(guān)信息:對數(shù)比例值提供了一個(gè)反映表達(dá)活性成倍數(shù)變化的指標(biāo),。負(fù)數(shù)代表對照組樣品的表達(dá)強(qiáng)于實(shí)驗(yàn)組樣品,;正數(shù)代表對照組樣品的表達(dá)弱于實(shí)驗(yàn)組樣品。連續(xù)整數(shù)的變化代表相對活性比增大或減少2倍,。(如Log Ratio=2,,代表實(shí)驗(yàn)組活性比對照組強(qiáng)4倍;如Log Ratio=3,,代表實(shí)驗(yàn)組活性比對照組強(qiáng)8倍)
F635 Median-B635F532 Median-B532F635 Mean-B635F532 Mean-B532
定義:當(dāng)前數(shù)據(jù)點(diǎn)的已減去背景的像素強(qiáng)度中間值或平均值,。
生物學(xué)相關(guān)信息:這些值常應(yīng)用于中值比例值或均值比例值的計(jì)算,。因?yàn)橐褱p去背景(因此不需要在腳本文件中加入額外的代碼來實(shí)現(xiàn)去除背景的功能),所以這些數(shù)值比較適合于腳本文件的編寫,。在去除背景時(shí),高背景和弱表達(dá)的數(shù)據(jù)點(diǎn)會(huì)受到不同程度的影響,,因此這些值不應(yīng)再被應(yīng)用于質(zhì)量控制,,這時(shí)應(yīng)采用635nm、532nm的中間值,、平均值或中間值之和,。
Flags(標(biāo)記)
定義:見表格。
生物學(xué)相關(guān)信息:無,。
數(shù)據(jù)點(diǎn)類型 是否由用戶選定,? 定義 在“標(biāo)記”列中的數(shù)值
Good 是 用戶感興趣的數(shù)據(jù)點(diǎn) +100
Bad 是 不符合用戶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的 -100
Absent 自動(dòng) ID號在GAL文件中無法找到 -75
Not Found 自動(dòng) 自動(dòng)尋點(diǎn)時(shí)未探測到該點(diǎn) -50