第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院肝膽外科許朱定博士等在導(dǎo)師竇科峰教授的指導(dǎo)下，開展的“反義皮層肌動蛋白基因?qū)Ω伟┘?xì)胞功能影響的研究”日前結(jié)題,。該研究證明,，反義皮層肌動蛋白（Cortactin）基因有抑制肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的功能，從而為將該基因用作治療肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的靶基因提供了依據(jù),。

        肝細(xì)胞肝癌（HCC）是最常見的惡性腫瘤之一,，盡管診斷和治療技術(shù)取得了很大的進步，但3年,、5年的生存率分別在35%~62%和17%~50%,。而限制肝癌病人長期生存的主要原因是肝癌的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。研究表明,，惡性腫瘤較高的遷移運動能力是其發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的重要原因之一,，而皮層肌動蛋白參與肌動蛋白細(xì)胞骨架的調(diào)控。

        為了將反義Cortactin基因轉(zhuǎn)移入人肝癌細(xì)胞中,，觀察其表達效果及對細(xì)胞本身的影響,，以及該基因在肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中的作用，許朱定等用Trizol試劑法提取體外培養(yǎng)的人肝癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MHCC97總RNA,，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）擴增目的片段,，PCR產(chǎn)物及真核表達載體分別雙酶切后進行連接，并轉(zhuǎn)化入大腸桿菌Ecoli.dh5α擴增以獲得重組質(zhì)粒,，并將重組質(zhì)粒,、空質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染入人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞株進行擴增培養(yǎng)，分別繪制MHCC97/veet-cortactin（+）MHCC97/veet和MHCC97細(xì)胞生長曲線,，且進行Western-blot實驗及通過小室培養(yǎng)模型進行細(xì)胞侵襲力實驗,。

        結(jié)果顯示，RT-PCR獲得預(yù)期大小的特異性DNA片段,；經(jīng)PCR,、雙酶切鑒定及測序證實，人Cortactin基因cDNA片段已正確地反向插入真核表達載體中,；細(xì)胞生長曲線提示,，轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染該基因的肝癌細(xì)胞生長曲線相同；Western-blot實驗結(jié)果顯示,，轉(zhuǎn)染反義基因的肝癌細(xì)胞Cortactin呈低表達或不表達,；細(xì)胞侵襲力實驗表明，轉(zhuǎn)染有反義基因的肝癌細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)與未轉(zhuǎn)染的有非常顯著性差異（P<0.01）。