近日，四川大學(xué)華西醫(yī)院,、生物治療國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和腫瘤中心的王瑞,、鄧洪新等研究人員,，以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）總RNA為模板，采用RT-PCR擴(kuò)增轉(zhuǎn)染技術(shù),，成功建立一人新基因PCIA1細(xì)胞株,。該細(xì)胞株被命名為PCIA1基因，基因cDNA全長為1086bp,，編碼一個(gè)102個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì),，其在基因庫中的序列號為AY563006。

　　據(jù)介紹,，至2003年底人類基因組計(jì)劃已經(jīng)完成,，但大多數(shù)基因功能未知。因此,，克隆新基因并闡明其功能及基因間的相互作用,，是目前研究人員面臨的新課題和新挑戰(zhàn)。

　　近年來,，王瑞等研究人員在探討人的新基因中,，以HUVEC總RNA為模板，通過引物設(shè)計(jì),、RT-PCR擴(kuò)增,、重組真核表達(dá)載體構(gòu)建、HeLa細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染及G418抗性基因篩選等一系列技術(shù)處理后,，從而成功地構(gòu)建出一轉(zhuǎn)染穩(wěn)定的“人新基因PCIA1細(xì)胞株”,。

　　該細(xì)胞株經(jīng)RT-PCR檢測和重組質(zhì)粒酶切鑒定顯示：HUVEC總RNA擴(kuò)增物電泳，可見約309bp處有一特異性擴(kuò)增條帶,，與預(yù)期擴(kuò)增片段大小相符,；重組pcDNA-PCIA1經(jīng)測序證實(shí)，插入片段為PCIA1擴(kuò)增片段,，且插入方向正確,，PCIA1基因已穩(wěn)定轉(zhuǎn)染到HeLa細(xì)胞中，并表達(dá)PCIA1蛋白,。同時(shí),，免疫印跡分析還發(fā)現(xiàn)，PCIA1基因轉(zhuǎn)染的HeLa細(xì)胞的裂解物可見到特異性帶,，其亮度大于空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及未轉(zhuǎn)染的HeLa細(xì)胞,。提示真核表達(dá)重組質(zhì)粒pcDNA-PCIA1構(gòu)建成功，其PCIA1新基因轉(zhuǎn)染穩(wěn)定,，表達(dá)廣泛,，特異性強(qiáng)。

　　研究人員認(rèn)為，PCIA1基因位于人的染色體19p13.2-p13.1之間,，是一個(gè)單拷貝基因,。在不同的物種中，它的編碼區(qū)序列非常保守,，其結(jié)構(gòu)特征十分獨(dú)特,，它沒有跨膜區(qū)，也沒有信號肽序列,，不是膜蛋白,，也不是分泌蛋白，可能位于細(xì)胞核內(nèi),。同時(shí),，免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，PCIA1基因所表達(dá)的蛋白主要在核內(nèi),，推斷其可能是一個(gè)核內(nèi)的因子,。由于該基因分布廣泛，在基因進(jìn)化過程中非常保守,，因此可能是一個(gè)對細(xì)胞生長非常重要的基因,。PCIA1基因的成功建立，不僅為深入研究基因生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ),，也拓展了腫瘤的基因治療前景,。