如何解決色譜柱使用過程出現(xiàn)的問題
問題:                                    
不同色譜柱間差異
使用期間柱變化
原因:  
填料,、鍵合相不同
柱床破壞
鍵合相丟失
硅膠基質(zhì)溶解
強保留組分堆積堵塞
表現(xiàn):
保留因子(k),，分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k)，分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k),，柱效(N)
問題: 
柱外效應(yīng)
原因:
系統(tǒng)差異,、進(jìn)樣量大、進(jìn)樣閥與色譜柱之間,、色譜柱與檢測器之間的管路太長,、檢測器流通池體積大、接頭死體積大等,。 
表現(xiàn):
柱效（N)
問題:
分離效果變差 
原因:
流動相組分改變
流速改變
溫度改變
表現(xiàn):
保留因子(k),，柱效變化很小
保留因子(k)，分離因子（α）
保留因子(k),，柱效變化很小
問題:
柱平衡慢
原因:
重新平衡時間不夠 
柱超載 樣品量太大 
表現(xiàn):
保留因子(k),，柱效變化很小
保留因子(k)，柱效(N)
造成色譜峰（ 不對稱）拖尾的原因
1．色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷,；
2．柱頭有污染,；
3．樣品超載；
4．樣品溶劑不合適；
5．柱外效應(yīng),；
6．化學(xué)或二次保留（硅羥基）效應(yīng),；
7． 緩沖容量不足或不合適；
8． 重金屬污染,。
如何解決峰形拖尾的問題
A. 與化學(xué)有關(guān)的拖尾問題
1．流動相中,，加入30mM的三乙胺（用于堿性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物）， 未知化合物加醋酸三乙胺,；
2．如仍然拖尾,，將三乙胺換為二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
3.降低進(jìn)樣量至<1μg,。
B. 與色譜柱有關(guān)的拖尾問題
1.如柱頭處有強保留的樣品組分積聚,，反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇，加1%氫氧化銨混合液沖洗,；正向柱可用甲醇沖洗,；
2.使用保護(hù)柱。
C. 與HPLC系統(tǒng)有關(guān)的峰拖尾和峰加寬
1.進(jìn)樣體積過大,，（通常≤25μL）,；
2.進(jìn)樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大（最佳連接管應(yīng)<20cm，內(nèi)徑為0.007"）,；
3.檢測器流通池的體積過大,。