【摘要】 目的 探討應(yīng)激對(duì)大鼠行為的影響及谷氨酰胺(Gln)的調(diào)節(jié)作用,。
方法 選用Wistar大鼠30只, 隨機(jī)分為三組: Ⅰ組為對(duì)照組, Ⅱ組為應(yīng)激組, Ⅲ組為應(yīng)激+ Gln組,。其中Ⅰ、Ⅱ組飼以普通飼料, Ⅲ組給予補(bǔ)充2%Gln的飼料,。飼養(yǎng)2周后,以光電刺激作為應(yīng)激條件, 在Ⅱ組和Ⅲ組大鼠建立應(yīng)激模型, 觀察應(yīng)激大鼠在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和避暗實(shí)驗(yàn)中的行為改變以及Gln的作用,。
結(jié)果 與Ⅰ組和Ⅲ組相比, Ⅱ組大鼠在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中的自發(fā)活動(dòng)明顯增多, 避暗反應(yīng)率則顯著降低, 而Ⅰ組與Ⅲ組無顯著差異。
結(jié)論 應(yīng)激可使大鼠的行為發(fā)生異常改變, 而Gln則對(duì)其具有一定調(diào)節(jié)作用,。
【關(guān)鍵詞】 應(yīng)激 行為 谷氨酰胺
大量資料證明[1], 強(qiáng)烈應(yīng)激尤其是長(zhǎng)期慢性應(yīng)激嚴(yán)重影響著人類的身心健康,并導(dǎo)致情緒和行為的異常,。本實(shí)驗(yàn)在有關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上,建立心理應(yīng)激模型,觀察其對(duì)大鼠一般行為的影響, 并對(duì)Gln在機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)中的作用進(jìn)行初步探討。
材料與方法
一,、動(dòng)物及分組情況: 選用生長(zhǎng)期W istar大鼠30只,雌雄各半,體重100±20g,隨機(jī)分為三組: Ⅰ組為對(duì)照組, Ⅱ組為應(yīng)激組, Ⅲ組為應(yīng)激+Gln組,。其中Ⅰ、Ⅱ組飼以普通飼料, Ⅲ組給予補(bǔ)充 2%Gln的飼料,。各組動(dòng)物均于不銹鋼籠中單籠飼養(yǎng), 自由攝食飲水, 每周稱量一次體重,。
二、應(yīng)激模型的建立: 動(dòng)物飼養(yǎng)2周后, 以燈光和足底電擊作為條件和非條件刺激, 在Ⅱ組和Ⅲ組動(dòng)物建立應(yīng)激模型, 實(shí)驗(yàn)裝置及方法如下: 實(shí)驗(yàn)箱大小為 30×25×18cm , 箱底部由直徑014cm,、間隔015cm,、可以通電的不銹鋼棒構(gòu)成, 箱頂部裝有閃光燈,。實(shí)驗(yàn)時(shí), 將大鼠放入箱內(nèi)適應(yīng)1m in 后給予間斷不規(guī)則的光電刺激(電擊參數(shù): 40～60V ,AC,每隔5～15秒刺激015～5秒) , 持續(xù)5m in, 如此重復(fù)6天,于第7天僅給與燈光刺激而不給電擊。
三,、觀察指標(biāo)及測(cè)定方法
1. 自發(fā)及探究行為: 在動(dòng)物應(yīng)激期結(jié)束后采用曠場(chǎng)行為實(shí)驗(yàn)法[ 2 ], 觀察動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)的自發(fā)及探究行為,。實(shí)驗(yàn)裝置及方法如下: 實(shí)驗(yàn)箱大小為100×100×50cm , 底板用筆劃成 25 方格。實(shí)驗(yàn)時(shí)將動(dòng)物放在正中格中, 記錄其5min內(nèi)的活動(dòng)情況, 包括中央格內(nèi)停留時(shí)間,、穿行格數(shù),、直立次數(shù)及修飾次數(shù)等。
2. 避暗反應(yīng): 避暗實(shí)驗(yàn)箱分大,、小兩間, 小間為25×15×18cm , 亮燈且箱底部無電, 大間為 25×30×18cm , 黑暗且箱底通電,。實(shí)驗(yàn)時(shí), 將動(dòng)物置于亮燈一側(cè), 觀察5min內(nèi)動(dòng)物的避暗反應(yīng)情況。
3. 血漿中糖皮質(zhì)激素和促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)含量: 將動(dòng)物斷頭處死后取血, 以1%肝素抗凝, 3000rpm離心15min后取上清液, 用德普生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的放免試劑盒測(cè)定糖皮質(zhì)激素及ACTH,。
四,、統(tǒng)計(jì)分析: 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以x±s或中位數(shù)(M)表示, 曠場(chǎng)行為指標(biāo)、避暗潛伏期和逃避時(shí)間用秩和檢驗(yàn), 反應(yīng)率用χ2檢驗(yàn), 其余用 t 檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較,。
結(jié) 果
一,、血漿中糖皮質(zhì)激素及ACTH水平: 表1結(jié)果顯示, Ⅱ、Ⅲ組大鼠血漿中糖皮質(zhì)激素顯著高于Ⅰ組(P<0101) , 表明這兩組大鼠均處于應(yīng)激狀態(tài),。但Ⅲ組與Ⅱ組相比明顯降低( P < 0105) , 提示補(bǔ)充Gln 可減輕機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng),。血漿中ACTH 水平三組間無顯著性差異。
二,、曠場(chǎng)行為
從表2 可以看出, 與Ⅰ組和Ⅲ組相比, Ⅱ組大鼠在中央格內(nèi)的停留時(shí)間明顯縮短, 穿行格數(shù)則顯著增多(P< 0105) , 直立和修飾次數(shù)無顯著差異, 表明應(yīng)激使大鼠自發(fā)活動(dòng)增多, 而補(bǔ)充 Gln 可使應(yīng)激大鼠活動(dòng)減少,。
三、避暗反應(yīng): Ⅱ組大鼠的避暗反應(yīng)率僅 50% ,顯著低于Ⅰ組( P < 0105) , Ⅲ組則介于Ⅰ組和Ⅱ組之間, 但與二者均無顯著性差異(表3),。Ⅱ組大鼠的潛伏期和逃避時(shí)間與Ⅰ組和Ⅲ組相比雖有降低趨勢(shì), 但差異沒有顯著性,。
討 論
一、大鼠心理應(yīng)激模型的建立: 心理應(yīng)激是指機(jī)體通過認(rèn)知,、評(píng)價(jià)而察覺到應(yīng)激源的威脅時(shí)所產(chǎn)生的心理生理機(jī)能改變的過程,。關(guān)于心理應(yīng)激模型, 文獻(xiàn)報(bào)道較多的是束縛和電擊[ 3 ], 但都不可避免地帶有軀體應(yīng)激成分。本實(shí)驗(yàn)采用了最近文獻(xiàn)報(bào)道的一種較“純粹”的心理應(yīng)激模型[ 4 ], 即以燈光和電擊分別作為條件和非條件刺激建立條件反射,。當(dāng)僅有燈光出現(xiàn)時(shí), 動(dòng)物依然會(huì)產(chǎn)生緊張和恐懼心理, 而此時(shí)的軀體刺激已減少到極小, 因此主要是心理應(yīng)激成分在起作用,。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, 應(yīng)激大鼠血漿中糖皮質(zhì)激素顯著增高, 表明應(yīng)激模型是可行的。
二,、應(yīng)激對(duì)大鼠行為的影響及Gln的作用: 一般認(rèn)為, 應(yīng)激引起下丘腦垂體腎上腺軸的活動(dòng)增強(qiáng), 通過糖皮質(zhì)激素發(fā)揮作用, 從而導(dǎo)致一系列代謝和機(jī)能的改變,。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出, 應(yīng)激對(duì)大鼠的行為產(chǎn)生了一定的影響。在曠場(chǎng)行為實(shí)驗(yàn)中, 應(yīng)激大鼠在中央格內(nèi)的停留時(shí)間縮短, 穿行格數(shù)增多, 表明大鼠活動(dòng)增加, 可能是應(yīng)激早期的焦慮表現(xiàn),。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)主要反映了動(dòng)物的自發(fā)行為和探究活動(dòng), 其活動(dòng)數(shù)在一定程度上表明了CNS的興奮或抑制狀態(tài),。有研究表明[ 5 ],急性應(yīng)激期動(dòng)物行為活動(dòng)增多, 而慢性應(yīng)激期減少, 由此推測(cè)本實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)激大鼠可能尚處于急性期。
避暗是鼠類的一種習(xí)性。在本實(shí)驗(yàn)中, 應(yīng)激組大鼠有50%在5min內(nèi)不進(jìn)入暗室, 而進(jìn)入暗室者其潛伏期和逃避時(shí)間均較短, 這反映了應(yīng)激大鼠行為的異常; 同時(shí)又說明應(yīng)激大鼠抑郁和緊張,、焦慮同時(shí)存在的矛盾心理, 表明了動(dòng)物行為的復(fù)雜性,。這種復(fù)雜性可能與造成應(yīng)激狀態(tài)的刺激方式有關(guān)。近年來, 人們?cè)噲D從營(yíng)養(yǎng)和食物途徑尋找減輕應(yīng)激損害的方法并取得了一些進(jìn)展,。如有資料表明[ 6 ], 具有抗氧化作用的維生素如VC,、VE、B-胡蘿卜素和一些蔬菜,、水果可能有潛在的抗應(yīng)激作用,。由本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見, 補(bǔ)充Gln使應(yīng)激大鼠的自發(fā)活動(dòng)減少, 這可能對(duì)應(yīng)激早期的過度興奮所致的大鼠情緒和行為異常有一定改善作用。有文獻(xiàn)報(bào)道[ 7 ], 給臨床病人補(bǔ)充Gln在促進(jìn)病人康復(fù)的同時(shí)可對(duì)其情緒產(chǎn)生改善作用, 這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致,。
方法 選用Wistar大鼠30只, 隨機(jī)分為三組: Ⅰ組為對(duì)照組, Ⅱ組為應(yīng)激組, Ⅲ組為應(yīng)激+ Gln組,。其中Ⅰ、Ⅱ組飼以普通飼料, Ⅲ組給予補(bǔ)充2%Gln的飼料,。飼養(yǎng)2周后,以光電刺激作為應(yīng)激條件, 在Ⅱ組和Ⅲ組大鼠建立應(yīng)激模型, 觀察應(yīng)激大鼠在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和避暗實(shí)驗(yàn)中的行為改變以及Gln的作用,。
結(jié)果 與Ⅰ組和Ⅲ組相比, Ⅱ組大鼠在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中的自發(fā)活動(dòng)明顯增多, 避暗反應(yīng)率則顯著降低, 而Ⅰ組與Ⅲ組無顯著差異。
結(jié)論 應(yīng)激可使大鼠的行為發(fā)生異常改變, 而Gln則對(duì)其具有一定調(diào)節(jié)作用,。
【關(guān)鍵詞】 應(yīng)激 行為 谷氨酰胺
大量資料證明[1], 強(qiáng)烈應(yīng)激尤其是長(zhǎng)期慢性應(yīng)激嚴(yán)重影響著人類的身心健康,并導(dǎo)致情緒和行為的異常,。本實(shí)驗(yàn)在有關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上,建立心理應(yīng)激模型,觀察其對(duì)大鼠一般行為的影響, 并對(duì)Gln在機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)中的作用進(jìn)行初步探討。
材料與方法
一,、動(dòng)物及分組情況: 選用生長(zhǎng)期W istar大鼠30只,雌雄各半,體重100±20g,隨機(jī)分為三組: Ⅰ組為對(duì)照組, Ⅱ組為應(yīng)激組, Ⅲ組為應(yīng)激+Gln組,。其中Ⅰ、Ⅱ組飼以普通飼料, Ⅲ組給予補(bǔ)充 2%Gln的飼料,。各組動(dòng)物均于不銹鋼籠中單籠飼養(yǎng), 自由攝食飲水, 每周稱量一次體重,。
二、應(yīng)激模型的建立: 動(dòng)物飼養(yǎng)2周后, 以燈光和足底電擊作為條件和非條件刺激, 在Ⅱ組和Ⅲ組動(dòng)物建立應(yīng)激模型, 實(shí)驗(yàn)裝置及方法如下: 實(shí)驗(yàn)箱大小為 30×25×18cm , 箱底部由直徑014cm,、間隔015cm,、可以通電的不銹鋼棒構(gòu)成, 箱頂部裝有閃光燈,。實(shí)驗(yàn)時(shí), 將大鼠放入箱內(nèi)適應(yīng)1m in 后給予間斷不規(guī)則的光電刺激(電擊參數(shù): 40～60V ,AC,每隔5～15秒刺激015～5秒) , 持續(xù)5m in, 如此重復(fù)6天,于第7天僅給與燈光刺激而不給電擊。
三,、觀察指標(biāo)及測(cè)定方法
1. 自發(fā)及探究行為: 在動(dòng)物應(yīng)激期結(jié)束后采用曠場(chǎng)行為實(shí)驗(yàn)法[ 2 ], 觀察動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)的自發(fā)及探究行為,。實(shí)驗(yàn)裝置及方法如下: 實(shí)驗(yàn)箱大小為100×100×50cm , 底板用筆劃成 25 方格。實(shí)驗(yàn)時(shí)將動(dòng)物放在正中格中, 記錄其5min內(nèi)的活動(dòng)情況, 包括中央格內(nèi)停留時(shí)間,、穿行格數(shù),、直立次數(shù)及修飾次數(shù)等。
2. 避暗反應(yīng): 避暗實(shí)驗(yàn)箱分大,、小兩間, 小間為25×15×18cm , 亮燈且箱底部無電, 大間為 25×30×18cm , 黑暗且箱底通電,。實(shí)驗(yàn)時(shí), 將動(dòng)物置于亮燈一側(cè), 觀察5min內(nèi)動(dòng)物的避暗反應(yīng)情況。
3. 血漿中糖皮質(zhì)激素和促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)含量: 將動(dòng)物斷頭處死后取血, 以1%肝素抗凝, 3000rpm離心15min后取上清液, 用德普生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的放免試劑盒測(cè)定糖皮質(zhì)激素及ACTH,。
四,、統(tǒng)計(jì)分析: 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以x±s或中位數(shù)(M)表示, 曠場(chǎng)行為指標(biāo)、避暗潛伏期和逃避時(shí)間用秩和檢驗(yàn), 反應(yīng)率用χ2檢驗(yàn), 其余用 t 檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較,。
結(jié) 果
一,、血漿中糖皮質(zhì)激素及ACTH水平: 表1結(jié)果顯示, Ⅱ、Ⅲ組大鼠血漿中糖皮質(zhì)激素顯著高于Ⅰ組(P<0101) , 表明這兩組大鼠均處于應(yīng)激狀態(tài),。但Ⅲ組與Ⅱ組相比明顯降低( P < 0105) , 提示補(bǔ)充Gln 可減輕機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng),。血漿中ACTH 水平三組間無顯著性差異。
二,、曠場(chǎng)行為
從表2 可以看出, 與Ⅰ組和Ⅲ組相比, Ⅱ組大鼠在中央格內(nèi)的停留時(shí)間明顯縮短, 穿行格數(shù)則顯著增多(P< 0105) , 直立和修飾次數(shù)無顯著差異, 表明應(yīng)激使大鼠自發(fā)活動(dòng)增多, 而補(bǔ)充 Gln 可使應(yīng)激大鼠活動(dòng)減少,。
三、避暗反應(yīng): Ⅱ組大鼠的避暗反應(yīng)率僅 50% ,顯著低于Ⅰ組( P < 0105) , Ⅲ組則介于Ⅰ組和Ⅱ組之間, 但與二者均無顯著性差異(表3),。Ⅱ組大鼠的潛伏期和逃避時(shí)間與Ⅰ組和Ⅲ組相比雖有降低趨勢(shì), 但差異沒有顯著性,。
討 論
一、大鼠心理應(yīng)激模型的建立: 心理應(yīng)激是指機(jī)體通過認(rèn)知,、評(píng)價(jià)而察覺到應(yīng)激源的威脅時(shí)所產(chǎn)生的心理生理機(jī)能改變的過程,。關(guān)于心理應(yīng)激模型, 文獻(xiàn)報(bào)道較多的是束縛和電擊[ 3 ], 但都不可避免地帶有軀體應(yīng)激成分。本實(shí)驗(yàn)采用了最近文獻(xiàn)報(bào)道的一種較“純粹”的心理應(yīng)激模型[ 4 ], 即以燈光和電擊分別作為條件和非條件刺激建立條件反射,。當(dāng)僅有燈光出現(xiàn)時(shí), 動(dòng)物依然會(huì)產(chǎn)生緊張和恐懼心理, 而此時(shí)的軀體刺激已減少到極小, 因此主要是心理應(yīng)激成分在起作用,。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, 應(yīng)激大鼠血漿中糖皮質(zhì)激素顯著增高, 表明應(yīng)激模型是可行的。
二,、應(yīng)激對(duì)大鼠行為的影響及Gln的作用: 一般認(rèn)為, 應(yīng)激引起下丘腦垂體腎上腺軸的活動(dòng)增強(qiáng), 通過糖皮質(zhì)激素發(fā)揮作用, 從而導(dǎo)致一系列代謝和機(jī)能的改變,。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出, 應(yīng)激對(duì)大鼠的行為產(chǎn)生了一定的影響。在曠場(chǎng)行為實(shí)驗(yàn)中, 應(yīng)激大鼠在中央格內(nèi)的停留時(shí)間縮短, 穿行格數(shù)增多, 表明大鼠活動(dòng)增加, 可能是應(yīng)激早期的焦慮表現(xiàn),。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)主要反映了動(dòng)物的自發(fā)行為和探究活動(dòng), 其活動(dòng)數(shù)在一定程度上表明了CNS的興奮或抑制狀態(tài),。有研究表明[ 5 ],急性應(yīng)激期動(dòng)物行為活動(dòng)增多, 而慢性應(yīng)激期減少, 由此推測(cè)本實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)激大鼠可能尚處于急性期。
避暗是鼠類的一種習(xí)性。在本實(shí)驗(yàn)中, 應(yīng)激組大鼠有50%在5min內(nèi)不進(jìn)入暗室, 而進(jìn)入暗室者其潛伏期和逃避時(shí)間均較短, 這反映了應(yīng)激大鼠行為的異常; 同時(shí)又說明應(yīng)激大鼠抑郁和緊張,、焦慮同時(shí)存在的矛盾心理, 表明了動(dòng)物行為的復(fù)雜性,。這種復(fù)雜性可能與造成應(yīng)激狀態(tài)的刺激方式有關(guān)。近年來, 人們?cè)噲D從營(yíng)養(yǎng)和食物途徑尋找減輕應(yīng)激損害的方法并取得了一些進(jìn)展,。如有資料表明[ 6 ], 具有抗氧化作用的維生素如VC,、VE、B-胡蘿卜素和一些蔬菜,、水果可能有潛在的抗應(yīng)激作用,。由本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見, 補(bǔ)充Gln使應(yīng)激大鼠的自發(fā)活動(dòng)減少, 這可能對(duì)應(yīng)激早期的過度興奮所致的大鼠情緒和行為異常有一定改善作用。有文獻(xiàn)報(bào)道[ 7 ], 給臨床病人補(bǔ)充Gln在促進(jìn)病人康復(fù)的同時(shí)可對(duì)其情緒產(chǎn)生改善作用, 這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致,。
