(一)酶標(biāo)記抗體組化法
酶標(biāo)抗體技術(shù)是通過共價(jià)鍵將酶連接在抗體上,,制成酶標(biāo)抗體,再借酶對底物的特異催化作用,,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,,于普通顯微鏡或電鏡下進(jìn)行細(xì)胞表面及細(xì)胞內(nèi)各種抗原成分的定位,根據(jù)酶標(biāo)記的部位可將其分為直接法(一步法),、間接法(二步法),、橋聯(lián)法(多步法)等,用于標(biāo)記的抗體可以是用免疫動物制備的多克隆抗體或特異性的單克隆抗體,,最好是特異性強(qiáng)的高效價(jià)的單克隆抗體,。直接法是將酶直接標(biāo)記在第一抗體上,間接法是將酶標(biāo)記在第二抗體上,,檢測組織細(xì)胞內(nèi)的特定抗原物質(zhì),。目前通常選用免疫酶組織化學(xué)間接染色法。
(二)葡萄球菌蛋白A(SPA)免疫檢測技術(shù)
葡萄球菌蛋白A(SPA)是一種從金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁分離的蛋白質(zhì),,由于它的一些免疫學(xué)特性,,使其成為免疫學(xué)上一種極為有用的工具。葡萄球菌蛋白A(SPA)免疫檢測技術(shù)是根據(jù)它能與多種動物IgG的Fc 端結(jié)合的原理,,用SPA標(biāo)記物(酶,、熒光素、放射性物質(zhì)等)顯示抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的各種免疫檢測實(shí)驗(yàn),。
SPA 具有和人及多種動物如豚鼠,、兔、豬,、犬、小鼠,、猴等 IgG 結(jié)合的能力,,可解決不同動物檢測時(shí),,需分別標(biāo)記相對應(yīng)的二抗的問題。 SPA結(jié)合部位是Fc段,,這種結(jié)合不會影響抗體的活性,。 SPA具有的結(jié)合力是雙價(jià)的,每個(gè)SPA分子可以同時(shí)結(jié)合兩個(gè)IgG分子,,也可一方面同IgG相結(jié)合,,一方面與標(biāo)記物如熒光素、過氧化物酶,、,、膠體金和鐵蛋白等相結(jié)合。但需注意的是SPA 對 IgG 免疫球蛋白亞型的結(jié)合有選擇性,,如SPA與人IgG亞型:IgG 1,、IgG 2和IgG 4有結(jié)合力,唯獨(dú)不結(jié)合IgG 3,。只結(jié)合IgA 2 ,,而不結(jié)合 IgA 1。SPA與禽類血清IgG不結(jié)合,。因此應(yīng)注意可能出現(xiàn)的假陰性結(jié)果,。SPA 常用 HRP 標(biāo)記,可應(yīng)用于間接法,。
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