使用方法:
1 血球計(jì)數(shù)板
視待測(cè)菌懸液濃度,,加無(wú)菌水適當(dāng)稀釋(斜面一般稀釋100倍),,以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。
2.取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊,,在計(jì)數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片,。
3.將菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,,從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴(不宜過(guò)多),,讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計(jì)數(shù)區(qū),勿使氣泡產(chǎn)生,,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液,。也可以將菌懸液直接滴加在計(jì)數(shù)區(qū)上(不要使計(jì)數(shù)區(qū)兩邊平臺(tái)沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片后,,造成計(jì)數(shù)區(qū)深度的升高),,然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡),。
4.靜置片刻,,使細(xì)胞沉降到計(jì)數(shù)板上,,不再隨液體漂移。將血球計(jì)數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺(tái)上夾穩(wěn),,先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后,再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù),。由于生活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近,觀察時(shí)應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。
5.計(jì)數(shù)時(shí)若計(jì)數(shù)區(qū)是由16個(gè)大方格組成,,按對(duì)角線方位,,數(shù)左上,、左下,、右上,、右下的4個(gè)大方格(即100小格)的菌數(shù)。如果是25個(gè)大方格組成的計(jì)數(shù)區(qū),,除數(shù)上述四個(gè)大方格外,還需數(shù)中央1個(gè)大方格的血球計(jì)數(shù)板,。菌數(shù)(即80個(gè)小格),。為了保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性,,避免重復(fù)計(jì)數(shù)和漏記,在計(jì)數(shù)時(shí),,對(duì)沉降在格線上的細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)應(yīng)有統(tǒng)一的規(guī)定,。如菌體位于大方格的雙線上,,計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線,,以減少誤差,。即位于本格上線和左線上的細(xì)胞計(jì)入本格,本格的下線和右線上的細(xì)胞按規(guī)定計(jì)入相應(yīng)的格中,。見(jiàn)右圖:即本格中計(jì)數(shù)細(xì)胞為3個(gè),。
6.對(duì)于出芽的酵母菌,芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí),,即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算,。每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2-3次(每次數(shù)值不應(yīng)相差過(guò)大,否則應(yīng)重新操作),按公式計(jì)算出每mL(g)菌懸液所含細(xì)胞數(shù)量,。
7.測(cè)數(shù)完畢,,取下蓋玻片,用水將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈,,切勿用硬物洗刷或抹擦,,以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干,,放入盒內(nèi)保存,。
材質(zhì):載玻片是在實(shí)驗(yàn)時(shí)用來(lái)放置實(shí)驗(yàn)材料的玻璃片,呈長(zhǎng)方形,,較厚,,透光性較好;蓋玻片是蓋在材料上,,避免液體和物鏡相接觸,,以免污染物鏡,呈正方形,,較薄,,透光性較好。
紅細(xì)胞計(jì)數(shù)公式:
紅細(xì)胞數(shù)/L=N*25/5*10*10^6*200
N為:五個(gè)中方格的RBC總數(shù)
N*25/5為:中央大方格RBC總數(shù)(即:0.1mm(ul)的RBC總數(shù))
N*25/5*10為:1mm(ul)RBC總數(shù)
N*25/5*10*10^6為:1L的RBC總數(shù)
*200為血液的稀釋倍數(shù)
公式簡(jiǎn)化后:紅細(xì)胞數(shù)/L=N/100*10^12
作用:載玻片是用顯微鏡觀察東西詩(shī)用來(lái)放東西的玻璃片,,然后將蓋玻片放置其上,,用作觀察生物。
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