血細胞計數(shù)的誤差分別來源于技術誤差和固有誤差。其中由于操作人員采血不順利,,器材處理,、使用不當,稀釋不準確,,細胞識別錯誤等因素所造成的誤差屬技術誤差,;而由于儀器(計數(shù)板、蓋片,、吸管等)不夠準確與精密帶來的誤差稱儀器誤差,,由于細胞分布不均勻等因素帶來的細胞計數(shù)誤差屬于分布誤差或計數(shù)域誤差(filed error)。儀器誤差和分布誤差統(tǒng)稱為固有誤差或系統(tǒng)誤差,。技術誤差和儀器誤差可通過規(guī)范操作,、提高熟練程度和校正儀器而避免或糾正,但細胞分布誤差卻難于徹底消除,。因此,,搞好細胞計數(shù)的質量控制一般需采用以下措施。
1.避免技術誤差,,糾正儀器誤差
(1)所用器材均應清潔干燥,,計數(shù)板,、血蓋片、微量吸管及刻度吸管的規(guī)格應符合要求或經過校正,。①計數(shù)板的鑒定:要求計數(shù)室的臺面光滑,、透明,劃線清晰,,計數(shù)室劃線面積準確,。必要時采用嚴格校正的目鏡測微計測量計數(shù)室的邊長與底面積,用微米千分尺測量計數(shù)室的深度,。美國國家標準局(NBS)規(guī)定每個大方格邊長的誤差應小于1%,,即1±0.01mm,深度誤差應小于2%,,即0.1±0.002mm,。若超過上述標準,應棄之不用,。②血蓋片應具有一定的重量,,平整、光滑,、無裂痕,,厚薄均勻一致,可使用卡尺多點測量(至少在9個點),,不均勻度在0.002mm之內,。必要時采用平面平行儀進行測量與評價,要求呈現(xiàn)密集平行的直線干涉條紋,。最簡單的評價方法是將潔凈的蓋片緊貼于干燥的平面玻璃上,,若能吸附一定的時間不脫落,落下時呈弧線形旋轉,,表示蓋片平整,、厚薄均勻。同時,,合格的蓋片放置在計數(shù)室表面后,,與支持柱緊密接觸的部位可見到彩虹。精選出的蓋片與其他蓋片緊密重合后,,在掠射光線下觀察,,如見到完整平行的彩虹條紋表示另一枚蓋片質量也符合要求。③目前臨床實驗室多采用一次性微量采血管采集毛細血管血,,除注意定點購買使用信譽較好廠家的產品外,,還應對每一批量的采血管進行抽樣檢查,可通過水銀稱重法或有色溶液比色法進行校正,誤差不應超過±1%,。
(2)細胞稀釋液應新鮮,、無雜質微粒。
(3)嚴格操作,,從消毒,、采血、稀釋,、充池到計數(shù)都應規(guī)范,,尤其應注意的是血樣稀釋及充池時既要作到充分混勻,又要防止劇烈震蕩為破壞紅細胞,。必須一次性充滿計數(shù)室,,防止產生氣泡,充入細胞懸液的量以不超過計數(shù)室臺面與血蓋片之間的矩形邊緣為宜,。
(4)報告法定計量單位,。
2.縮小計數(shù)域誤差或分布誤差 由于血細胞在充入計數(shù)室后呈隨機分布或稱Poisson分布( ),而我們所能計數(shù)的細胞分布范圍是有限的,,由此造成的計數(shù)誤差稱為計數(shù)域誤差或分布誤差,。縮小這種誤差的有效方法就是盡量擴大細胞計數(shù)范圍和計數(shù)數(shù)目,,一般先進行誤差估計,,然后決定所需計數(shù)的數(shù)目和計數(shù)范圍,只要能將誤差控制在允許范圍內即可,。Berkson指出,當使用同一支吸管,、同一面計數(shù)室,,計數(shù)0.2mm2面積的細胞數(shù),有望將 CV控制在可接受的7%以內,。對于紅細胞計數(shù)而言,,由于紅細胞數(shù)量較多,在計數(shù)室中顯得比較“擁擠”,,根據(jù)Poisson公式( )推斷,, 。欲將誤差控制在變異百分數(shù)5%以內,,至少需要在計數(shù)室中計數(shù)400個紅細胞,,因此要求計數(shù)五個中方格的紅細胞。事實上Berkson還通過實驗證明,,紅細胞的計數(shù)域誤差為s=0.92 ,,較理論誤差(Poisson分布誤差)要小。
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