使用方法:
1 血球計數(shù)板
視待測菌懸液濃度,加無菌水適當稀釋(斜面一般稀釋100倍),,以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度,。
2.取潔凈的血球計數(shù)板一塊,在計數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片,。
3.將菌懸液搖勻,,用滴管吸取少許,從計數(shù)板中間平臺兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴(不宜過多),,讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數(shù)區(qū),,勿使氣泡產(chǎn)生,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液,。也可以將菌懸液直接滴加在計數(shù)區(qū)上(不要使計數(shù)區(qū)兩邊平臺沾上菌懸液,,以免加蓋蓋玻片后,造成計數(shù)區(qū)深度的升高),,然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡),。
4.靜置片刻,使細胞沉降到計數(shù)板上,,不再隨液體漂移。將血球計數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩(wěn),,先在低倍鏡下找到計數(shù)區(qū)后,,再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計數(shù)。由于生活細胞的折光率和水的折光率相近,觀察時應減弱光照的強度,。
5.計數(shù)時若計數(shù)區(qū)是由16個大方格組成,,按對角線方位,數(shù)左上,、左下,、右上、右下的4個大方格(即100小格)的菌數(shù),。如果是25個大方格組成的計數(shù)區(qū),,除數(shù)上述四個大方格外,還需數(shù)中央1個大方格的血球計數(shù)板,。菌數(shù)(即80個小格),。為了保證計數(shù)的準確性,避免重復計數(shù)和漏記,,在計數(shù)時,,對沉降在格線上的細胞的統(tǒng)計應有統(tǒng)一的規(guī)定。如菌體位于大方格的雙線上,,計數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線,,數(shù)左線不數(shù)右線,以減少誤差,。即位于本格上線和左線上的細胞計入本格,,本格的下線和右線上的細胞按規(guī)定計入相應的格中。見右圖:即本格中計數(shù)細胞為3個,。
6.對于出芽的酵母菌,,芽體達到母細胞大小一半時,即可作為兩個菌體計算,。每個樣品重復計數(shù)2-3次(每次數(shù)值不應相差過大,,否則應重新操作),按公式計算出每mL(g)菌懸液所含細胞數(shù)量,。
7.測數(shù)完畢,,取下蓋玻片,用水將血球計數(shù)板沖洗干凈,,切勿用硬物洗刷或抹擦,,以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風機吹干,,放入盒內(nèi)保存,。
材質(zhì):載玻片是在實驗時用來放置實驗材料的玻璃片,呈長方形,,較厚,,透光性較好,;蓋玻片是蓋在材料上,避免液體和物鏡相接觸,,以免污染物鏡,,呈正方形,較薄,,透光性較好,。
紅細胞計數(shù)公式:
紅細胞數(shù)/L=N*25/5*10*10^6*200
N為:五個中方格的RBC總數(shù)
N*25/5為:中央大方格RBC總數(shù)(即:0.1mm(ul)的RBC總數(shù))
N*25/5*10為:1mm(ul)RBC總數(shù)
N*25/5*10*10^6為:1L的RBC總數(shù)
*200為血液的稀釋倍數(shù)
公式簡化后:紅細胞數(shù)/L=N/100*10^12
作用:載玻片是用顯微鏡觀察東西詩用來放東西的玻璃片,然后將蓋玻片放置其上,,用作觀察生物,。
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