細胞計數(shù)法是用來計數(shù)細胞懸液中細胞數(shù)量的一種方法。一般利用計數(shù)板(血球計數(shù)板)進行,。即可用于分離(散)細胞培養(yǎng)接種前計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,,也可用于對培養(yǎng)物的細胞數(shù)量進行計數(shù)。不論計數(shù)的對象如何,,均須制備分散的細胞懸液,。
一、步驟
1、制備細胞懸液:對于懸液培養(yǎng)的細胞,,可直接進行下面的步驟2(計數(shù)與計算過程),。如果計數(shù)對象為貼壁生長的細胞,首先需將培養(yǎng)物按如下步驟制備成細胞懸液,。
1),、終止培養(yǎng),將培養(yǎng)液吸出,,用PBS洗培養(yǎng)物一次,。
2)、給培養(yǎng)瓶內(nèi)加入1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,,于37℃消化3~5min ,。期間不斷在鏡下觀察。當細胞變圓接近脫壁時,,棄消化液,。
3)、加入一定量的培養(yǎng)液(如果這些培養(yǎng)細胞不再有用,,可加PBS),,用吸管吹打,使細胞脫壁而制成細胞懸液,。
2,、計數(shù)與計算過程
1)、在細胞計數(shù)板中央放置計數(shù)專用的蓋玻片,。
2),、用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數(shù)板凹蹧處流出懸液,,至蓋玻片被液體充滿為止,。
3)、置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細胞總數(shù),。對于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者,,對于細胞團按單個細胞計數(shù)。
4),、按下式計數(shù)細胞懸液的密度:細胞密度=(4個大格細胞總數(shù)/4)×104個/ml ,。
二、注意事項:
1),、務必使分散成單個細胞,取樣計數(shù)前,,充分混勻細胞懸液,。
2)、顯微鏡下計數(shù)時,,遇到2個以上細胞組成的細胞團,,應按單個細胞計算,。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分,。
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