血細(xì)胞分析儀是醫(yī)院臨床檢驗(yàn)應(yīng)用非常廣泛的儀器之一，隨著近幾年計(jì)算機(jī)技術(shù)的日新月異的發(fā)展,，血細(xì)胞分析的技術(shù)也從三分類轉(zhuǎn)向五分類，從二維空間進(jìn)而轉(zhuǎn)向三維空間,，而且我們也注意到現(xiàn)代血細(xì)胞分析儀的五分類技術(shù)許多采用了和當(dāng)今非常先進(jìn)的流式細(xì)胞儀相同的技術(shù),，如散射光檢測(cè)技術(shù)、鞘流技術(shù),、激光技術(shù)等等,。本文重點(diǎn)就五分類血細(xì)胞分析儀器的檢測(cè)方法及其應(yīng)用加以闡述。
1,、電阻抗,、高頻電導(dǎo)及激光散射聯(lián)合檢測(cè)法
這是Coutler公司1987年推出的新技術(shù)，血球懸浮在電解液中,，用一定的電流通過傳感器的內(nèi)外兩個(gè)電極,，由于血細(xì)胞電阻抗很大，當(dāng)血細(xì)胞通過兩個(gè)電極時(shí),，電極間阻抗瞬間增大,，形成幅度與血細(xì)胞體積成正比的電脈沖，根據(jù)脈沖的大小可測(cè)出細(xì)胞的體積,。在測(cè)量紅細(xì)胞時(shí),，利用一個(gè)脈沖甄別器，將幅度較小的血小板脈沖去掉,，保留紅細(xì)胞和白細(xì)胞脈沖,，因血液中白胞的數(shù)量不及紅細(xì)胞的1/500，故其總數(shù)據(jù)近似認(rèn)為是對(duì)紅細(xì)胞計(jì)數(shù),。在測(cè)量白細(xì)胞時(shí),，利用溶血素，使紅細(xì)胞溶解,，再對(duì)剩下的白細(xì)胞計(jì)數(shù),。在對(duì)血小板計(jì)數(shù)時(shí)，調(diào)低脈沖甄別器的閾值,，計(jì)出總數(shù),，再減去紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)（其中已包括白細(xì)胞的計(jì)數(shù)），即為血小板計(jì)數(shù),。由于不同類型但體積相同的細(xì)胞產(chǎn)生的脈沖幅度相同,，故僅靠體積是不能完全區(qū)分,，利用高頻電導(dǎo)法和激光散射分析白細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)可以彌補(bǔ)這一缺陷。雖然細(xì)胞壁不能使低頻電流通過,，但能通過高頻電流,，細(xì)胞核的大小和密度不同，它們對(duì)高頻電流的阻抗也不同,，因此可以用來區(qū)分白細(xì)胞,。激光散射技術(shù)主要用來檢查細(xì)胞膜表面特征和內(nèi)部結(jié)構(gòu)。激光散射對(duì)細(xì)胞顆粒的結(jié)構(gòu)和密度的區(qū)分能力強(qiáng),，粗顆粒產(chǎn)生的光散射比細(xì)顆粒強(qiáng),，借此可將粒細(xì)胞區(qū)分開來，美國(guó)COULTER公司的STKS,、MAXM系列血細(xì)胞分析儀五分類就是利用電阻法,、高頻電導(dǎo)及激光散射聯(lián)合檢測(cè)法。
2,、光散射和細(xì)胞化學(xué)染色聯(lián)合檢測(cè)法
它利用激光散射和過氧化物酶染色技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分類,。嗜酸性粒細(xì)胞有很強(qiáng)的過氧化氫酶活性，中性粒細(xì)胞漿內(nèi)含有較為豐富的過氧化氫酶,，單核細(xì)胞次之,，原始細(xì)胞則極少，而淋巴細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞則缺管此酶,。使用微量血液經(jīng)與含有清洗劑和甲醛的高滲液體進(jìn)行適當(dāng)稀釋并孵育幾十秒鐘,，此時(shí)細(xì)胞被清洗劑所破壞，白細(xì)胞漿內(nèi)酶固定,，此后繼續(xù)再進(jìn)行第二次反應(yīng),，加入過氧化氫和四氫一萘酚加熱，此時(shí)待測(cè)細(xì)胞中過氧化氫酶分解過氧化氫產(chǎn)生氧,，后者使四氯一萘酚顯色并沉淀定位于含酶的顆粒中,，此類細(xì)胞經(jīng)激光束，由于光散射及細(xì)胞大小不同而被分類,。顯然暑堿性細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞、原始細(xì)胞由于不含此酶,，不能被檢測(cè),，因此一些儀器專門設(shè)置了嗜堿性細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)，它的測(cè)量通道采用時(shí)間差的方法,，與RBC/PLT的測(cè)量系統(tǒng)共用一個(gè)通道,。由于試劑的作用，血液中除嗜堿性細(xì)胞外,，其它細(xì)胞均被溶解,。嗜堿性細(xì)胞隨同其它細(xì)胞裸核量產(chǎn)生細(xì)胞分布圖,。完整的嗜堿性細(xì)胞呈高狹角散射，定位于圖上半部,，裸粒位于下半部,，不同裸粒因結(jié)構(gòu)不同，在X軸分布不同,。單個(gè)核位于左方,，分葉越多越靠右方。計(jì)算機(jī)分析分葉核與單個(gè)核角散射峰比例,，其比值即為分析儀所報(bào)告的結(jié)果,。TECHNICON H系列分析儀采用的就是這種技術(shù)。
3,、電阻抗和射頻電導(dǎo)聯(lián)合檢測(cè)法
這種方法是分別采用四個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)來檢測(cè)不同類型的細(xì)胞①淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮淮中加入溶血?jiǎng)┦辜t細(xì)胞溶解,，而使白細(xì)胞保持完整,，細(xì)胞漿及核形態(tài)近似于生理狀態(tài)，當(dāng)這些細(xì)胞通過檢測(cè)系統(tǒng)時(shí),，對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行電阻抗法（測(cè)量細(xì)胞體積）和射頻電導(dǎo)法（檢測(cè)細(xì)胞核和顆粒密度）的聯(lián)合檢測(cè),，結(jié)果將細(xì)胞分成淋巴細(xì)胞、單核細(xì)和中性粒細(xì)胞三個(gè)群體,。②嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞兩種檢測(cè)系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮淮中加入特殊的溶血?jiǎng)?，除嗜酸性?xì)胞和嗜堿性細(xì)胞外，其他細(xì)胞均被溶解或萎縮,，再對(duì)保持完整的嗜酸性細(xì)胞或嗜堿性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),。③幼稚細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮淮中加入硫化氨基酸，由于占位不同,，結(jié)合在幼稚細(xì)胞的氨基酸比成熟細(xì)胞多,，且對(duì)溶血?jiǎng)┯械挚棺饔茫?dāng)加入溶血?jiǎng)r(shí),，成熟細(xì)胞被溶解,，只保留著可能存在的幼稚細(xì)胞用來計(jì)數(shù)。
目前日本東亞公司的NE1500,、SYSNEX公司的SE9000血細(xì)胞分析儀就是采用這種方法進(jìn)行五分類的,。
4、多角度激光偏振光散射檢測(cè)法
采用這種技術(shù)的儀器使用鞘流淮將標(biāo)本血稀釋,，稀釋后白細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài),，只有嗜堿性細(xì)胞由于其吸濕的特性而使細(xì)胞結(jié)構(gòu)有輕微改變。紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白在高滲透壓的作用下,，從細(xì)胞中分離出來,。而鞘流的水份則進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi),，使細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)仍然完整，它與鞘流的折光系數(shù)相同,，不影響白細(xì)胞的檢測(cè),。儀器同時(shí)從四個(gè)角度來檢測(cè)通過激光束的細(xì)胞所產(chǎn)生的散射光，0°前角散射光用來測(cè)定細(xì)胞的體積,，10°狹角散射光用來測(cè)定細(xì)胞結(jié)構(gòu),，90°垂直散射光對(duì)細(xì)胞內(nèi)部顆粒及細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行測(cè)量，90°消偏振光散射將嗜酸性細(xì)胞從中性粒細(xì)胞和其它細(xì)胞中分離出來,。ABBOTT公司的CD-3000,，CD-3500血細(xì)胞分析儀采用了此技術(shù)。
利用上述方法進(jìn)行五分類的儀器,，最終結(jié)果均呈現(xiàn)在高分辨率的白細(xì)胞分布圖上,。運(yùn)用計(jì)算機(jī)圖象技術(shù)，以各種彩色象素代表一定的細(xì)胞濃度,，使細(xì)胞亞群和異常情況易于識(shí)別,，可以從三維空間的不同方位觀察分離的白細(xì)胞亞群。通過某種操作,，使三維軸旋轉(zhuǎn),，就可展示不同方位的細(xì)胞分布情況。
http://bbs.aibaoyl.com/
