6月17日,，由生物谷主辦的“2016（第三屆）基因編輯研討會(huì)”在滬隆重召開。中國科學(xué)院上海生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所李勁松研究員為了我們帶來了題為“當(dāng)單倍體干細(xì)胞遇上CRISPR/Cas9”的精彩報(bào)告,。

李勁松研究員2007結(jié)束在洛克菲勒大學(xué)的博士后研究，回國擔(dān)任生化細(xì)胞所研究所研究員,，研究組長，先后獲得“百人計(jì)劃”,，“杰出青年基因”支持,，研究成果2011年和2012年兩次入選“中國科學(xué)十大進(jìn)展”，率先建立小鼠的孤雄單倍體胚胎干細(xì)胞,，并首次將Crispr-cas9技術(shù)應(yīng)用于小鼠白內(nèi)障疾病即個(gè)體水平的治療,。

本次會(huì)議，李勁松教授首先從單倍體產(chǎn)生的歷史開始,，為大家介紹了小鼠孤雄單倍體胚胎干細(xì)胞的建立,。孤雄單倍體胚胎干細(xì)胞的建立有兩種方法，分別是向去核的卵母細(xì)胞中注入精子,，讓其發(fā)育到囊胚,，然后體外建系，通過流式分選的方法富集單倍體,?；蛘呷コ芫训拇圃耍屍浒l(fā)育到囊胚,，然后體外建系,，通過流式分選的方法富集單倍體。孤雄單倍體可以使卵子受精,，產(chǎn)生小鼠,，稱之為“半克隆小鼠”。毫無疑問,，孤雄單倍體的建立,，相當(dāng)于獲得了可以體外進(jìn)行遺傳操作的“人造精子”。但李教授表示,，單倍體的“受精能力”很低（半克隆小鼠出生效率大約4%,，且其中一半發(fā)育阻滯），且會(huì)隨細(xì)胞的傳代逐漸丟失,，通過將調(diào)控雄性印記的H19和Gtl2表達(dá)的H19-DMR和Gtl2-DMR敲除后,，半克隆小鼠出生效率能提高到20%多，且基本無發(fā)育阻滯小鼠,。

隨后,，李勁松教授講解了結(jié)合CRISPR-Cas9技術(shù)對單倍體干細(xì)胞進(jìn)行遺傳編輯的應(yīng)用和優(yōu)勢,。首先，利用這種“人造精子”,，可以快速制備基因編輯小鼠模型,。比如：多基因敲除和敲入小鼠模型。其次,，利用H19-DM和Gtl2-DMR雙敲的孤雄單倍體攜帶CRISPR-Cas9文庫能一步產(chǎn)生大量雜合及雙鏈突變小鼠,，建立了可以用于個(gè)體水平遺傳篩選的新工具。再次,，可進(jìn)行多基因遺傳疾病的研究,，比如，四個(gè)基因雜合敲除小鼠可以模擬DM1疾病,，最后,，兩者的結(jié)合在建立遺傳篩選體系上也具有一定優(yōu)勢。

最后,，李勁松教授介紹了卵子來源“人造精子”的建立,，食蟹猴孤雌單倍體干細(xì)胞的建立以及人的孤雌單倍體胚胎干細(xì)胞的建立的工作。其中,，卵子來源“人造精子”的建立得益于長期傳代中,，孤雌單倍體胚胎干細(xì)胞的雌性印記逐漸丟失，隨后通過將H19-DMR和Gtl2-DMR敲除,，也可使孤雌單倍體胚胎干細(xì)胞獲得高效的使卵子受精的能力,。