經(jīng)典的RACE技術是由Frohman等（1988）發(fā)明的一項技術,，主要通過RT-PCR技術由已知部分cDNA序列來得到完整的cDNA5'和3'端,，包括單邊PCR和錨定PCR。該技術提出以來經(jīng)過不斷發(fā)展和完善,，克服了早期技術步驟多,、時間長、特異性差的缺點（Frohman等,，1995：Schaefer,，l995： Chen，1998： Bespalova等,，1998： Matz等11999）,。對傳統(tǒng)RACE技術的改進主要是引物設計及RT-PCR技術的改進：改進之一是利用鎖定引物（（lock docking primer）合成第一鏈cDNA，即在oligo（dT）引物的3' 端引入兩個簡并的核苷酸【5'-Oligo（dT）16-30MN-3',，M=A/G/C,；N=A/G/C/T】，使引物定位在poly（A）尾的起始點,，從而消除了在合成第一條cDNA鏈時oligo（dT）與poly（A）尾的任何部位的結合所帶來的影響,；改進之二是在5' 端加尾時，采用poly（C）,，而不是poly（A）,；改進之三是采用RNase H-莫洛尼氏鼠白血。病毒（MMLV）反轉(zhuǎn)錄酶或選擇嗜熱DNA聚合酶可能在高溫（60℃ -70℃）有效地逆轉(zhuǎn)錄mRNA,，從而消除了5'端由于高CC含量導致的mRNA 二級結構對逆轉(zhuǎn)錄的影響,；改進之四是采用熱啟動PCR （hot start PCR）技術和降落PCR（touch down PCR）提高PCR反應的特異性,。
隨著RACE技術日益完善，目前己有商業(yè)化RACE技術產(chǎn)品推出,，如CLONTECH的MarathoTM技術和SMARTTM RACE技術,。邢桂春等（2001）先后使用上述兩種試劑盒進行RACE反應，結果發(fā)現(xiàn)使用MarathonTM所得到的片斷總是比采用SMARTTM RACE試劑盒到所得到的片斷短,。其原因在于MarathonTM技術反轉(zhuǎn)錄反應往往不能真正達到mRNA的5' 末端,。所以認為，進行RACE反應應當優(yōu)選SMARTTM RACE試劑盒,。以下就國內(nèi)目前應用最廣的SMARTTM RACE試劑盒為例,，簡要概述RACE技術的原理和操作過程。
SMARTTM 3'-RACE的原理
利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作為一個引物結合位點,，以連有SMART寡核營酸序列通用接頭引物的Oligo（dT）30MN作為鎖定引物反轉(zhuǎn)錄合成標準第一鏈cDNA.然后用一個基因特異引物GSP1（gene specific primer,，GSP）作為上游引物，用一個含有部分接頭序列的通用引物UPM（universal primer,，UPM）作為下游引物,，以cDNA第一鏈為模板，進行PCR循環(huán),，把目的基因3' 末端的DNA片段擴增出來
