經(jīng)典的RACE技術(shù)是由Frohman等（1988）發(fā)明的一項(xiàng)技術(shù)，主要通過(guò)RT-PCR技術(shù)由已知部分cDNA序列來(lái)得到完整的cDNA5'和3'端,，包括單邊PCR和錨定PCR,。該技術(shù)提出以來(lái)經(jīng)過(guò)不斷發(fā)展和完善,，克服了早期技術(shù)步驟多,、時(shí)間長(zhǎng),、特異性差的缺點(diǎn)（Frohman等，1995：Schaefer,，l995： Chen，1998： Bespalova等,，1998： Matz等11999）,。對(duì)傳統(tǒng)RACE技術(shù)的改進(jìn)主要是引物設(shè)計(jì)及RT-PCR技術(shù)的改進(jìn)：改進(jìn)之一是利用鎖定引物（（lock docking primer）合成第一鏈cDNA，即在oligo（dT）引物的3' 端引入兩個(gè)簡(jiǎn)并的核苷酸【5'-Oligo（dT）16-30MN-3',，M=A/G/C,；N=A/G/C/T】，使引物定位在poly（A）尾的起始點(diǎn),，從而消除了在合成第一條cDNA鏈時(shí)oligo（dT）與poly（A）尾的任何部位的結(jié)合所帶來(lái)的影響,；改進(jìn)之二是在5' 端加尾時(shí)，采用poly（C）,，而不是poly（A）,；改進(jìn)之三是采用RNase H-莫洛尼氏鼠白血。病毒（MMLV）反轉(zhuǎn)錄酶或選擇嗜熱DNA聚合酶可能在高溫（60℃ -70℃）有效地逆轉(zhuǎn)錄mRNA,，從而消除了5'端由于高CC含量導(dǎo)致的mRNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)逆轉(zhuǎn)錄的影響,；改進(jìn)之四是采用熱啟動(dòng)PCR （hot start PCR）技術(shù)和降落PCR（touch down PCR）提高PCR反應(yīng)的特異性。
隨著RACE技術(shù)日益完善,，目前己有商業(yè)化RACE技術(shù)產(chǎn)品推出,，如CLONTECH的MarathoTM技術(shù)和SMARTTM RACE技術(shù)。邢桂春等（2001）先后使用上述兩種試劑盒進(jìn)行RACE反應(yīng),，結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用MarathonTM所得到的片斷總是比采用SMARTTM RACE試劑盒到所得到的片斷短,。其原因在于MarathonTM技術(shù)反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)往往不能真正達(dá)到mRNA的5' 末端。所以認(rèn)為,，進(jìn)行RACE反應(yīng)應(yīng)當(dāng)優(yōu)選SMARTTM RACE試劑盒,。以下就國(guó)內(nèi)目前應(yīng)用最廣的SMARTTM RACE試劑盒為例，簡(jiǎn)要概述RACE技術(shù)的原理和操作過(guò)程,。
SMARTTM 3'-RACE的原理
利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作為一個(gè)引物結(jié)合位點(diǎn),，以連有SMART寡核營(yíng)酸序列通用接頭引物的Oligo（dT）30MN作為鎖定引物反轉(zhuǎn)錄合成標(biāo)準(zhǔn)第一鏈cDNA.然后用一個(gè)基因特異引物GSP1（gene specific primer，GSP）作為上游引物,，用一個(gè)含有部分接頭序列的通用引物UPM（universal primer,，UPM）作為下游引物，以cDNA第一鏈為模板，進(jìn)行PCR循環(huán),，把目的基因3' 末端的DNA片段擴(kuò)增出來(lái)
