利用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體(McAb)基本原理是根據(jù)三個原則:(1)淋巴細胞產(chǎn)生抗體的克隆選擇學(xué)說,;(2)雜交瘤細胞保持雙方親代細胞特性化;(3)然后大量培養(yǎng)增殖,制備所需的McAb,。
一、單克隆抗體的產(chǎn)生
1. 動物體內(nèi)誘生方法:目前McAb治療用或體外診斷用的多數(shù)尚采用這一方法制備,。先在小鼠腹腔注射液體石蠟或福氏不完全佐劑,,一周后將雜交瘤細胞懸液注射腹腔,1~2周后,,無菌抽取腹水,,離心取上清液即可。
2.體外培養(yǎng)法:這是實驗室制備的方法,。將雜交瘤細胞置培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),,待培養(yǎng)液顏色改變或細胞過多開始死亡時,收集上清液,,離心去掉碎片及細胞即可,。另一種是雜交瘤細胞高密度培養(yǎng)法。
二,、單克隆抗體的純化及鑒定
目前常用的純化方法有鹽析,、凝膠過濾、離子交換層析和辛酸提取等方法,。
單克隆抗體性質(zhì)鑒定方法如放免測定,、補體介導(dǎo)溶血試驗、ELISA,、免疫酶,、玫瑰花結(jié)形成試驗等,最常用的為ELISA方法,,一般先作定性試驗,,如陽性,進一步作定量檢測,。