利用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體(McAb)基本原理是根據(jù)三個原則:(1)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的克隆選擇學(xué)說,;(2)雜交瘤細(xì)胞保持雙方親代細(xì)胞特性化,;(3)然后大量培養(yǎng)增殖,,制備所需的McAb,。
一,、單克隆抗體的產(chǎn)生
1. 動物體內(nèi)誘生方法:目前McAb治療用或體外診斷用的多數(shù)尚采用這一方法制備,。先在小鼠腹腔注射液體石蠟或福氏不完全佐劑,,一周后將雜交瘤細(xì)胞懸液注射腹腔,,1~2周后,無菌抽取腹水,,離心取上清液即可,。
2.體外培養(yǎng)法:這是實(shí)驗(yàn)室制備的方法。將雜交瘤細(xì)胞置培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),,待培養(yǎng)液顏色改變或細(xì)胞過多開始死亡時,,收集上清液,,離心去掉碎片及細(xì)胞即可。另一種是雜交瘤細(xì)胞高密度培養(yǎng)法,。
二,、單克隆抗體的純化及鑒定
目前常用的純化方法有鹽析,、凝膠過濾、離子交換層析和辛酸提取等方法,。
單克隆抗體性質(zhì)鑒定方法如放免測定、補(bǔ)體介導(dǎo)溶血試驗(yàn),、ELISA,、免疫酶、玫瑰花結(jié)形成試驗(yàn)等,,最常用的為ELISA方法,,一般先作定性試驗(yàn),如陽性,,進(jìn)一步作定量檢測,。