微生物染色的基本原理：是借助物理因素和化學(xué)因素的作用而進(jìn)行的,。物理因素如細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對(duì)染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透,、吸附作用等,。化學(xué)因素則是根據(jù)細(xì)胞物質(zhì)和染料的不同性質(zhì)而發(fā)生地各種化學(xué)反應(yīng),。酸性物質(zhì)對(duì)于堿性染料較易吸附,，且吸附作用穩(wěn)固；同樣,，堿性物質(zhì)對(duì)酸性染料較易于吸附,。如酸性物質(zhì)細(xì)胞核對(duì)于堿性染料就有化學(xué)親和力，易于吸附,。但是,，要使酸性物質(zhì)染上酸性材料，必須把它們的物理形式加以改變（如改變pH值）,，才利于吸附作用的發(fā)生,。相反，堿性物質(zhì)（如細(xì)胞質(zhì)）通常僅能染上酸性染料,，若把它們變?yōu)檫m宜的物理形式,，也同樣能與堿性染料發(fā)生吸附作用。
影響染色的其它因素,，還有菌體細(xì)胞的構(gòu)造和其外膜的通透性,，如細(xì)胞膜的通透性、膜孔的大小和細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整與否,，在染色上都起一定作用。此外,，培養(yǎng)基的組成,、菌令、染色液中的電介質(zhì)含量和pH,、溫度,、藥物的作用等，也都能影響細(xì)菌的染色,。
染料的種類：染料可按其電離后染料離子所帶電荷的性質(zhì),，分為酸性染料、堿性染料和中性（復(fù)合）染料三大類,。
1,、酸性染料：這類染料電離后染料離子帶負(fù)電，如伊紅,、剛果紅,、藻紅、苦味酸和酸性復(fù)紅等，可與堿性物質(zhì)結(jié)合成鹽,。當(dāng)培養(yǎng)基因糖類分解產(chǎn)酸使pH值下降時(shí),，細(xì)菌所帶的正電荷增加，這時(shí)選擇酸性染料,，易被染色,。
2、堿性染料：這類染料電離后染料離子帶正電,，可與酸性物質(zhì)結(jié)合成鹽,。微生物實(shí)驗(yàn)室一般常用的堿性染料有美蘭、甲基紫,、結(jié)晶紫,、堿性復(fù)紅、中性紅,、孔雀綠和蕃紅等,，在一般的情況下，細(xì)菌易被堿性染料染色,。
3,、中性（復(fù)合）染料：酸性染料與堿性染料的結(jié)合物叫做中性（復(fù)合）染料，如瑞脫氏（Wright）染料和基姆薩氏（Gimsa）染料等,，后者常用于細(xì)胞核的染色,。
瑞氏染液及其配制
1、瑞氏染料是由堿性染料美藍(lán)（Methvlem blue和酸性染料黃色伊紅（EostmY）合稱伊紅美藍(lán)染料即瑞氏（美藍(lán)－伊紅Y）染料,。
伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子,，無(wú)色部分為陽(yáng)離子，其有色部分為酸性,，故稱伊紅為酸性染料,。美藍(lán)通常為氯鹽是堿性的，美藍(lán)的中間產(chǎn)物結(jié)晶為三氯化鎂復(fù)鹽,，其有色部分為陽(yáng)離子,，無(wú)色部分為陰離子，恰與伊紅鈉鹽相反,。
2,、用甲醇作瑞氏染料溶劑，即成瑞氏染液,。甲醇是瑞氏染料良好溶劑,，有兩種作用：
（1）甲醇使瑞氏染料中美藍(lán)（ M ）與伊紅（ E ）在溶液中離解，可使細(xì)胞成分選擇性吸附其中的有色物質(zhì)而著色,。
（2）甲醇具有強(qiáng)大的脫水力,，可將細(xì)胞固定在一定形態(tài)及增加細(xì)胞結(jié)構(gòu)的表面積,，提高細(xì)胞對(duì)染料吸收作用，同時(shí)由于甲醇吸附染色液中的水,，使染色液升溫,，加速染色反應(yīng)。
3. 瑞氏染液配制：
(1) 瑞氏染液配制： 瑞氏染料 830gm 或 1g
甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml
先稱干燥（事先放入溫箱干燥過(guò)夜）瑞氏染料放置乳缽內(nèi),， 用乳棒輕輕 敲碎染料成粉末,，再行研磨至聽(tīng)不到研芝麻聲 即呈細(xì)粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨,，使染料在乳缸內(nèi)顯“一面鏡”光澤,，而無(wú)染料粉粒沉著，再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮,，靜置片刻,，將上層液體倒入一 清潔儲(chǔ)存瓶?jī)?nèi)（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨,，重復(fù)數(shù)次,，直至乳缽內(nèi)染料及甲醇用完為止，搖勻,，密封瓶口,，存室溫暗處，儲(chǔ)存愈久,，則染料溶解,、分解就越好，一般儲(chǔ)存 3 個(gè)月以上為佳,。
（2） 緩沖液：
1) 緩沖液作用：染色對(duì)氫離子濃度是十分敏感的,，據(jù)觀察 pH 值的改變，可使蛋白質(zhì)與染料形成的化合物重新離解,。緩沖液須保持 一定的 pH 使染色穩(wěn)定,， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏堿性染料可與緩沖液中 酸基起 中和作用,，偏酸性染料則與緩沖液中的堿基起中和作用，使 pH 恒定,。
2) 緩沖液配制（ pH6.4~6.8 ,，弱酸性）：
配方 1 ： 配方 2 ：
1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml
1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml
H2O( 新鮮 ) 加至 1000ml
置室溫黑暗處，瓶口密封,，防止霉菌污染,，如有污染則應(yīng)報(bào)廢。
