1培養(yǎng)液pH對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響？

答：由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2-7.4,，偏離此范圍可能對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)將產(chǎn)生有害的影響,。但各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不完全相同，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差,，無(wú)限細(xì)胞系耐受力強(qiáng),。但總體來(lái)說(shuō)，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些,。在配制培養(yǎng)用液時(shí),，需要注意一點(diǎn)：新配制的培養(yǎng)基在經(jīng)過(guò)0.10um或0.22um濾膜過(guò)濾時(shí)，溶液的pH還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右,。

2培養(yǎng)液pH下降很快可能原因有哪些,？其解決辦法是什么？

答：通常細(xì)胞生長(zhǎng)得非?？鞎r(shí),，pH值通常下降得很快。此時(shí)可以及時(shí)傳代,、提高傳代比例或降低血清量等方法進(jìn)行解決,。此外，培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊,、NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠,、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、細(xì)菌,、酵母或真菌污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快,。

（1）按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對(duì)應(yīng)CO2濃度為5％到10％,。

（2）改用不依賴(lài)CO2培養(yǎng)液,。

（3）松開(kāi)瓶蓋1/4 圈。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。

（4）在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s鹽配制的培養(yǎng)液,，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks鹽配制的培養(yǎng)液,。

（5）如果是污染造成的則丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。

3為什么培養(yǎng)的細(xì)胞要及時(shí)傳代,？

答：體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長(zhǎng)接觸抑制的特性,，也就是說(shuō)當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候，它就會(huì)停止生長(zhǎng),，及時(shí)傳代后,，細(xì)胞的生長(zhǎng)得以繼續(xù)。

4/,、Hank′s 平衡鹽溶液(HBS)和Earle′s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別,？

答：HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平，在Eagle′s (2.2g/L)中比在Hanks′ (0.35g/L) 中高,。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,，以維持溶液的PH值。Eagle′s液在空氣水平的CO2中,，溶液會(huì)變堿，Hanks′液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸,。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,，需要用Eagle′s液。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織,，用Hanks′液就可以了,。

5培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？

答：丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,，但是，如果沒(méi)有葡萄糖的話(huà),，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉,。

6/、GlutaMAX-I是什么,？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I,？這個(gè)二肽有多穩(wěn)定？

答：GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽,，是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物,，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來(lái)保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽,，釋放L-谷氨酰胺供利用,。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解,，如果在相同條件下,，L-谷氨酰胺幾乎完全降解。