1培養(yǎng)液pH對細(xì)胞生長的影響,？

答：由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對細(xì)胞生長將產(chǎn)生有害的影響,。但各種細(xì)胞對pH的要求也不完全相同,，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對pH變動耐受差,，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。但總體來說,，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些。在配制培養(yǎng)用液時(shí),，需要注意一點(diǎn)：新配制的培養(yǎng)基在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時(shí)，溶液的pH還會向上浮動0.2左右,。

2培養(yǎng)液pH下降很快可能原因有哪些,？其解決辦法是什么,？

答：通常細(xì)胞生長得非?？鞎r(shí),，pH值通常下降得很快,。此時(shí)可以及時(shí)傳代,、提高傳代比例或降低血清量等方法進(jìn)行解決,。此外,，培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊、NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠,、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確,、細(xì)菌,、酵母或真菌污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快,。

（1）按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度,，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應(yīng)CO2濃度為5％到10％,。

（2）改用不依賴CO2培養(yǎng)液。

（3）松開瓶蓋1/4 圈,。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度,。

（4）在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks鹽配制的培養(yǎng)液,。

（5）如果是污染造成的則丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌,。

3為什么培養(yǎng)的細(xì)胞要及時(shí)傳代？

答：體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長接觸抑制的特性,，也就是說當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候,，它就會停止生長，及時(shí)傳代后,，細(xì)胞的生長得以繼續(xù),。

4/、Hank′s 平衡鹽溶液(HBS)和Earle′s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別,？

答：HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平，在Eagle′s (2.2g/L)中比在Hanks′ (0.35g/L) 中高,。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,，以維持溶液的PH值。Eagle′s液在空氣水平的CO2中,，溶液會變堿,，Hanks′液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸,。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagle′s液,。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲存的組織,，用Hanks′液就可以了,。

5培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么,？

答：丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是,，如果沒有葡萄糖的話,，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉,。

6/、GlutaMAX-I是什么,？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I,？這個(gè)二肽有多穩(wěn)定？

答：GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽,，是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物,，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護(hù),。一種肽酶逐漸裂解二肽,，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定,，即使在121磅滅菌20分鐘,，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解,，如果在相同條件下,，L-谷氨酰胺幾乎完全降解,。