使用血細(xì)胞計數(shù)板的步驟:
使用16×25規(guī)格的計數(shù)板時,只計板上四個角上的4個中格(即100個小格),,如果使用25×16規(guī)格的計數(shù)板時,,除計四個角上的4個中格外,還需要計中央一個中格的數(shù)目(即80個小格),。每個樣品重復(fù)觀察計數(shù)不少于2次,,然后取其平均值。
計算
(1)16×25的計數(shù)板孢子數(shù)(個/g)=(N/100) ×400×10000×(V/G)=4×104×(NV/G)…………(1)
式中 N——100小格內(nèi)孢子總數(shù) (個)
V——孢子稀釋液體積 (ml)
G——樣品重量 (g)
(2) 25×16的計數(shù)板
孢子數(shù)(個/g)=(N/80) ×400×10000×(V/G)=5×104×(NV/G) …………………………(2)
式中 N——80小格內(nèi)孢子總數(shù) (個)
V——孢子稀釋液體積 (ml)
G——樣品重量 (g)
計算
(1)16×25的計數(shù)板孢子數(shù)(個/g)=(N/100) ×400×10000×(V/G)=4×104×(NV/G)…………(1)
式中 N——100小格內(nèi)孢子總數(shù) (個)
V——孢子稀釋液體積 (ml)
G——樣品重量 (g)
(2) 25×16的計數(shù)板
孢子數(shù)(個/g)=(N/80) ×400×10000×(V/G)=5×104×(NV/G) …………………………(2)
式中 N——80小格內(nèi)孢子總數(shù) (個)
V——孢子稀釋液體積 (ml)
G——樣品重量 (g)
1.將血細(xì)胞計數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表,。
計 算
次 數(shù)
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4個大方格白細(xì)胞數(shù)
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5個大方格紅細(xì)胞數(shù)
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1
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2
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3
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4
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總數(shù)
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1
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2
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3
|
4
|
5
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總數(shù)
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第1次
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第2次
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|||||||||||
兩次平
均總數(shù)
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血細(xì)胞
計 數(shù)
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4.充液
2類血細(xì)胞計數(shù)分2次充液,,方法如下。
(1)取干凈的計數(shù)板平放于實(shí)驗(yàn)桌上,,將蓋玻片置入計數(shù)板正中央,。★計數(shù)板和蓋玻片在使用前必須用軟綢或擦鏡紙擦凈,,并在低倍鏡下檢查計數(shù)室是否干凈,其刻度是否清晰,。用小滴管吸取稀釋血液,,并將管尖輕輕斜置于蓋玻片邊緣,讓稀釋血液緩慢流出,,借毛細(xì)管現(xiàn)象而自動流入計數(shù)室內(nèi),。一般應(yīng)一次充液使計數(shù)室內(nèi)充滿稀釋血液,若經(jīng)幾次充液,,易形成氣泡,,應(yīng)洗凈計數(shù)板和蓋玻片,,干燥后重新充液。
(2)稀釋的血液充入計數(shù)室后,,靜置2~3min,,待細(xì)胞不再浮動后,于低倍鏡下計數(shù),。
5.計數(shù)
為防止重復(fù)計數(shù)和漏數(shù),,計數(shù)時應(yīng)遵循一定的順序進(jìn)行,即“從左到右,,自上而下”,;對正好壓在格線上的血細(xì)胞,依照“數(shù)上不數(shù)下,,數(shù)左不數(shù)右”的原則進(jìn)行計數(shù)(圖3-2),。
如計數(shù)白細(xì)胞時發(fā)現(xiàn)各大方格的白細(xì)胞數(shù)相差8個以上,計數(shù)紅細(xì)胞時發(fā)現(xiàn)各中方格的紅細(xì)胞數(shù)最多與最少相差20個以上時,,則表示血細(xì)胞分布不均勻,,必須將稀釋的血液搖勻后再重新充入計數(shù)室計數(shù)。
6.計算
(1)白細(xì)胞數(shù) 將四角的4個大方格內(nèi)數(shù)得的白細(xì)胞總數(shù)乘以50,,即得每立方毫米血液內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù),,也可將對角兩個大方格內(nèi)數(shù)得的白細(xì)胞總數(shù)乘以100。因?yàn)椋?/div>
稀釋液0.38mL加入血液20mm3(1mL=1000mm3,,
故20mm3=0.02mL,),,使血液稀釋20倍,換算成未稀釋血時應(yīng)乘以20,。
在計數(shù)時僅統(tǒng)計四角的4個大方格內(nèi)的白細(xì)胞,,其容積為lmm×1mm×0.1mm×4=0.4mm3,換算成每立方毫米時應(yīng)乘以2.5,。這樣,,把四角4個大方格內(nèi)數(shù)得的白細(xì)胞總數(shù)乘以50(即20×2.5=50),即得每立方毫米血內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù),。
(2)紅細(xì)胞數(shù) 將中央大方格中的四角和中央的中方格共5個中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)胞總數(shù)乘以10 000,,即得每立方毫米血內(nèi)紅細(xì)胞的總數(shù)。因?yàn)椋?/div>
稀釋液3.98mL,,加入血20mm3(即0.02mL),,使血液稀釋200倍,換算成未稀釋血時應(yīng)乘以200,。
在計數(shù)時僅統(tǒng)計0.02 mm3內(nèi)的紅細(xì)胞(1個中方格的容積為0.2mm×0.2mm×0.1mm=0.004mm3,,5個中方格的容積為0.004mm3×5=0.02mm3),換算成每立方毫米時應(yīng)乘以50,。這樣把5個中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)胞總數(shù)乘以10 000(即200×50=10000),,即得每立方毫米血內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù),。
7.清洗血細(xì)胞計數(shù)板
蓋玻片及計數(shù)板用過之后,,必須立即用水沖洗,但不可用硬物刷洗,。計數(shù)板晾干或吹風(fēng)機(jī)吹干后,,應(yīng)鏡檢計數(shù)室是否干凈,如不干凈必須重復(fù)洗至干凈為止,。
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(文/孫小姐)
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