隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)的發(fā)展,,及時診斷出血,、血栓性疾病,,觀察療效,分析抗凝藥物劑量等顯得越來越迫切,,而傳統(tǒng)的手工方法和單一的凝固定性檢查已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床要求,,全自動血凝儀的出現(xiàn)和應(yīng)用,使得止血和血栓項(xiàng)目檢查變得簡便,、準(zhǔn)確,、可靠、極大地滿足了臨床診療的需要,。
血凝儀檢測的基本方法:
目前血凝儀大多采用生物學(xué)方法,,可分成三類:電流法、粘度法,、光學(xué)法,。
電流法:該法是利用血漿標(biāo)本纖維蛋白具有的導(dǎo)電性,將電極插入標(biāo)本中,,利用兩電極之間的電流的通,、斷來判斷纖維蛋白是否形成,依此確定凝固終點(diǎn),。
粘度法:又稱磁珠法,,儀器的檢測部分有獨(dú)立的線圈產(chǎn)生所需的電磁場,檢測時在待測標(biāo)本中加入小磁珠,,利用變化的磁場使小磁珠產(chǎn)生運(yùn)動,隨著血漿的凝固,,血漿的粘稠度征集增加,,小磁珠擺幅逐漸減少,儀器內(nèi)的電磁傳感器,,測定小磁珠的不同震蕩幅度,,計算出血漿的凝固時間。
光學(xué)法:該法是目前血凝儀使用最多的一種檢測方法,。當(dāng)血漿在樣品杯中逐漸凝固時,,纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白,其理學(xué)性狀也隨著變化,;當(dāng)一束光通過樣品杯時,,其透射光和散光的強(qiáng)度也會隨之變化。
血凝儀檢測的基本原理,?
比濁法以血漿中的被檢測物質(zhì)作為抗原,,抗原與試劑中的抗體混合時會發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng),產(chǎn)生復(fù)合物顆粒,,依此來測定被檢測物質(zhì)含量,。其原理是:抗原量同抗體特異性結(jié)合反應(yīng)達(dá)到某一程度與所需的時間之間存在一定的數(shù)量關(guān)系,,在檢測過程中,隨著待檢物質(zhì)與相應(yīng)抗體結(jié)合,,其復(fù)合物顆粒增多單色光通過時,,透過的或反射的光強(qiáng)度就會發(fā)生一定的變化,儀器的電路部分自動算出單位時間內(nèi)吸光度的變化量,,再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出待檢物質(zhì)的含量,。
使用光學(xué)法檢測時,一般是將預(yù)溫好的血漿標(biāo)本和試劑快速混合,,在混合瞬間吸光度非常弱,,隨著樣品和試劑混合物中的纖維蛋白凝塊的形成,反應(yīng)杯內(nèi)標(biāo)本吸光度逐漸增強(qiáng),,當(dāng)標(biāo)本凝固完全后,,吸光度值就穩(wěn)定下來;儀器在血漿和試劑混合的瞬間,,也就是吸光度最弱時,,設(shè)定吸光度值A(chǔ)=0%,在血漿和樣品凝固完全后,,吸光度最強(qiáng)時,,設(shè)定吸光度值A(chǔ)=100%;在0%-100%吸光度變化之間,,儀器檢測通道單位時間內(nèi)分別采集多個數(shù)據(jù),,這樣吸光度的變化值可做出一條曲線,儀器根據(jù)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目需要自動選取曲線上的一個點(diǎn)所對應(yīng)的時間為凝血時間,;儀器內(nèi)的計算電路對做出的曲線求二次微分,,二次微分為零的點(diǎn),就是凝固終點(diǎn),;因?yàn)槟且粋€酶促的加速過程,,到凝固終點(diǎn)時,反應(yīng)速度和加速度都達(dá)到最大,,此時凝固曲線的二次微分為零,。
血凝儀在測定待測血漿樣品前,必須首先定標(biāo),,也是對已知濃度或活性的標(biāo)準(zhǔn)品的凝血時間宋制定標(biāo)準(zhǔn)曲線,;在檢測待測樣品時,計算電路首先檢測出血漿的凝固時間,,在根據(jù)凝固時間從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度或活性,。
血凝儀的檢測項(xiàng)目和臨床應(yīng)用?
血凝儀的檢測項(xiàng)目一般都有十幾種,,用戶可根據(jù)臨床需要和試劑情況選擇檢測項(xiàng)目,,其中:凝血實(shí)驗(yàn)主要是針對人體內(nèi)抗酶系統(tǒng)和纖溶系統(tǒng)中的酶,、酶原和一些因子的測定,常檢項(xiàng)目有:(1)TT-凝血酶時間,;(2)PT-凝血酶原時間,;(3)APPF-部分凝血活酶時間;(4)FIB-纖維蛋白,。
除此,,還可測定下列參數(shù):(1)凝血因子分析(Ⅱ、Ⅴ,、Ⅹ,、Ⅷ、Ⅸ,、Ⅺ,、Ⅻ);(2)α-2-抗胞漿素,;(3)肝素抗-Xa,;(4)蛋白C及活性蛋白C;(5)狼瘡抗凝物,;(6)蛋白C和S抗凝物等等,。
當(dāng)病人發(fā)生DIC、原發(fā)性纖溶癥,、維生素K缺乏癥、肝臟疾病或血液循環(huán)中有抗凝物質(zhì)時,,凝血酶原時間(PT)都會延長,;若PT縮短則常見于凝血因子V增多癥、高凝狀態(tài)和血栓性疾病等,。當(dāng)病人有肝臟疾病、阻塞性黃疸,、新生兒出血癥,、腸道滅菌綜合征、吸收不良綜合征等某種疾病時,,活化部分凝血酶時間(APTT)會延長,;APTT參數(shù)是反映血漿中凝血因子Ⅷ、Ⅸ,、Ⅺ,、Ⅻ水平的實(shí)驗(yàn),是外源性凝血系統(tǒng)的篩選實(shí)驗(yàn),;當(dāng)血漿中這幾種因子某種減少時,,APTT參數(shù)也延長,,可進(jìn)一步檢查凝血因子,若Ⅷ因子缺乏可能是甲型血友病,、Ⅸ因子缺乏一般是乙型血友病,。而APIT減少,一般是血栓性病癥,,如心肌或肺梗死,、腦血管病變等或是促凝物質(zhì)進(jìn)入血液及凝血因子活性增高。當(dāng)纖維蛋白原濃度(FIB)大于4.5g/L時:常見于糖尿病酸中毒,、尿毒癥,、急性腎炎、休克,、急性感染和惡性腫瘤及外科大手術(shù)等,。FIB參數(shù)小于1.7g/L時,多見于彌漫性血管內(nèi)凝血和原發(fā)性纖溶癥,、重癥肝炎和肝硬化等,;FIB參數(shù)也用一起監(jiān)測防檢和溶栓治療??傊?,在醫(yī)學(xué)各科對疾病的研究、診斷和治療方面,,凝血分析的各個參數(shù)均有其不同的重要意義,。