止血與血栓分子標(biāo)志物的檢測指標(biāo)與臨床各種疾患有著密切聯(lián)系,,如動(dòng)脈粥樣硬化,心腦血管疾病、糖尿病,、動(dòng)靜脈血栓形成,,血栓閉塞性脈管炎、肺栓塞,、妊娠高血壓綜合癥,、彌散性血管內(nèi)凝血、溶血尿毒綜合癥,、慢性阻塞性肺炎等,。中醫(yī)藥關(guān)于活血化瘀的理論與治療工作研究也都涉及止血與血栓問題。為使臨床準(zhǔn)確運(yùn)用這些指標(biāo)進(jìn)行診斷,,衛(wèi)生部印發(fā)了《關(guān)于出凝血時(shí)間檢驗(yàn)方法操作規(guī)程》,,對(duì)活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)和血漿凝血活酶時(shí)間(PT)等操作方法進(jìn)行了詳細(xì)規(guī)范。因此使用血液凝固分析儀(以下簡稱血凝儀)對(duì)血栓和止血進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查成為必要,。血凝儀分為全自動(dòng)與半自動(dòng)兩類,。
目前國內(nèi)外各生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的半自動(dòng)血凝儀都是基于凝固法對(duì)血液凝固過程進(jìn)行測量的。血液凝固是一系列凝血因子連鎖性酶反應(yīng)的結(jié)果,。血液中的凝血因子以無活性酶原形式存在,,當(dāng)某一凝血因子被激活后,可使許多凝血因子按一定的次序先后被激活,,彼此之間有復(fù)雜的催化作用,,被稱為“瀑布樣學(xué)說”。這種“瀑布樣學(xué)說”產(chǎn)生的激變?cè)谘旱纳镂锢硖匦陨媳憩F(xiàn)為,,電阻增大(電流法)粘度增強(qiáng)(磁珠法),,濁度上升(光學(xué)法)。由于電流法測量可靠性差,,因此為磁珠法和光學(xué)法所替代,。
1、光學(xué)法(比濁法)
光學(xué)法血凝儀是根據(jù)血漿凝固過程中濁度的變化來測定凝血功能,。根據(jù)儀器不同的光學(xué)測量原理,,又可分為散射比濁法和透射比濁法兩類。
?。?)散射比濁法:散射比濁法是根據(jù)待驗(yàn)樣品在凝固過程中散射光的變化來確定檢測終點(diǎn)的,。在該方法中檢測通道的單色光源與光探測器呈90O直角,當(dāng)向樣品中加入凝血激活劑后,,隨樣品中纖維蛋白凝塊的形成過程,,樣品的散射光強(qiáng)度逐步增加。當(dāng)樣品完全凝固以后,,散射光的強(qiáng)度不再變化,,通常是把凝固的起始點(diǎn)作為0%,凝固終點(diǎn)作為100%,,把50%作為凝固時(shí)間,。光探測器接收這一光學(xué)的變化,,將其轉(zhuǎn)化為電信號(hào),經(jīng)過放大再被傳送到監(jiān)測器上進(jìn)行處理,,描出凝固曲線,。
(2)透射比濁法:透射比濁法,,是根據(jù)待測樣品在凝固過程中吸光度變化來確定凝固終點(diǎn)的,、與散射比濁法不同的是該方法的光路同一般的比色法一樣呈直線安排:來自光源的光線經(jīng)過處理后變成平行光,透過待測樣品后照射到光電管變成電信號(hào),,經(jīng)過放大后監(jiān)測處理,。當(dāng)向樣品中加入凝血激活劑后,開始的吸光度非常弱,,隨著反應(yīng)管中纖維蛋白凝塊的形成,,標(biāo)本吸光度也逐漸增強(qiáng),當(dāng)凝塊完全形成后,,吸光度趨于恒定,。血凝儀可以自動(dòng)描繪吸光度的變化曲線并設(shè)定其中某一點(diǎn)對(duì)應(yīng)的時(shí)間為凝固時(shí)間。
2,、磁珠法
磁珠法是根據(jù)血漿凝固過程中粘度的變化來測量凝血功能的,。根據(jù)儀器對(duì)磁珠運(yùn)動(dòng)測量原理的不同,又可分為光電探測法和電磁珠探測法,。
?。?)光電探測法:在磁珠法中光電探測器的作用與光學(xué)法中不同,它只測量血漿凝固過程中磁珠的運(yùn)動(dòng)規(guī)律,,與血漿的濁度無關(guān),。在磁珠法中的一對(duì)電磁鐵安放在測試杯的兩端,它們產(chǎn)生恒定的交替磁場使磁珠在測試杯中擺動(dòng),,在與磁珠擺動(dòng)的垂直方向安放一對(duì)光電接收裝置,,當(dāng)磁珠擺幅衰減到50%時(shí)確定凝固終點(diǎn)。
光電探測法中還有一種利用紅外光反射監(jiān)測器監(jiān)測磁珠運(yùn)動(dòng)的,,下面介紹BE系列半自動(dòng)血凝儀中將另加介紹。
?。?)電磁探測法:電磁探測法又可稱為雙磁路磁珠法,,其中一對(duì)磁路用于吸引磁珠擺動(dòng),另一對(duì)磁路利用磁珠擺動(dòng)過程中對(duì)磁力線的切割所產(chǎn)生的電信號(hào),,對(duì)磁珠擺動(dòng)幅讀度進(jìn)行監(jiān)控,,當(dāng)磁珠擺動(dòng)幅度衰減到50%確定凝固終點(diǎn)。
光學(xué)法和磁珠法用于血凝檢測,,就方法論而言各有千秋,,光學(xué)法的優(yōu)點(diǎn)在于結(jié)構(gòu)簡單,、靈敏度高。易于自動(dòng)化等,。缺點(diǎn)在于易受特異血漿干擾,,對(duì)此各廠家已采取不同措施予以彌補(bǔ)。磁路法優(yōu)點(diǎn)不受特異血漿的干擾,,試劑量少,,缺點(diǎn),磁珠的質(zhì)量,、杯壁的光滑程度等,,均會(huì)對(duì)測量結(jié)果造成影響。一些廠家為推銷自身產(chǎn)品在方法論上大做文章,,片片面強(qiáng)調(diào)某種方法的優(yōu)越性是不足取的,。其一目前各國生產(chǎn)的血凝儀兩類方法并存,且光學(xué)法占據(jù)主導(dǎo)地位,,在全自動(dòng)血凝儀中尤其如此,。其二判斷儀器的優(yōu)劣有多種方面包括方法、設(shè)計(jì),、工藝等,。