引物合成時,，每一步反應(yīng)效率都不能達(dá)到100%，產(chǎn)生堿基插入,，缺失,，置換突變的因素客觀條件都有一直存在。引物鏈越長,，突變的頻率累加起來就越高,。研究人員總希望合成的引物萬無一失，這種心情可以理解,。但是猶如PCR擴(kuò)增,，不可能絕對保證擴(kuò)增產(chǎn)物中沒有突變，引物合成也不可能保證100%正確,。要知道,，引物合成中發(fā)生錯誤（非人為因素）的頻率，比任何高保真高溫聚合酶PCR擴(kuò)增過程所產(chǎn)生的頻率都要高,。做引物合成,，長鏈引物合成，您要有引物中部分引物可能有突變的思想準(zhǔn)備,。