引物合成時,，每一步反應效率都不能達到100%,，產(chǎn)生堿基插入，缺失,，置換突變的因素客觀條件都有一直存在,。引物鏈越長，突變的頻率累加起來就越高,。研究人員總希望合成的引物萬無一失,，這種心情可以理解。但是猶如PCR擴增,，不可能絕對保證擴增產(chǎn)物中沒有突變,，引物合成也不可能保證100%正確。要知道,，引物合成中發(fā)生錯誤（非人為因素）的頻率,，比任何高保真高溫聚合酶PCR擴增過程所產(chǎn)生的頻率都要高。做引物合成,，長鏈引物合成,，您要有引物中部分引物可能有突變的思想準備,。