引物設計的下列原則供您參考。
◆引物長度一般在18-35mer,。
◆G-C含量控制在40-60%左右,。
◆避免近3’端有酶切位點或發(fā)夾結構,。
◆如果可能避免在3’端最后5個堿基有2個以上的G或C。
◆如果可能避免在3’端最后1個堿基為A,。
◆避免連續(xù)相同堿基的出現(xiàn),，特別是要避免GGGG或更多G出現(xiàn)。
◆退火溫度Tm控制在 58-60C左右,。
◆如果是設計點突變引物,，突變點應盡可能在引物的中間。