引物設(shè)計(jì)的下列原則供您參考,。
◆引物長(zhǎng)度一般在18-35mer,。
◆G-C含量控制在40-60%左右。
◆避免近3’端有酶切位點(diǎn)或發(fā)夾結(jié)構(gòu),。
◆如果可能避免在3’端最后5個(gè)堿基有2個(gè)以上的G或C,。
◆如果可能避免在3’端最后1個(gè)堿基為A。
◆避免連續(xù)相同堿基的出現(xiàn),，特別是要避免GGGG或更多G出現(xiàn),。
◆退火溫度Tm控制在 58-60C左右。
◆如果是設(shè)計(jì)點(diǎn)突變引物,，突變點(diǎn)應(yīng)盡可能在引物的中間,。
◆引物長(zhǎng)度一般在18-35mer,。
◆G-C含量控制在40-60%左右。
◆避免近3’端有酶切位點(diǎn)或發(fā)夾結(jié)構(gòu),。
◆如果可能避免在3’端最后5個(gè)堿基有2個(gè)以上的G或C,。
◆如果可能避免在3’端最后1個(gè)堿基為A。
◆避免連續(xù)相同堿基的出現(xiàn),，特別是要避免GGGG或更多G出現(xiàn),。
◆退火溫度Tm控制在 58-60C左右。
◆如果是設(shè)計(jì)點(diǎn)突變引物,，突變點(diǎn)應(yīng)盡可能在引物的中間,。
