Bradford法的優(yōu)點是:
(1)靈敏度高。據(jù)估計比Lowry法約高4倍,,其最低蛋白質(zhì)檢測量可達1mg。這是因為蛋白質(zhì)與染料結(jié)合后產(chǎn)生的顏色變化很大,,蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物有更高的消光系數(shù),,因而光吸收值隨蛋白質(zhì)濃度的變化比Lowry法要大得多。
(2)測定快速,、簡便,,只需加一種試劑。完成一個樣品的測定,,只需要5min左右,。由于染料與蛋白質(zhì)結(jié)合的過程大約只要2min即可完成,其顏色可以在1h內(nèi)保持穩(wěn)定,,且在5min~20min之間,,顏色的穩(wěn)定性最好,因而完全不用像Lowry法那樣費時和嚴格地控制時間,。
(3)干擾物質(zhì)少,。如干擾Lowry法的K+、Na+,、Mg2+離子,,Tris緩沖液,蔗糖,,甘油,,巰基乙醇,EDTA等均不干擾此測定法,。
此法的缺點是:
(1)由于各種蛋白質(zhì)中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,,因此Bradford法用于不同蛋白質(zhì)測定時有較大的偏差,在制作標準曲線時通常選用g-球蛋白為標準蛋白質(zhì),,以減少這方面的偏差,。
(2)仍有一些物質(zhì)干擾此法的測定。主要的干擾物質(zhì)有:去污劑Triton X-100,、十二烷基磺酸鈉(SDS)和0.1mol/L的NaOH(如同0.1mol/L的酸干擾Lowary法一樣),。
(3)標準曲線也有輕微的非線性,因而不能用Beer定律進行計算,而只能用標準曲線來測定待測蛋白質(zhì)的濃度,。