Bradford法的優(yōu)點(diǎn)是:
(1)靈敏度高,。據(jù)估計(jì)比Lowry法約高4倍,其最低蛋白質(zhì)檢測量可達(dá)1mg,。這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與染料結(jié)合后產(chǎn)生的顏色變化很大,蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物有更高的消光系數(shù),,因而光吸收值隨蛋白質(zhì)濃度的變化比Lowry法要大得多,。
(2)測定快速、簡便,,只需加一種試劑,。完成一個(gè)樣品的測定,只需要5min左右,。由于染料與蛋白質(zhì)結(jié)合的過程大約只要2min即可完成,,其顏色可以在1h內(nèi)保持穩(wěn)定,,且在5min~20min之間,顏色的穩(wěn)定性最好,,因而完全不用像Lowry法那樣費(fèi)時(shí)和嚴(yán)格地控制時(shí)間,。
(3)干擾物質(zhì)少。如干擾Lowry法的K+,、Na+,、Mg2+離子,Tris緩沖液,,蔗糖,,甘油,巰基乙醇,,EDTA等均不干擾此測定法,。
此法的缺點(diǎn)是:
(1)由于各種蛋白質(zhì)中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此Bradford法用于不同蛋白質(zhì)測定時(shí)有較大的偏差,,在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)通常選用g-球蛋白為標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì),,以減少這方面的偏差。
(2)仍有一些物質(zhì)干擾此法的測定,。主要的干擾物質(zhì)有:去污劑Triton X-100,、十二烷基磺酸鈉(SDS)和0.1mol/L的NaOH(如同0.1mol/L的酸干擾Lowary法一樣)。
(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線也有輕微的非線性,,因而不能用Beer定律進(jìn)行計(jì)算,,而只能用標(biāo)準(zhǔn)曲線來測定待測蛋白質(zhì)的濃度。