甲型流感病毒感染嚴(yán)重威脅全球公共健康并造成重大經(jīng)濟(jì)損失，而疫苗仍是防控流感最有效的手段,。干擾素敏感(IFN -sensitive)和復(fù)制缺陷(replication-incompetent)流感疫苗因其在正常細(xì)胞中無法進(jìn)行有效復(fù)制,，卻能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)而備受關(guān)注，這類疫苗被認(rèn)為將很有可能替代傳統(tǒng)的滅活疫苗和減毒疫苗,。非結(jié)構(gòu)蛋白1(NS1)是甲型流感病毒的致病因子之一,，在病毒的生命周期中發(fā)揮著多種重要作用，尤其是能夠通過抑制RIG-I介導(dǎo)的I型IFN的產(chǎn)生來拮抗宿主的天然免疫反應(yīng),。IFN敏感疫苗正是利用這一理論依據(jù),，將流感病毒的IFN拮抗功能去除,，從而抑制病毒在體內(nèi)的有效復(fù)制。目前主要使用IFN-α/β缺陷的Vero細(xì)胞或IFN功能低下的低日齡SPF雞胚來繁殖此類疫苗病毒,，但仍然無法滿足此類疫苗病毒的生產(chǎn)需求,。
中國科學(xué)院微生物研究所劉文軍課題組長期從事流感病毒的復(fù)制調(diào)控機(jī)制研究，前期圍繞流感病毒NS1拮抗宿主抗病毒天然免疫反應(yīng)的機(jī)制開展了系列研究工作(Journal of Virology,，2016,，90：6263– 6275;Cellular Microbiology，2017,，19(2),，e12643)。而該研究則利用NS1拮抗宿主抗病毒天然免疫的功能,，制備了有限復(fù)制流感疫苗并建立了生產(chǎn)該類疫苗的細(xì)胞系,。
該研究利用反向遺傳技術(shù)在RIG-I敲除的293T細(xì)胞中成功包裝出NS1蛋白38位和41位氨基酸雙突變(NS1 R38A/K41A)的重組流感病毒，其包裝效率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其在野生型293T細(xì)胞中的效率,。并且,，該重組病毒幾乎喪失了IFN拮抗功能，在MDCK,、A549甚至IFN-α/β缺陷的Vero細(xì)胞中傳3-6代后即被細(xì)胞清除,。為了能夠大量生產(chǎn)此類有限復(fù)制的IFN敏感流感病毒，該團(tuán)隊(duì)利用Tet-On 3G系統(tǒng)建立了穩(wěn)定表達(dá)野生型NS1蛋白的Vero細(xì)胞系,，NS1 R38A/K41A病毒在該細(xì)胞系上能夠穩(wěn)定傳20代以上并保持較高的病毒滴度,。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，NS1 R38A/K41A病毒能夠感染小鼠并誘導(dǎo)強(qiáng)烈的天然免疫和獲得性免疫,，并抵抗A/WSN/33 (WSN),、A/Puerto Rico/8/1934 (PR8)和 A/California/04/2009 (CA04)流感病毒的再次攻擊，但NS1 R38A/K41A病毒的致病力幾乎喪失,，并很快被排出體外,。
綜上所述，RIG-I敲除的293T細(xì)胞有助于NS1 R38A/K41A流感病毒的包裝,，穩(wěn)定表達(dá)NS1的Vero細(xì)胞有助于NS1 R38A/K41A流感病毒的有效復(fù)制,，該系統(tǒng)可以用于包裝并生產(chǎn)有限復(fù)制的IFN敏感疫苗病毒。NS1 R38A/K41A流感病毒在正常細(xì)胞和小鼠體內(nèi)的復(fù)制是有限的,，是一種潛在的安全有效的干擾素敏感疫苗,。
上述研究于5月1日在線發(fā)表在Frontiers in Cellular and Infection Microbiology上，研究員劉文軍和副研究員孫蕾為文章通訊作者,，博士生陳璨為第一作者,。該研究得到國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃、國家自然科學(xué)基金及中科院B類先導(dǎo)科技專項(xiàng)等項(xiàng)目的資助,。
