在體外培養(yǎng)條件下,,動物細胞會自發(fā)融合,但是頻率極低,。因此,,一般都需要添加具有誘導細胞融合效應的生物或化學藥劑,或者采用電融合技術,,人為地促進細胞融合,。
病毒誘導融合 病毒是最早采用的融合劑。常用于誘導動物細胞融合的病毒有仙臺病毒,、新城雞瘟病毒,、皰疹病毒等,其中仙臺病毒最常用,。用作融合劑的病毒必須事先用紫外線或β-丙內(nèi)酯滅活,,使病毒的感染活性喪失而保留病毒的融合活性,。
用滅活的仙臺病毒誘導細胞融合的
優(yōu)點:融合率較高,對各種動物細胞都適宜,,且仙臺病毒能在雞胚中大量繁殖,,容易培養(yǎng);
缺點:仙臺病毒不穩(wěn)定,,在保存過程中融合活性會降低,,并且制備過程比較煩瑣。此外,,病毒引進細胞后,,可能會對細胞的生命活動產(chǎn)生干擾。
聚乙二醇PEG誘導融合 聚乙二醇PEG具有強烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白質(zhì)的作用,,能夠有效地促進植物原生質(zhì)體和動物細胞的融合,。在不同種類的動物細胞混合液中加入聚乙二醇,就會發(fā)生細胞凝集作用,;在稀釋和除去聚乙二醇的過程中,,就會發(fā)生細胞融合。聚乙二醇誘導細胞融合的機理,,目前還不太清楚,。聚乙二醇是化學試劑,使用起來很方便,,誘導細胞融合的頻率比較高,,但是它有一定毒性,對有些細胞(如卵細胞)不適用,。
電融合 20世紀80年代建立起來的電融合技術,,是將兩種細胞的混合液置于低壓交流電場中,使細胞聚集成串珠狀,,然后施加高壓電脈沖,,以促使細胞融合。緊密排列的細胞,,在相互接觸的細胞膜之間會出現(xiàn)無蛋白顆粒的脂質(zhì)區(qū),,當受到電擊時,這個區(qū)域就會被擊穿,,產(chǎn)生脂雙層膜孔,,導致細胞之間的細胞質(zhì)連通,進而發(fā)生細胞融合,。電融合技術有許多優(yōu)點,,如誘導細胞融合的頻率高,對細胞無毒害作用,,操作簡便,,可重復性好