糖化血紅蛋白檢測方法很多,,常用的有微柱法離子交換層析,、親和層析,、高壓液相、免疫凝集,、離子捕獲法,、電泳法等。
離子交換層析,,分手工和儀器兩種,。手工微柱有Bio-RaD和西班牙BIO SYSYEMS等多家公司產品,手工微柱操作受到人工因互影響,,可能會洗脫不完全或過度洗脫,,并受外界環(huán)境溫度的影響,而某些紅蛋白如HbF異常增加時,,也會與糖化血紅蛋白同時洗脫肉而使結果產生偏差,。相應的儀器以英國DREWSCIENTIFIC公司DS5糖化血紅蛋白儀為例(BIO-RAD公司DIASAT亦為同一產品),采用微柱法離子交換層析和梯度洗脫胎技術可全自動分離血紅蛋白的變異體與亞型,,除可測定糖化血紅蛋白外,,還可同時檢測出HbS與HbC的存在與否,在計算糖化血紅蛋白值時會自動扣除變異體產生和影響,,從而使結果更為準確,、可靠,CV值小于2%,。同時該儀器配有專門的稀釋溶血器,,可直接進行全血操作,5分鐘即可報告結果,,并自動儲存樣品的檢測結果,,層析柱價格也較為低廉。適合于較多標本的醫(yī)院檢測,。更大型的儀器有DREW SCIENTIFIC公司的Hb-Gold,,除可全自動測定糖化血紅蛋白外,還可分離檢測血紅蛋白的600多種子變異體和亞型,,用于地中海貧血等疾病的診斷,。
親和層析是目前糖化血紅蛋白檢測的新方法,該方法特異性強,,不受異常血畿蛋白的干擾,。英國DREWSCIENTIFIC公司的DS1糖化血紅蛋白分析儀日前剛剛獲得美國儀器藥品管理署(FDA)的認可獲準上市,作為目前世界唯一的快速床邊糖化血紅蛋白儀,,它彩硼酸親和層析法,,只需10ul全血即可在4分鐘內快速分離檢測糖果化血紅蛋白,為臨床提供即時的化驗結果,,從而使醫(yī)生在患者就診的第一時間明確診斷并制定相應的治療方案,,特別適合于臨床科室使用,,尤其對小兒患者而言更有優(yōu)勢。其檢測結果也完全達到并超過臨床要求,,CV值5%以內,。
高壓液相方法的儀器有Bio-Rad公司的VariantⅡ等,可全自動分離測定糖化血紅蛋白及血蛋白的變異體和亞型,,但儀器的操作保養(yǎng)要求較高,。
免疫凝集法的原理是糖化血紅蛋白與相應的單抗結合進而發(fā)生凝集反應,通過測定吸光度來表示凝集量,,可用于全自動生化分析儀上進行測定,。專用的儀器也有Bayer的DCA-2000,要求對樣品成批試驗,。每次試驗均應使用一個新試劑盒,,操作前應注意混勻試劑。指出的是免疫凝集法測定糖化血紅蛋白,,精密度較差,,CV值一般大小6%。
離子捕獲法亦是新近發(fā)展起來的新方法,,代表儀器有Abbott的IMX,,其原理是糖化血紅蛋白與相應抗體結合后,聯(lián)以熒光標記物,,而在IMX反應孔中的玻璃纖維預先包被了高分子的四胺合物,,使纖維表面帶正電,使前述的反應復合物吸附在纖維表面,,經過一系列的清洗后測定其熒光強度,,從而得到糖化血紅蛋白的濃度,該方法適用于成批糖化血紅蛋白標本的檢測,。
電泳方法如毛細管電泳也能分離檢測糖化血紅蛋白和血紅蛋白質的變異體,,但目前尚無商品化,具有批量樣本通過能力的儀器面世,,相當程度地限制了該方法的臨床應用,。
綜上所述,糖化血紅蛋白是糖尿病患者疾病控制程度一項良好的指標,,糖尿病患者應定期檢測糖化血紅蛋白,,并據此制定,修正相關治療方案,。各醫(yī)院可根據自身標本的多少,,選擇使用有關糖化血紅蛋白的檢測儀器,開展該項目的檢測,。
采和免疫透射比濁法測定全血中糖化血紅蛋白A1c,,并對其重復性、準確性,、線性范圍,、相關性實驗和干擾實驗加以評價。結果:高,、低濃度的糖化血紅蛋白A1c批內CV分別為3.2%和4.1%,批間CV分別為4.6%和5.8%,總CV分別為6.7%和4.6%,線性范圍為2.0%~15%,平均回收率分別為106.7%和102.4%,與微柱法測定結果比較具有良好的相關性(P<0.05),一定程度脂濁和黃疸對測定無明顯干擾,抗環(huán)血酸對測定無影響,膠乳增強免疫透射比濁法測定糖化血紅蛋白A1c具有較好的精密度和準確度,并且快速,靈敏和可靠,適合臨床實驗室常規(guī)檢測
采用金標法與免疫比濁法檢測臨床血標本糖化血紅蛋白的含量,,對結果進行統(tǒng)計分析,并對兩法進行比較,。結果表明,,金標法重復性好(CV<5%),其檢測結果與免疫比濁法之間差異無顯著性(P>0.05),且相關性好(r=0.9995),;不受高血糖,、黃疸、脂濁的干擾,,但大批量進行標本檢測則較為繁鎖,,適合中、小型醫(yī)院臨床常規(guī)應用
對離子交換高效液相層析法(X),,微柱親和層析手工法(Y1),、膠乳凝集免疫法(Y2)測定糖化血紅蛋白進行方法學評價。結果:X,、Y1,、Y2法和線性范圍分別為2.8%~18.0%、3.6%~15.3%,、2.3%~15.5%;3種方法的平均回收率無為95%~104%,批內,、批間平均變異數均<5%;10.2mmol/L三酰甘油、8.0mmol/L膽固醇,、684umol/L膽紅素,、10.1%HbF對3種方法均無干擾;Y1法測定結果顯著高于X法(P<0.01),Y2法測定結果偏低,與X法比較差異有顯著性(P<0.05),X、Y1,、Y2法的參考范圍分別為4.3%~6.7%,、3.5%~6.7%.
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