糖化血紅蛋白檢測方法很多，常用的有微柱法離子交換層析,、親和層析,、高壓液相、免疫凝集,、離子捕獲法,、電泳法等。
離子交換層析,，分手工和儀器兩種,。手工微柱有Bio-RaD和西班牙BIO SYSYEMS等多家公司產(chǎn)品，手工微柱操作受到人工因互影響,，可能會洗脫不完全或過度洗脫,，并受外界環(huán)境溫度的影響，而某些紅蛋白如HbF異常增加時,，也會與糖化血紅蛋白同時洗脫肉而使結(jié)果產(chǎn)生偏差,。相應(yīng)的儀器以英國DREWSCIENTIFIC公司DS5糖化血紅蛋白儀為例(BIO-RAD公司DIASAT亦為同一產(chǎn)品)，采用微柱法離子交換層析和梯度洗脫胎技術(shù)可全自動分離血紅蛋白的變異體與亞型,，除可測定糖化血紅蛋白外,，還可同時檢測出HbS與HbC的存在與否，在計算糖化血紅蛋白值時會自動扣除變異體產(chǎn)生和影響,，從而使結(jié)果更為準(zhǔn)確,、可靠，CV值小于2%,。同時該儀器配有專門的稀釋溶血器,，可直接進(jìn)行全血操作，5分鐘即可報告結(jié)果,，并自動儲存樣品的檢測結(jié)果,，層析柱價格也較為低廉。適合于較多標(biāo)本的醫(yī)院檢測,。更大型的儀器有DREW SCIENTIFIC公司的Hb-Gold,，除可全自動測定糖化血紅蛋白外，還可分離檢測血紅蛋白的600多種子變異體和亞型，用于地中海貧血等疾病的診斷,。
親和層析是目前糖化血紅蛋白檢測的新方法,，該方法特異性強，不受異常血畿蛋白的干擾,。英國DREWSCIENTIFIC公司的DS1糖化血紅蛋白分析儀日前剛剛獲得美國儀器藥品管理署(FDA)的認(rèn)可獲準(zhǔn)上市,，作為目前世界唯一的快速床邊糖化血紅蛋白儀，它彩硼酸親和層析法,，只需10ul全血即可在4分鐘內(nèi)快速分離檢測糖果化血紅蛋白,，為臨床提供即時的化驗結(jié)果，從而使醫(yī)生在患者就診的第一時間明確診斷并制定相應(yīng)的治療方案,，特別適合于臨床科室使用,，尤其對小兒患者而言更有優(yōu)勢。其檢測結(jié)果也完全達(dá)到并超過臨床要求,，CV值5%以內(nèi),。
高壓液相方法的儀器有Bio-Rad公司的VariantⅡ等，可全自動分離測定糖化血紅蛋白及血蛋白的變異體和亞型,，但儀器的操作保養(yǎng)要求較高,。
免疫凝集法的原理是糖化血紅蛋白與相應(yīng)的單抗結(jié)合進(jìn)而發(fā)生凝集反應(yīng)，通過測定吸光度來表示凝集量,，可用于全自動生化分析儀上進(jìn)行測定,。專用的儀器也有Bayer的DCA-2000，要求對樣品成批試驗,。每次試驗均應(yīng)使用一個新試劑盒,，操作前應(yīng)注意混勻試劑。指出的是免疫凝集法測定糖化血紅蛋白,，精密度較差,，CV值一般大小6%。
離子捕獲法亦是新近發(fā)展起來的新方法,，代表儀器有Abbott的IMX,，其原理是糖化血紅蛋白與相應(yīng)抗體結(jié)合后，聯(lián)以熒光標(biāo)記物,，而在IMX反應(yīng)孔中的玻璃纖維預(yù)先包被了高分子的四胺合物,，使纖維表面帶正電，使前述的反應(yīng)復(fù)合物吸附在纖維表面,，經(jīng)過一系列的清洗后測定其熒光強度,，從而得到糖化血紅蛋白的濃度，該方法適用于成批糖化血紅蛋白標(biāo)本的檢測,。
電泳方法如毛細(xì)管電泳也能分離檢測糖化血紅蛋白和血紅蛋白質(zhì)的變異體,，但目前尚無商品化,，具有批量樣本通過能力的儀器面世，相當(dāng)程度地限制了該方法的臨床應(yīng)用,。
綜上所述,，糖化血紅蛋白是糖尿病患者疾病控制程度一項良好的指標(biāo)，糖尿病患者應(yīng)定期檢測糖化血紅蛋白,，并據(jù)此制定,，修正相關(guān)治療方案。各醫(yī)院可根據(jù)自身標(biāo)本的多少,，選擇使用有關(guān)糖化血紅蛋白的檢測儀器,，開展該項目的檢測。
采和免疫透射比濁法測定全血中糖化血紅蛋白A1c,，并對其重復(fù)性,、準(zhǔn)確性、線性范圍,、相關(guān)性實驗和干擾實驗加以評價。結(jié)果：高,、低濃度的糖化血紅蛋白A1c批內(nèi)CV分別為3.2%和4.1%,批間CV分別為4.6%和5.8%,總CV分別為6.7%和4.6%,線性范圍為2.0%~15%,平均回收率分別為106.7%和102.4%,與微柱法測定結(jié)果比較具有良好的相關(guān)性(P<0.05),一定程度脂濁和黃疸對測定無明顯干擾,抗環(huán)血酸對測定無影響,膠乳增強免疫透射比濁法測定糖化血紅蛋白A1c具有較好的精密度和準(zhǔn)確度,并且快速,靈敏和可靠,適合臨床實驗室常規(guī)檢測
采用金標(biāo)法與免疫比濁法檢測臨床血標(biāo)本糖化血紅蛋白的含量,，對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，并對兩法進(jìn)行比較,。結(jié)果表明,，金標(biāo)法重復(fù)性好（CV<5%）,其檢測結(jié)果與免疫比濁法之間差異無顯著性（P>0.05），且相關(guān)性好（r=0.9995）,；不受高血糖,、黃疸、脂濁的干擾,，但大批量進(jìn)行標(biāo)本檢測則較為繁鎖,，適合中、小型醫(yī)院臨床常規(guī)應(yīng)用
對離子交換高效液相層析法（X）,，微柱親和層析手工法（Y1）,、膠乳凝集免疫法（Y2）測定糖化血紅蛋白進(jìn)行方法學(xué)評價。結(jié)果：X,、Y1,、Y2法和線性范圍分別為2.8%~18.0%、3.6%~15.3%,、2.3%~15.5%;3種方法的平均回收率無為95%~104%,批內(nèi),、批間平均變異數(shù)均＜5%;10.2mmol/L三酰甘油、8.0mmol/L膽固醇,、684umol/L膽紅素,、10.1%HbF對3種方法均無干擾;Y1法測定結(jié)果顯著高于X法(P<0.01),Y2法測定結(jié)果偏低,與X法比較差異有顯著性(P<0.05),X、Y1、Y2法的參考范圍分別為4.3%~6.7%,、3.5%~6.7%.
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