生化分析儀的正確應(yīng)用,只是掌握了測定技術(shù)原理還不夠,,還需要對具體儀器的工作流程及測定計算方法有足夠的了解,。
(一)一般工作流程
工作流程可以通過儀器的測定周期來考察。重點關(guān)注比色杯空白讀數(shù)點(CB),、加樣品點(S),、各試劑加液點(R1、R2,、……),、試劑空白讀數(shù)點(RB)、各測定讀數(shù)點(P),、各點時間間隔及周期總時間等,。每個儀器一般都在反應(yīng)轉(zhuǎn)盤的固定位置和反應(yīng)測定周期的固定時間設(shè)置樣品試劑和稀釋的加液位,以及測定讀數(shù)點,。如HITACHI 7170在P1到P34周期為10分鐘時,,PO前加樣品,Rl在Pl前,,R2在P5和P6間,,R3在P16和P17間,,R4在:P33和P34間。
(二)數(shù)據(jù)處理計算方法
儀器在各個吸光度讀數(shù)點讀取的吸光度數(shù)據(jù),,并不一定都納人濃度計算,。儀器往往根據(jù)儀器定義和操作者設(shè)定的要求,對吸光度原始數(shù)據(jù)作計算處理,,轉(zhuǎn)換成所謂反應(yīng)數(shù)據(jù),,再按系數(shù)或公式作濃度計算。舉例如下:
1.HITACH 7170的終點法測定點(A )吸光度計算為(AX+AX-1)/2,。實際吸光度=吸光度數(shù)據(jù)×10 000。
2.0LYHPUS AU 600試劑空白數(shù)據(jù):P0點試劑空白(RB)=P0點吸光度一比色杯水空白(wB),;任一測定點試劑空白(RB ),。該點吸光度一比色杯水空白(WB)。
3.Monarch 1 000兩點終點法的反應(yīng)數(shù)據(jù),。(終點測定吸光度一終點空白吸光度)一(始點測定吸光度一始點空白吸光度),。
4.AU 600的終點法(帶試劑空白,END法)的反應(yīng)數(shù)據(jù)=終點吸光度一P0點吸光度(試劑空白,,RB),。終點法(不帶試劑空白,END).法)的反應(yīng)數(shù)據(jù)=終點吸光度-比色杯水空白(WB),。
5.Au 600的兩點法(自身空白)的反應(yīng)數(shù)據(jù)=[加第二試劑后測定點讀數(shù)一P0點讀數(shù)]一[加第二試劑前測定點讀數(shù)一PO點讀數(shù)],。
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(一)一般工作流程
工作流程可以通過儀器的測定周期來考察。重點關(guān)注比色杯空白讀數(shù)點(CB),、加樣品點(S),、各試劑加液點(R1、R2,、……),、試劑空白讀數(shù)點(RB)、各測定讀數(shù)點(P),、各點時間間隔及周期總時間等,。每個儀器一般都在反應(yīng)轉(zhuǎn)盤的固定位置和反應(yīng)測定周期的固定時間設(shè)置樣品試劑和稀釋的加液位,以及測定讀數(shù)點,。如HITACHI 7170在P1到P34周期為10分鐘時,,PO前加樣品,Rl在Pl前,,R2在P5和P6間,,R3在P16和P17間,,R4在:P33和P34間。
(二)數(shù)據(jù)處理計算方法
儀器在各個吸光度讀數(shù)點讀取的吸光度數(shù)據(jù),,并不一定都納人濃度計算,。儀器往往根據(jù)儀器定義和操作者設(shè)定的要求,對吸光度原始數(shù)據(jù)作計算處理,,轉(zhuǎn)換成所謂反應(yīng)數(shù)據(jù),,再按系數(shù)或公式作濃度計算。舉例如下:
1.HITACH 7170的終點法測定點(A )吸光度計算為(AX+AX-1)/2,。實際吸光度=吸光度數(shù)據(jù)×10 000。
2.0LYHPUS AU 600試劑空白數(shù)據(jù):P0點試劑空白(RB)=P0點吸光度一比色杯水空白(wB),;任一測定點試劑空白(RB ),。該點吸光度一比色杯水空白(WB)。
3.Monarch 1 000兩點終點法的反應(yīng)數(shù)據(jù),。(終點測定吸光度一終點空白吸光度)一(始點測定吸光度一始點空白吸光度),。
4.AU 600的終點法(帶試劑空白,END法)的反應(yīng)數(shù)據(jù)=終點吸光度一P0點吸光度(試劑空白,,RB),。終點法(不帶試劑空白,END).法)的反應(yīng)數(shù)據(jù)=終點吸光度-比色杯水空白(WB),。
5.Au 600的兩點法(自身空白)的反應(yīng)數(shù)據(jù)=[加第二試劑后測定點讀數(shù)一P0點讀數(shù)]一[加第二試劑前測定點讀數(shù)一PO點讀數(shù)],。
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