全自動(dòng)生化分析儀屬于光學(xué)式分析儀器，它基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收,，即分光光度法,。單色器將光源發(fā)出的復(fù)色光分成單色光，特定波長(zhǎng)的單色光通過盛有樣品溶液的比色池,，光電轉(zhuǎn)換器將透射光轉(zhuǎn)換為電信號(hào)后送入信號(hào)處理系統(tǒng)進(jìn)行分析,。
分光光度法是基于不同分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)對(duì)電磁輻射的選擇性吸收而建立起來的方法，屬于分子吸收光譜分析,。當(dāng)光通過溶液時(shí),，被測(cè)物質(zhì)分子吸收某一波長(zhǎng)的單色光，被吸收的光強(qiáng)度與光通過的距離成正比,。雖然現(xiàn)在了解到Bouguer早在1729年已提出上述關(guān)系的數(shù)學(xué)表達(dá)式,，但通常認(rèn)為L(zhǎng)ambert 于1760年最早發(fā)現(xiàn)表達(dá)式，其數(shù)學(xué)形式為：
T=I/I 0 =e -kb
其中I 0為入射光強(qiáng),，I為透射光強(qiáng),，e為自然對(duì)數(shù)的底， k為常數(shù),， b為光程長(zhǎng)度（通常以cm 表示） ,。
比爾定律等同于Bouguer 定律，只是比爾定律以濃度來表達(dá),。將兩個(gè)定律結(jié)合起來，組成Beer-Bouguer定律：
T=I/I 0 =e -kbc
其中c為吸光物質(zhì)的濃度（通常以g/L 或mg/L 為單位）,。將上式取以10為底的對(duì)數(shù)后,，得到線性表達(dá)式：
A=-logT=-log(I/I 0 )=log(I 0 /I)=εbc
其中A 為吸光度，ε是摩爾吸收光系數(shù)或消光系數(shù),。
上述表達(dá)式通常稱為比爾定律,。它表明，當(dāng)特定波長(zhǎng)的單色光通過溶液時(shí),，樣品的吸光度與溶液中吸收物濃度和光通過的距離成正比,。
在波長(zhǎng)、溶液和溫度確定的情況下,，摩爾消光系數(shù)是由給定物質(zhì)的特性決定的,。實(shí)際上，測(cè)得的摩爾消光系數(shù)也和使用的儀器有關(guān),。因此,，在定量分析中，通常并不用已知物質(zhì)的摩爾消光系數(shù),，而是用一個(gè)或多個(gè)已知濃度的待測(cè)物質(zhì)作一條校準(zhǔn)或工作曲線,。
由于電子躍遷在基態(tài)和激發(fā)態(tài)之間能量差別較大,，因此，室溫下幾乎所有分子的電子都處于基態(tài),。吸收光及返回基態(tài)的速度非?？欤胶庋杆賹?shí)現(xiàn),，這使得光吸收的定量準(zhǔn)確性相當(dāng)高,。根據(jù)工作波段的不同，分光光度法可分為真空-紫外,、可見光,、紫外-可見和紫外-可見-近紅外，其工作波段分別為0.1nm~200nm ,、350nm~700nm ,、185nm~900nm和185nm~2500nm 。作為臨床生化分析使用,，一般要求工作波長(zhǎng)為340nm~800nm,，屬于紫外-可見分光光度法。吸光度與濃度之間簡(jiǎn)單的線性關(guān)系及紫外-可見光相對(duì)容易測(cè)量,，使得紫外-可見分光光度法成為上千種定量分析方法的基礎(chǔ),。
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