糖化血紅蛋白(HbA1c)檢測的方法很多,測定方法主要有四類:色譜法,、電泳法,、免疫法和化學(xué)法。色譜法主要有離子交換層析法,、高壓液相色譜法(HPLC)和親和層析法等,。
目前最常用的HbA1c測定方法是離子交換層析法和電泳法。前者精密度高、重復(fù)性好且操作簡單,,已被臨床廣泛采用,。國內(nèi)主要采用Bio-Rex70陽離子樹脂微柱層析法,其微柱可重復(fù)使用多次,。正常參考值:HbA1c:X±2s=6.5±1.5%,;>8.0%為HbA1c增高。
離子交換層析法 分手工和自動兩種,。手工微柱有Bio-Rad和西班牙BIOSYSYEMS等多家公司產(chǎn)品,,手工微柱操作會受到人工因素影響,可能會洗脫不完全或過度洗脫,,并受外界環(huán)境溫度的影響,,而某些血紅蛋白如HbF異常增加時,,也會與糖化血紅蛋白同時洗脫,,從而使結(jié)果產(chǎn)生偏差。 相應(yīng)的儀器以英國DREW SCIENTIFIC公司DS5糖化血紅蛋白儀為例(BIO-RAD公司DIASTA亦為同一產(chǎn)品),,采用微柱法離子交換層析和梯度洗脫技術(shù)可全自動分離血紅蛋白的變異體與亞型,,除可測定糖化血紅蛋白外,還可同時檢測出HbS與HbC的存在與否,,在計算糖化血紅蛋白值時會自動扣除變異體產(chǎn)生的影響,,從而使結(jié)果更為準(zhǔn)確,可靠,,CV值小于2%,。同時該儀器配有專門的稀釋溶血器,可直接進(jìn)行全血操作,,5分鐘即可報告結(jié)果,,并自動儲存樣品檢測結(jié)果,層析柱價格也較為低廉,,適合于較多標(biāo)本的醫(yī)院檢測,。更大型的儀器有DREW SCIENTIFIC公司的Hb-Gold,除可全自動測定糖化血紅蛋白外,,還可分離檢測血紅蛋白的600多種變異體和亞型,,用于地中海貧血等疾病的診斷。
親和層析 是目前糖化血紅蛋白檢測的新方法,,該方法特異性強,。英國DREW
SCIENTIFIC公司的DSI糖化血紅蛋白分析儀日前剛剛獲得美國食品藥品管理署(FDA)的認(rèn)可獲準(zhǔn)上市,作為目前世界唯一的快速床邊糖化血紅蛋白儀,,它采用硼酸親和層析法,,只需10ul全血即可在4分鐘內(nèi)快速分離檢測糖化血紅蛋白,為臨床提供即時的化驗結(jié)果,尤其對于小兒患者而言更有優(yōu)勢,。其檢測結(jié)果也完全達(dá)到并超過臨床要求,,CV值在5%以內(nèi)。
高壓液相 儀器有Bio-Rad公司的VariantⅡ等,,可全自動分離測定糖化血紅蛋白及血紅蛋白的變異體和亞型,,但儀器的操作保養(yǎng)要求較高。
免疫凝集法 原理是糖化血紅蛋白與相應(yīng)的單抗結(jié)合進(jìn)而發(fā)生凝集反應(yīng),,通過測定吸光度來表示凝集量,,可用于全自動生化分析儀上進(jìn)行測定。儀器也有Bayer的DCA-2000,,要求對樣品成批試驗,,每次試驗均應(yīng)使用一個新試劑盒,操作前應(yīng)注意混勻試劑,。免疫凝集法測定,,精密度較差,CV值一般大于6%,。
離子捕獲法 亦是新近發(fā)展起來的新方法,,代表儀器有Abbott的IMX,其原理是糖化血紅蛋白與相應(yīng)抗體結(jié)合后,,聯(lián)以熒光標(biāo)記物,,形成一反應(yīng)復(fù)合物,再聯(lián)結(jié)帶負(fù)電荷的多聚陰離子復(fù)合物,,而在IMX反應(yīng)孔中的玻璃纖維預(yù)先包被了高分子的四胺合物,,使纖維表面帶正電,使前述的反應(yīng)復(fù)合物吸附在纖維表面,,經(jīng)過一系列清洗后測定其熒光強度,,從而得到糖化血紅蛋白的濃度,該方法適用于成批糖化血紅蛋白標(biāo)本的檢測,。
電泳方法 如毛細(xì)管電泳也能分離檢測糖化血紅蛋白和血紅蛋白的變異體,,但目前尚無商品化,具有批量樣本通過能力的儀器面世,,相當(dāng)程度地限制了該方法的臨床應(yīng)用,,但優(yōu)點是成本低廉、普及性強,。
目前最常用的HbA1c測定方法是離子交換層析法和電泳法。前者精密度高、重復(fù)性好且操作簡單,,已被臨床廣泛采用,。國內(nèi)主要采用Bio-Rex70陽離子樹脂微柱層析法,其微柱可重復(fù)使用多次,。正常參考值:HbA1c:X±2s=6.5±1.5%,;>8.0%為HbA1c增高。
離子交換層析法 分手工和自動兩種,。手工微柱有Bio-Rad和西班牙BIOSYSYEMS等多家公司產(chǎn)品,,手工微柱操作會受到人工因素影響,可能會洗脫不完全或過度洗脫,,并受外界環(huán)境溫度的影響,,而某些血紅蛋白如HbF異常增加時,,也會與糖化血紅蛋白同時洗脫,,從而使結(jié)果產(chǎn)生偏差。 相應(yīng)的儀器以英國DREW SCIENTIFIC公司DS5糖化血紅蛋白儀為例(BIO-RAD公司DIASTA亦為同一產(chǎn)品),,采用微柱法離子交換層析和梯度洗脫技術(shù)可全自動分離血紅蛋白的變異體與亞型,,除可測定糖化血紅蛋白外,還可同時檢測出HbS與HbC的存在與否,,在計算糖化血紅蛋白值時會自動扣除變異體產(chǎn)生的影響,,從而使結(jié)果更為準(zhǔn)確,可靠,,CV值小于2%,。同時該儀器配有專門的稀釋溶血器,可直接進(jìn)行全血操作,,5分鐘即可報告結(jié)果,,并自動儲存樣品檢測結(jié)果,層析柱價格也較為低廉,,適合于較多標(biāo)本的醫(yī)院檢測,。更大型的儀器有DREW SCIENTIFIC公司的Hb-Gold,除可全自動測定糖化血紅蛋白外,,還可分離檢測血紅蛋白的600多種變異體和亞型,,用于地中海貧血等疾病的診斷。
親和層析 是目前糖化血紅蛋白檢測的新方法,,該方法特異性強,。英國DREW
SCIENTIFIC公司的DSI糖化血紅蛋白分析儀日前剛剛獲得美國食品藥品管理署(FDA)的認(rèn)可獲準(zhǔn)上市,作為目前世界唯一的快速床邊糖化血紅蛋白儀,,它采用硼酸親和層析法,,只需10ul全血即可在4分鐘內(nèi)快速分離檢測糖化血紅蛋白,為臨床提供即時的化驗結(jié)果,尤其對于小兒患者而言更有優(yōu)勢,。其檢測結(jié)果也完全達(dá)到并超過臨床要求,,CV值在5%以內(nèi)。
高壓液相 儀器有Bio-Rad公司的VariantⅡ等,,可全自動分離測定糖化血紅蛋白及血紅蛋白的變異體和亞型,,但儀器的操作保養(yǎng)要求較高。
免疫凝集法 原理是糖化血紅蛋白與相應(yīng)的單抗結(jié)合進(jìn)而發(fā)生凝集反應(yīng),,通過測定吸光度來表示凝集量,,可用于全自動生化分析儀上進(jìn)行測定。儀器也有Bayer的DCA-2000,,要求對樣品成批試驗,,每次試驗均應(yīng)使用一個新試劑盒,操作前應(yīng)注意混勻試劑,。免疫凝集法測定,,精密度較差,CV值一般大于6%,。
離子捕獲法 亦是新近發(fā)展起來的新方法,,代表儀器有Abbott的IMX,其原理是糖化血紅蛋白與相應(yīng)抗體結(jié)合后,,聯(lián)以熒光標(biāo)記物,,形成一反應(yīng)復(fù)合物,再聯(lián)結(jié)帶負(fù)電荷的多聚陰離子復(fù)合物,,而在IMX反應(yīng)孔中的玻璃纖維預(yù)先包被了高分子的四胺合物,,使纖維表面帶正電,使前述的反應(yīng)復(fù)合物吸附在纖維表面,,經(jīng)過一系列清洗后測定其熒光強度,,從而得到糖化血紅蛋白的濃度,該方法適用于成批糖化血紅蛋白標(biāo)本的檢測,。
電泳方法 如毛細(xì)管電泳也能分離檢測糖化血紅蛋白和血紅蛋白的變異體,,但目前尚無商品化,具有批量樣本通過能力的儀器面世,,相當(dāng)程度地限制了該方法的臨床應(yīng)用,,但優(yōu)點是成本低廉、普及性強,。