答：尿沉渣的量和壓(涂)片厚度是標(biāo)準(zhǔn)化重要環(huán)節(jié),，在普通玻片上隨意滴加沉渣液或加蓋玻片(甚至不加蓋玻片),，不能提供標(biāo)準(zhǔn)化的結(jié)果。建議使用標(biāo)準(zhǔn)化的沉渣計數(shù)板,。
2.尿沉渣的檢查內(nèi)容應(yīng)包括哪些,？
答：《尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化的建議(討論稿)》中規(guī)定尿沉渣的檢查內(nèi)容應(yīng)包括：
A. 細胞：紅細胞、白細胞,、吞噬細胞,、上皮細胞(包括腎小管上皮細胞、移行上皮細胞,、鱗狀上皮細胞),、異型細胞等。
B. 管型：透明管型,、細胞管型,、顆粒管型、蠟樣管型,、脂肪管型,、混合管型、寬形管型等,。
C. 結(jié)晶：磷酸鹽,、草酸鈣、尿酸結(jié)晶和藥物結(jié)晶等,。
D. 細菌,、寄生蟲(或蟲卵),、真菌、精子,、粘液等,。
E. 臨床醫(yī)生特殊要求的其他成分。
3.干化學(xué)尿分析是怎樣測定白細胞的,？
答：干化學(xué)法檢查尿內(nèi)白細胞的原理,，是基于粒細胞漿內(nèi)含有酯酶，能水解試劑帶膜塊中的吲哚酚酯生成吲哚酚和有機酸,，進一步氧化而顯色,，顏色的深淺與白細胞含量的多少成正比。
高比重尿,、維生素C,、高葡萄糖尿、清蛋白,、淋巴細胞尿,、頭孢菌素可造成測定結(jié)果的假陰性。
4.干化學(xué)尿分析是怎樣測紅細胞的,？
答：紅細胞,、血紅蛋白及肌紅蛋白具有類似過氧化物酶的作用，將無色的底物氧化為有色化合物,。
某些氧化物如漂白粉等可導(dǎo)致假陽性反應(yīng),。尿路感染，由于細菌產(chǎn)生過氧化物酶也會引起假陽性,。
尿液中大量維生素C的存在而產(chǎn)生還原作用,，可抑制試驗氧化作用，引起假陰性,。甲醛也會使試驗敏感性降低或呈假陰性,。
5.為什么說干化學(xué)尿分析只能用于“過篩”？
答：如前所述,，干化學(xué)測定尿液中白細胞,、紅細胞都屬于間接測量，容易受到各種因素干擾,，出現(xiàn)各種假陰性,、假陽性報告。
不同廠家,、不同型號的試劑帶敏感度不一樣,，而且還有批間誤差的影響。
6.尿沉渣分析儀分成哪幾類？
答：盡管近年來在尿沉渣檢查中發(fā)展了一些新的方法(例如用單克隆抗體識別各種細胞),，但就商品化的尿沉渣分析儀而言,，按測量原理分類，目前只分成鏡檢圖像式和流式細胞法兩類,。
在鏡檢圖像式尿沉渣分析儀中按測量池的不同,，又可分為一次性標(biāo)準(zhǔn)定量板式和流動池式兩種。
7.尿沉渣分析儀發(fā)展情況如何,？
答：經(jīng)典的尿沉渣顯微鏡檢查已伴隨檢驗界渡過了漫長歲月，至今仍是最直接最權(quán)威的方法,。尿沉渣分析儀的歷史還是短暫的,，新產(chǎn)品正在不斷涌現(xiàn)。
1988年,，美國國際遙控圖像系統(tǒng)公司研制成功世界上第一臺攝像式尿沉渣分析儀,，由檢驗人員在計算機顯示屏上鑒別細胞。
8.流式細胞法尿沉渣分析儀的測量原理是什么,？
答：這種尿沉渣分析儀應(yīng)用了流式細胞和電阻抗原理：當(dāng)尿標(biāo)本被稀釋并染色后,，靠液壓作用通過鞘液流動池，它被無粒子顆粒的鞘液包圍,，使每個細胞以單個縱列的形式通過流動池的中心軸線,，并被氬激光光束照射。儀器將每個細胞發(fā)出的熒光,、散射光和電阻抗信號轉(zhuǎn)變成電信號,。根據(jù)每個尿液標(biāo)本的直方圖和散射圖來區(qū)分細胞及其形態(tài)。
9.流式細胞法尿沉渣分析儀有何優(yōu)缺點,？
答：流式細胞法尿沉渣分析儀是目前自動化程度最高,、分析速度最快的尿沉渣儀(每個樣品約需72秒鐘)。然而,，它也存在著明顯不足之處：
- 無法區(qū)分小圓上皮細胞的類別(如腎小管上皮細胞,、中層和底層移行上皮細胞等)，必須離心染色鏡檢才能區(qū)分,；
- 只能檢測出透明管型和標(biāo)出有病理管型的存在可能,，只有通過離心鏡檢，才能確認(rèn)是那一類管型,；
- 儀器對酵母細胞,、精子細胞和結(jié)晶有標(biāo)記時都應(yīng)離心鏡檢，才能真正區(qū)分,；
- 不能提供尿沉渣的真實形態(tài)圖,，而是散射圖和直方圖。
所以，專家們的共識是：干化學(xué)尿液分析儀,、流式細胞法尿沉渣分析儀等均只能作為尿液分析的篩選手段,，而只有顯微鏡檢查是最終的。
用戶對選擇流式細胞法尿沉渣分析儀持謹(jǐn)慎態(tài)度的另一些原因是：
- 儀器價格昂貴,，而且日常使用成本也過高,，試劑成本過高；
- 儀器的使用,、維護較復(fù)雜,；
- 容易發(fā)生交叉污染、阻塞等現(xiàn)象,。
流式細胞法尿沉渣分析儀適用于標(biāo)本量非常大的醫(yī)院,，作為尿沉渣篩選檢查設(shè)備，對有疑問的標(biāo)本進一步進行顯微鏡檢查是不可避免的,。
10.流動池式尿沉渣分析儀如何工作,？
答：流動池式尿沉渣分析儀目前市場上有兩類：一類是定量的，流動池內(nèi)有計數(shù)格,；另一類為非定量,，流動池內(nèi)無計數(shù)格，故無法滿足尿沉渣定量檢查標(biāo)準(zhǔn)的要求,。 流動池式定量尿沉渣分析儀一般由流動計數(shù)池,、定量加樣器、顯微鏡,、計算機,、干化學(xué)尿分析儀構(gòu)成。用蠕動泵自動吸入定量尿液,，流動計數(shù)池刻有4個大方格(容積為0.25μl /大格),，每個大方格又分成25小方格(容積為0.01μl /小格)。通過人工操作顯微鏡觀察標(biāo)本,，計數(shù)分型完畢,，自動沖洗標(biāo)本。
11.流動池式尿沉渣分析儀有何特點,？
答：流動池式尿沉渣分析儀的優(yōu)點是基于可靠的顯微鏡觀察和自動進樣,、自動沖洗。其缺點是：
- 測試速度太慢：進樣時需吸入時間和穩(wěn)定時間,，如果反復(fù)沖洗不凈的話還要長 時間浸泡,，而人工操作顯微鏡不僅緩慢而且工作強度大；
- 操作難以規(guī)范化,，受人為因素影響,，同一標(biāo)本往往因觀察者不同而結(jié)果不同,，即使同一觀察者也會因兩次觀察路徑不同而結(jié)果不同；
- 存在不可避免的交叉污染,，這是流動池式儀器的通?。?/p>
- 容易發(fā)生阻塞,，連接部的死區(qū)造成污垢的積累,；
- 如果對標(biāo)本染色就會污染流動池，導(dǎo)致無法沖洗干凈,。
12.選購流動池式尿沉渣分析儀時應(yīng)注意什么,？
答：目前市場上流動池式尿沉渣分析儀會出現(xiàn)以下一些問題：
- 非定量流動池上沒有定量刻度，當(dāng)然也就無法以XX/μl報告,；
- 流動池內(nèi)腔厚度未經(jīng)?；嬃浚瑹o法保證被測樣品的體積精度,；
- 流動池內(nèi)腔過厚，細胞無法在同一焦平面上觀察到,，并且樣品漂移容易發(fā)生漏檢,；
- 片面強調(diào)染色，造成流動池污染,。
13.鏡檢時如何才能克服尿沉渣標(biāo)本的非均勻性,？
答：尿沉渣標(biāo)本的顯著特征就是非均勻性。為了克服標(biāo)本非均勻性對測試結(jié)果的影響,，鏡檢時要做到兩條：
- 保證不少于最小觀察體積,；
- 嚴(yán)格按規(guī)定路徑進行觀察。
14.什么叫自動顯微平臺技術(shù),？
答：所謂自動顯微平臺技術(shù)是指顯微鏡的載物平臺(X,、Y軸方向)的運動、聚焦(Z軸方向),、物鏡的切換,、光源的強弱等等都受控于計算機。也就是說,，只要通過鼠標(biāo),、控制器、甚至網(wǎng)上傳來的控制命令,，顯微鏡就能按照人們的意愿動作起來,。普利生AMP2000型自動顯微平臺的掃描精度達1微米。因此,，該技術(shù)具有廣闊的應(yīng)用前景,，目前已成功應(yīng)用于病理遠程全景同步會診,、尿沉渣自動掃描等領(lǐng)域。
15.用于離心尿液的離心管有何要求,？
答：《尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化的建議(討論稿)》中規(guī)定：“應(yīng)具備以下條件：清潔,、透明、帶刻度,，刻度應(yīng)至少標(biāo)明10ml,、1ml、0.2ml,，容積應(yīng)12ml,，試管底部呈錐形或縮窄形。試管口應(yīng)盡可能具有密封裝置,，最好使用不易破碎一次性塑料或玻璃離心管,。”
16.尿沉渣專用離心管有何特點？
答：目前,，定量尿沉渣檢查普遍采用的一種專用離心管,，管壁有刻度，可盛放10ml尿液,。管的底部有一個0.2ml的突出部分,，在倒去離心后的上清液時，利用液面的表面張力將0.2ml的尿沉渣樣品留在這里面,。也就是說很方便地獲得了濃縮50倍的標(biāo)本,。
17.是不是任何標(biāo)本都必須濃縮50倍？
答：這是一種誤解,。一般標(biāo)本濃縮50倍后,，可提高檢測率，減少觀察體積,。對于那些明顯混濁的標(biāo)本,，可以不濃縮，以免濃縮后又要稀釋,，稀釋過程很容易引入測量誤差,。計算數(shù)據(jù)時要考慮到濃縮與不濃縮的區(qū)別。
18.對于離心機有何要求,？
答：《尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化的建議(討論稿)》中規(guī)定：“采用水平式離心機,，離心時應(yīng)蓋上蓋，以保證安全,。離心時,，機內(nèi)溫度應(yīng)盡可能保持<25°C，離心機相對離心力應(yīng)在400xg左右,。
離心機轉(zhuǎn)速與相對離心力的換算公式為：
g = 11.8 x ( rpm/1000 )2 x R
或 rpm = 1000 x ( 500/11.8 x R )1/2
注：rpm為每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)
R為半徑,，指從離心機軸中央到離心管底部的距離
g為相對離心力
例如：水平式離心機半徑為20cm時,，采用1338r/min(或1350r/min)
水平式離心機半徑為16cm時，采用1495r/min(或1500r/min)
水平式離心機半徑為10cm時,，采用1892r/min(或1900r/min)
19.對顯微鏡有何要求,？
答：《尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化的建議(討論稿)》中建議：“尿沉渣檢查盡可能使用具有內(nèi)置光源的顯微鏡，光線強度可調(diào),，應(yīng)具備40倍,、10倍的物鏡和10倍的目鏡。同一實驗室如有多臺顯微鏡,，各顯微鏡的物鏡及目鏡的放大倍數(shù)應(yīng)一致,。”
同時又建議：“有條件的實驗室應(yīng)開展各種尿液有形成分的染色檢查，配置多種類型顯微鏡(如相差顯微鏡,，偏振光顯微鏡等),，以便于有形成分的進一步鑒別。”
20.FASTREAD 10尿沉渣定量分析板有何特點,？
答：FASTREAD 10板為NCCLS和中華醫(yī)學(xué)會檢驗分會推薦的一次性尿沉渣定量分析板,。
每塊板上有10個大格，即可放10個樣品,。每個大格的可觀察體積約7μl ,，其中劃有刻度的計數(shù)區(qū)的總體積為精確的1μl 。每個計數(shù)區(qū)分為10個中格,，每個中格又劃分為16個小格。也就是說,，1μl 體積的樣品,，在這里被精密地分成160個小格。
由于采用一次性定量板,，所以不再需要清洗,，也不用擔(dān)心染色劑的玷污，省力省時無交叉污染,。
定量板的價格便宜,，而且不需其它試劑。
顧可梁教授通過對普通載玻片不加蓋玻片法,、載玻片加蓋玻片法,、改良Neubauer計數(shù)池法、FASTREAD 10定量板法四種方法進行比較后指出,，在實驗室常用的尿沉渣檢查法中,，以定量分析板法的變異系數(shù)最小(尿沉渣鏡檢，上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志,，2000,；15(2)：68),。
21.尿沉渣標(biāo)本染色的目的是什么？
答：相當(dāng)多專家贊同尿沉渣非染色鏡檢,，他們對尿沉渣染色的疑慮是：
- 某些染液的成分會導(dǎo)致溶血現(xiàn)象,，在低比重尿中尤為明顯；
- 由于大量染液的加入而引起稀釋比的計算誤差,。
應(yīng)當(dāng)指出在大多數(shù)情況下尿沉渣非染色鏡檢足以勝任,，然而有些情況下，染色的優(yōu)點將很有幫助,。選擇合適的染色方法可減小發(fā)生溶血的幾率,。至于染液稀釋標(biāo)本而引起的誤差可從技術(shù)上予以改進。
尿沉渣染色的目的主要是：
- 防止尿沉渣標(biāo)本中主要成分在鏡檢時遺漏和誤認(rèn),；
- 便于確定某些特殊成分(如脂肪球等),；
- 判斷難辨別的尿沉渣成分(如半透明的上皮細胞等)或異形細胞等；
- 制備臨床或科研所需永久性標(biāo)本,。
22.如何進行尿沉渣標(biāo)本染色,？
答：建議尿沉渣臨床檢驗采用以下步驟，以避免染液對尿沉渣標(biāo)本的稀釋作用：
- 在標(biāo)準(zhǔn)定量分析池中進行非染色定量計數(shù),；
- 對于有疑問的標(biāo)本,，可進一步染色分型，可在玻片上觀察,。
如果要提高分辨率,，采用位相差顯微鏡是一種明智的選擇。而偏振光顯微鏡對尿中脂肪和結(jié)晶的鑒別也很有幫助,。
對于采用一次性FASTREAD板的用戶當(dāng)然可以直接在定量池中測量染色標(biāo)本,，操作簡單方便。
23.有哪些常用尿沉渣標(biāo)本染色方法,？
答：常用的尿沉渣染色方法有濕片染色（活體染色,、超活體染色）和固定染色（組織化學(xué)染色、熒光染色和免疫化學(xué)特定成分染色）兩類,。
不同的染色方法有助于不同的檢測目的,，有時它們往往是互補的。
在大部分場合,，采用SM(Sternheimer-Malbin)或S(Sternheimer)活體染色已能解決問題,。
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