在生化分析測(cè)量中,，酶的測(cè)定比較復(fù)雜,，要求條件較高，測(cè)試比較困難,。一般生化分析儀只要酶的測(cè)定準(zhǔn)確,，重復(fù)性好，其它項(xiàng)目的測(cè)定一般都會(huì)沒有問(wèn)題?，F(xiàn)就生化分析儀酶分析中常見的測(cè)試不準(zhǔn)確,、重復(fù)性差的幾點(diǎn)原因進(jìn)行分析，以供使用者和維修工程師參考,。
生化分析儀酶的測(cè)定一般用動(dòng)力學(xué)法進(jìn)行測(cè)試,，其原理是在酶反應(yīng)的最適條件下，用物理,、化學(xué)或酶促反應(yīng)的分析方法,，在反應(yīng)速度恒定期（零級(jí)反應(yīng)期）來(lái)連續(xù)觀察和記錄一定反應(yīng)時(shí)間內(nèi)底物或產(chǎn)物量的變化，以單位時(shí)間酶反應(yīng)初速度計(jì)算出酶活力的大小和代謝物的濃度,。零級(jí)反應(yīng)期,，指反應(yīng)速度與底物濃度的零次方成正比，也就是與底物濃度無(wú)關(guān),。在零級(jí)反應(yīng)期期間整個(gè)反應(yīng)過(guò)程中,，反應(yīng)物可以勻速地生成某個(gè)產(chǎn)物，導(dǎo)致被測(cè)溶液在某一波長(zhǎng)下吸光度均勻地減小或增加，減小或增加的速度（ΔA/min）與被測(cè)物的活性或濃度成正比,。計(jì)算方法有兩種：
1）絕對(duì)法：
酶活力(U/L)＝ΔA×(反應(yīng)液體積/樣品體積)×(1000/消光系數(shù))
2）相對(duì)法：
(U/L或mmol/L)＝［ΔA(測(cè)定)/ΔA(標(biāo)準(zhǔn))］×標(biāo)準(zhǔn)物的活力或濃度
因此,，生化分析儀酶的測(cè)定與許多條件有關(guān)。條件的設(shè)置,，如：波長(zhǎng)（單波長(zhǎng),、雙波長(zhǎng)）、溫度,、參數(shù),、測(cè)試方法，延遲和測(cè)試時(shí)間,，吸液量等,。另外還與廠家的試劑，樣品的采集,、保存有關(guān),，同時(shí)與及時(shí)進(jìn)行質(zhì)控，從一個(gè)樣品進(jìn)入另一個(gè)樣品測(cè)試時(shí)及時(shí)清洗也有很大關(guān)系,。
例如GPT的測(cè)試一般選擇為：波長(zhǎng)為340nm,，測(cè)定時(shí)間為20秒，延遲時(shí)間為40秒,，吸液量為350µl,，溫度設(shè)定為37℃，試劑空白可任意選擇,。
因此GPT的測(cè)試結(jié)果與以下幾點(diǎn)有關(guān)：
1,、340nm為波長(zhǎng)低端，能量較低,，同時(shí)340nm濾光片使用較多,，易老化。所以波長(zhǎng)漂移不準(zhǔn),，半寬度變化都會(huì)影響測(cè)量的準(zhǔn)確度和重復(fù)性,。
2、動(dòng)態(tài)法測(cè)試有延遲時(shí)間,，測(cè)試時(shí)間要求,。延遲時(shí)間在動(dòng)態(tài)法中為預(yù)反應(yīng)時(shí)間，測(cè)試時(shí)間在動(dòng)態(tài)法中為測(cè)試的總時(shí)間,。零級(jí)動(dòng)力學(xué)法是針對(duì)特定時(shí)間段而言的,，酶反應(yīng)剛啟動(dòng)時(shí)反應(yīng)比較復(fù)雜，雜反應(yīng)較多,，必需經(jīng)過(guò)一段延遲時(shí)間才能進(jìn)入穩(wěn)定反應(yīng)期,，各試劑商對(duì)這兩段時(shí)間有嚴(yán)格規(guī)定,。所以動(dòng)態(tài)法測(cè)試一般溫度在37℃，延遲時(shí)間不少于15秒為好,。
3,、對(duì)于參數(shù)的輸入應(yīng)按試劑要求輸入其給定值，一般試劑商在試劑盒說(shuō)明書中給予說(shuō)明,。
4,、反應(yīng)溫度。
5,、測(cè)試空白要準(zhǔn)確,。
6、吸液量的大小直接影響交叉污染和測(cè)量的重復(fù)性,，建議測(cè)試污染性大的物質(zhì)試劑量應(yīng)相應(yīng)增加,。一般應(yīng)大于400µl，一般項(xiàng)目為500µl即可,。
7、測(cè)試不準(zhǔn)確,、重復(fù)性差從操作上看主要有：儀器本身原因如比色杯中有氣泡,；光源燈老化；光源電壓不穩(wěn),；340nm濾光片性能變差,，透射性變小,；波長(zhǎng)不準(zhǔn)確等有關(guān),。一般檢查液路接口是否松動(dòng)漏氣，更換光源燈泡和340nm濾光片即可解決,。至于電路問(wèn)題,，加熱元件損壞，溫度不受控的問(wèn)題只能由工程師解決,。
總之酶的測(cè)定影響準(zhǔn)確度的因素很多,，只要認(rèn)真操作，綜合分析影響測(cè)定的各項(xiàng)因素,，認(rèn)真分析,，酶測(cè)定的問(wèn)題不難解決的。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn)只要試劑,、樣品準(zhǔn)確,，保存得當(dāng)，樣品預(yù)處理仔細(xì),，儀器經(jīng)常維護(hù),、保養(yǎng),，認(rèn)真操作，問(wèn)題會(huì)自行解決,。
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生化分析儀酶的測(cè)定一般用動(dòng)力學(xué)法進(jìn)行測(cè)試,，其原理是在酶反應(yīng)的最適條件下，用物理,、化學(xué)或酶促反應(yīng)的分析方法,，在反應(yīng)速度恒定期（零級(jí)反應(yīng)期）來(lái)連續(xù)觀察和記錄一定反應(yīng)時(shí)間內(nèi)底物或產(chǎn)物量的變化，以單位時(shí)間酶反應(yīng)初速度計(jì)算出酶活力的大小和代謝物的濃度,。零級(jí)反應(yīng)期,，指反應(yīng)速度與底物濃度的零次方成正比，也就是與底物濃度無(wú)關(guān),。在零級(jí)反應(yīng)期期間整個(gè)反應(yīng)過(guò)程中,，反應(yīng)物可以勻速地生成某個(gè)產(chǎn)物，導(dǎo)致被測(cè)溶液在某一波長(zhǎng)下吸光度均勻地減小或增加，減小或增加的速度（ΔA/min）與被測(cè)物的活性或濃度成正比,。計(jì)算方法有兩種：
1）絕對(duì)法：
酶活力(U/L)＝ΔA×(反應(yīng)液體積/樣品體積)×(1000/消光系數(shù))
2）相對(duì)法：
(U/L或mmol/L)＝［ΔA(測(cè)定)/ΔA(標(biāo)準(zhǔn))］×標(biāo)準(zhǔn)物的活力或濃度
因此,，生化分析儀酶的測(cè)定與許多條件有關(guān)。條件的設(shè)置,，如：波長(zhǎng)（單波長(zhǎng),、雙波長(zhǎng)）、溫度,、參數(shù),、測(cè)試方法，延遲和測(cè)試時(shí)間,，吸液量等,。另外還與廠家的試劑，樣品的采集,、保存有關(guān),，同時(shí)與及時(shí)進(jìn)行質(zhì)控，從一個(gè)樣品進(jìn)入另一個(gè)樣品測(cè)試時(shí)及時(shí)清洗也有很大關(guān)系,。
例如GPT的測(cè)試一般選擇為：波長(zhǎng)為340nm,，測(cè)定時(shí)間為20秒，延遲時(shí)間為40秒,，吸液量為350µl,，溫度設(shè)定為37℃，試劑空白可任意選擇,。
因此GPT的測(cè)試結(jié)果與以下幾點(diǎn)有關(guān)：
1,、340nm為波長(zhǎng)低端，能量較低,，同時(shí)340nm濾光片使用較多,，易老化。所以波長(zhǎng)漂移不準(zhǔn),，半寬度變化都會(huì)影響測(cè)量的準(zhǔn)確度和重復(fù)性,。
2、動(dòng)態(tài)法測(cè)試有延遲時(shí)間,，測(cè)試時(shí)間要求,。延遲時(shí)間在動(dòng)態(tài)法中為預(yù)反應(yīng)時(shí)間，測(cè)試時(shí)間在動(dòng)態(tài)法中為測(cè)試的總時(shí)間,。零級(jí)動(dòng)力學(xué)法是針對(duì)特定時(shí)間段而言的,，酶反應(yīng)剛啟動(dòng)時(shí)反應(yīng)比較復(fù)雜，雜反應(yīng)較多,，必需經(jīng)過(guò)一段延遲時(shí)間才能進(jìn)入穩(wěn)定反應(yīng)期,，各試劑商對(duì)這兩段時(shí)間有嚴(yán)格規(guī)定,。所以動(dòng)態(tài)法測(cè)試一般溫度在37℃，延遲時(shí)間不少于15秒為好,。
3,、對(duì)于參數(shù)的輸入應(yīng)按試劑要求輸入其給定值，一般試劑商在試劑盒說(shuō)明書中給予說(shuō)明,。
4,、反應(yīng)溫度。
5,、測(cè)試空白要準(zhǔn)確,。
6、吸液量的大小直接影響交叉污染和測(cè)量的重復(fù)性,，建議測(cè)試污染性大的物質(zhì)試劑量應(yīng)相應(yīng)增加,。一般應(yīng)大于400µl，一般項(xiàng)目為500µl即可,。
7、測(cè)試不準(zhǔn)確,、重復(fù)性差從操作上看主要有：儀器本身原因如比色杯中有氣泡,；光源燈老化；光源電壓不穩(wěn),；340nm濾光片性能變差,，透射性變小,；波長(zhǎng)不準(zhǔn)確等有關(guān),。一般檢查液路接口是否松動(dòng)漏氣，更換光源燈泡和340nm濾光片即可解決,。至于電路問(wèn)題,，加熱元件損壞，溫度不受控的問(wèn)題只能由工程師解決,。
總之酶的測(cè)定影響準(zhǔn)確度的因素很多,，只要認(rèn)真操作，綜合分析影響測(cè)定的各項(xiàng)因素,，認(rèn)真分析,，酶測(cè)定的問(wèn)題不難解決的。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn)只要試劑,、樣品準(zhǔn)確,，保存得當(dāng)，樣品預(yù)處理仔細(xì),，儀器經(jīng)常維護(hù),、保養(yǎng),，認(rèn)真操作，問(wèn)題會(huì)自行解決,。
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