1.基本原理先將標準物或血樣品與抗血清混勻,免疫反應6~24h,,使抗原與抗體充分結合,,甚至達到平衡,然后再加入標記抗原,,與抗體反應12~24h,,最后分離B與F,,這稱為順序飽和分析法,。
應用順序飽和加樣,,可以提高測定方法的靈敏度,。Utiger在做人促甲狀腺激素(TSH)放射免疫分析時,,將標記物延至第2天加入,,發(fā)現其靈敏度增加兩倍。如果縮短最后的溫育時間,,仍可取得滿意的結果,。所以一般認為,在順序飽和加樣中,,第1次溫育時間可以長,,而第2次溫育時間要短,這樣可以提高靈敏度,。但也有相反的意見,,認為順序飽和加樣,是使用過量抗體,,會使靈敏度受到一定影響,。如果使用抗體不過量,,溫育時間縮短,在抗原和抗體結合未達到平衡飽和時就加入標記物,,這樣既不影響加靈敏度,,反而比較穩(wěn)定,甚至可提高靈敏度,。
2.加樣程序 以人血漿精氨酸加壓素RIA測定程序為例(直接測定),。
(1)加樣(單位μl,;總反應體積600μl)
?。?)孵育:4℃,24h,。
?。?)分離B與F。
無肽血漿,,用于血漿的直接測定,。其制備方法為:在電磁攪拌下,抽取2%加膜活性炭溶液5ml,,共兩管,,離心、去上清,。血漿5ml,,倒入上述活性炭管中,加蓋,,充分振蕩10min,,離心,上清倒入上述另一活性炭管中,,振蕩10min,,再離心,取上清,,即無肽血漿,。血漿中的生物活性物質被活性炭吸附而去除,。
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