日本日立產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社生產(chǎn)的H1TACHI7060型全自動(dòng)生化分析儀具有準(zhǔn)確度及精密度高、檢測(cè)快速,、靈敏,、操作簡(jiǎn)便等特性。我科于2000年購進(jìn)一臺(tái),，在使用過程中,，我們發(fā)現(xiàn)其測(cè)光點(diǎn)參數(shù)設(shè)置中有幾個(gè)值得注意的問題，現(xiàn)總結(jié)如下,，供同行參考,。
1 在2Point End(兩點(diǎn)終點(diǎn)法)、雙試劑中的設(shè)置儀器是在不同的兩個(gè)測(cè)光點(diǎn)測(cè)定所得到吸光度,，利用二者差值來扣除樣品空白,，這樣求得待測(cè)物濃度的方法即為該生化儀的兩點(diǎn)終點(diǎn)法。在雙試劑檢測(cè)中,，儀器加第2試劑(R2)是在測(cè)光點(diǎn)第16點(diǎn)與第17點(diǎn)之間,，為了提高結(jié)果的準(zhǔn)確性,，第一測(cè)光點(diǎn)應(yīng)設(shè)置在第17點(diǎn)之前，即在加入R2之前,，第1試劑(R 1)之后,。這時(shí)的生化反應(yīng)一般還未啟動(dòng)，這樣,，就能有效消除樣品的色索以及溶血,、脂濁、黃疸的光譜干擾,。一般設(shè)置在第16點(diǎn)似更為恰當(dāng),，因?yàn)樵诖蠖嗝复俜磻?yīng)中，第一試劑中缺少部分工具酶或底物,，可以在第一孵育期內(nèi)充分消除內(nèi)源性干擾,，加R2才啟動(dòng)酶促反應(yīng)，這時(shí),，就有效避免了酶促反應(yīng)中的內(nèi)源性干擾,。
2 在Rate A(速率法A)中的設(shè)置酶與底物混合后需要有一定的時(shí)間讓酶被激活，直到線性反應(yīng)期才能開始監(jiān)測(cè),，有的項(xiàng)目需要用工具酶將內(nèi)源性代謝產(chǎn)物耗盡,。一般單試劑只需30 S，常用項(xiàng)目中ALT,、AST與CK—NAC需要特別注意,。ALT與AST試劑盒說明書上都說是60 S，這用于正常人的血清已足夠,，可是大量?jī)?nèi)源性酮酸增加的情況很多,，雖然試劑里有過量的乳酸脫氫酶，但是大量酮酸在60 S內(nèi)仍不能完全消除,，監(jiān)測(cè)期內(nèi)剩余的酮酸會(huì)被當(dāng)作ALT或AST,，所以延滯期應(yīng)增加到90 S到120 S。HITACHI7060生化儀兩個(gè)相鄰測(cè)光點(diǎn)間的時(shí)間約為19．7 S,，所以單試劑起始測(cè)光點(diǎn)以第6點(diǎn)左右為宜,，雙試劑以第22點(diǎn)左右為宜。CK—NAC試劑中工具酶的數(shù)量較多,，酶被逐個(gè)激活需較長(zhǎng)時(shí)間,，所以應(yīng)以延長(zhǎng)至約180 S時(shí)的測(cè)光點(diǎn)作為第一測(cè)光點(diǎn)為宜。類似情況在生化反應(yīng)中還有一些,，我們一定要根據(jù)實(shí)驗(yàn)反應(yīng)原理,，結(jié)合樣本中可能出現(xiàn)的干擾因素等情況，全面考慮,，恰當(dāng)選擇測(cè)光點(diǎn),，以提高檢測(cè)的特異性與準(zhǔn)確性,。
3 在反應(yīng)時(shí)間上有特殊要求的項(xiàng)目中的設(shè)置 如目前最常用的Jaffe反應(yīng)法測(cè)定肌酐時(shí)，由于其特異性不高,，血,、尿中的維生素C、丙酮酸,、丙酮,、葡萄糖、蛋白質(zhì)等許多化合物也能與堿性苦味酸鹽生成紅色物質(zhì),，這些非肌酐色原性物質(zhì)有兩類：一類為快速反應(yīng)假肌酐物質(zhì),，在樣品與堿性苦味酸混合后20 S內(nèi)迅速出現(xiàn)反應(yīng)，產(chǎn)生非肌酐性的有色化合物,。測(cè)定時(shí)設(shè)置20 S延遲期,，可以排除此類干擾。另一類為慢速反應(yīng)假肌酐物質(zhì),，一般在樣品和堿性苦味酸混合后8OS到100 S才開始反應(yīng),。這樣在20 S到80 S之間，出現(xiàn)“窗口期”,。此時(shí)肌酐與苦味酸的呈色反應(yīng)占主導(dǎo)地位,。有研究者發(fā)現(xiàn)，“窗口期”上限為60 S口](葉應(yīng)嫵,，王毓三．全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程．第2版．南京：東南大學(xué)出版社,，1997：334)。為了提高檢測(cè)的特異性,，我們特選擇使用HITACHI7060型生化儀提供的2 Point Rate(兩點(diǎn)速率法)來檢測(cè)肌酐,，測(cè)光點(diǎn)設(shè)置在試劑與樣本混合后(雙試劑即為加入R2后)第25到第60 S之間為宜。又如,，血清白蛋白BCG染料結(jié)合法為即時(shí)反應(yīng),，30 S后n球蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白,、觸珠蛋白也將出現(xiàn)呈色反應(yīng),，所以其測(cè)光點(diǎn)應(yīng)設(shè)置于30 S左右的位置,，不能任意延長(zhǎng)時(shí)間,，這樣，既可以提高檢測(cè)的特異性,，又可以提高儀器檢測(cè)的效率,。
4 系數(shù)K值較大時(shí)的設(shè)置 系數(shù)K值對(duì)酶的測(cè)定十分重要，過高雖然測(cè)定線性較寬,，但重復(fù)性差,，這與儀器測(cè)定的噪音有關(guān),。日立7060型自動(dòng)生化儀吸光度噪音一般控制在0．001左右。如K值為8000,，每分鐘測(cè)定吸光度如有0．001微小變化,，根據(jù)上式，結(jié)果將出現(xiàn)8 U／L的誤差,，這對(duì)于一些參考值較低的酶如轉(zhuǎn)氨酶來說顯然太大,。這時(shí)，我們可以將測(cè)光點(diǎn)間的時(shí)間由1 rain延長(zhǎng)到2 rain,，此時(shí),，0．001噪音對(duì)每分鐘測(cè)定吸光度誤差將減少一半。也就是說,，對(duì)較大的系數(shù)K值,，我們可以根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)?shù)匮娱L(zhǎng)測(cè)定時(shí)間．合理設(shè)置測(cè)光點(diǎn)，以減小誤差,。
http://bbs.aibaoyl.com/
