日本日立產(chǎn)業(yè)株式會社生產(chǎn)的H1TACHI7060型全自動生化分析儀具有準(zhǔn)確度及精密度高、檢測快速,、靈敏,、操作簡便等特性。我科于2000年購進一臺,，在使用過程中,，我們發(fā)現(xiàn)其測光點參數(shù)設(shè)置中有幾個值得注意的問題，現(xiàn)總結(jié)如下，供同行參考,。
1 在2Point End(兩點終點法),、雙試劑中的設(shè)置儀器是在不同的兩個測光點測定所得到吸光度,，利用二者差值來扣除樣品空白，這樣求得待測物濃度的方法即為該生化儀的兩點終點法,。在雙試劑檢測中，儀器加第2試劑(R2)是在測光點第16點與第17點之間，為了提高結(jié)果的準(zhǔn)確性,，第一測光點應(yīng)設(shè)置在第17點之前,，即在加入R2之前,，第1試劑(R 1)之后,。這時的生化反應(yīng)一般還未啟動,，這樣,，就能有效消除樣品的色索以及溶血、脂濁,、黃疸的光譜干擾,。一般設(shè)置在第16點似更為恰當(dāng),，因為在大多酶促反應(yīng)中，第一試劑中缺少部分工具酶或底物,，可以在第一孵育期內(nèi)充分消除內(nèi)源性干擾,，加R2才啟動酶促反應(yīng),，這時,，就有效避免了酶促反應(yīng)中的內(nèi)源性干擾。
2 在Rate A(速率法A)中的設(shè)置酶與底物混合后需要有一定的時間讓酶被激活,，直到線性反應(yīng)期才能開始監(jiān)測,，有的項目需要用工具酶將內(nèi)源性代謝產(chǎn)物耗盡。一般單試劑只需30 S,，常用項目中ALT,、AST與CK—NAC需要特別注意。ALT與AST試劑盒說明書上都說是60 S,，這用于正常人的血清已足夠,，可是大量內(nèi)源性酮酸增加的情況很多，雖然試劑里有過量的乳酸脫氫酶,，但是大量酮酸在60 S內(nèi)仍不能完全消除,，監(jiān)測期內(nèi)剩余的酮酸會被當(dāng)作ALT或AST，所以延滯期應(yīng)增加到90 S到120 S,。HITACHI7060生化儀兩個相鄰測光點間的時間約為19．7 S,，所以單試劑起始測光點以第6點左右為宜，雙試劑以第22點左右為宜,。CK—NAC試劑中工具酶的數(shù)量較多,，酶被逐個激活需較長時間，所以應(yīng)以延長至約180 S時的測光點作為第一測光點為宜,。類似情況在生化反應(yīng)中還有一些,，我們一定要根據(jù)實驗反應(yīng)原理，結(jié)合樣本中可能出現(xiàn)的干擾因素等情況,，全面考慮,，恰當(dāng)選擇測光點，以提高檢測的特異性與準(zhǔn)確性。
3 在反應(yīng)時間上有特殊要求的項目中的設(shè)置 如目前最常用的Jaffe反應(yīng)法測定肌酐時,，由于其特異性不高,，血、尿中的維生素C,、丙酮酸,、丙酮、葡萄糖,、蛋白質(zhì)等許多化合物也能與堿性苦味酸鹽生成紅色物質(zhì),，這些非肌酐色原性物質(zhì)有兩類：一類為快速反應(yīng)假肌酐物質(zhì)，在樣品與堿性苦味酸混合后20 S內(nèi)迅速出現(xiàn)反應(yīng),，產(chǎn)生非肌酐性的有色化合物,。測定時設(shè)置20 S延遲期，可以排除此類干擾,。另一類為慢速反應(yīng)假肌酐物質(zhì),，一般在樣品和堿性苦味酸混合后8OS到100 S才開始反應(yīng)。這樣在20 S到80 S之間,，出現(xiàn)“窗口期”,。此時肌酐與苦味酸的呈色反應(yīng)占主導(dǎo)地位。有研究者發(fā)現(xiàn),，“窗口期”上限為60 S口](葉應(yīng)嫵,，王毓三．全國臨床檢驗操作規(guī)程．第2版．南京：東南大學(xué)出版社，1997：334),。為了提高檢測的特異性,，我們特選擇使用HITACHI7060型生化儀提供的2 Point Rate(兩點速率法)來檢測肌酐，測光點設(shè)置在試劑與樣本混合后(雙試劑即為加入R2后)第25到第60 S之間為宜,。又如,，血清白蛋白BCG染料結(jié)合法為即時反應(yīng)，30 S后n球蛋白,、轉(zhuǎn)鐵蛋白,、觸珠蛋白也將出現(xiàn)呈色反應(yīng)，所以其測光點應(yīng)設(shè)置于30 S左右的位置,，不能任意延長時間,，這樣，既可以提高檢測的特異性,，又可以提高儀器檢測的效率,。
4 系數(shù)K值較大時的設(shè)置 系數(shù)K值對酶的測定十分重要，過高雖然測定線性較寬,，但重復(fù)性差，這與儀器測定的噪音有關(guān)。日立7060型自動生化儀吸光度噪音一般控制在0．001左右,。如K值為8000,，每分鐘測定吸光度如有0．001微小變化，根據(jù)上式,，結(jié)果將出現(xiàn)8 U／L的誤差,，這對于一些參考值較低的酶如轉(zhuǎn)氨酶來說顯然太大。這時,，我們可以將測光點間的時間由1 rain延長到2 rain,，此時，0．001噪音對每分鐘測定吸光度誤差將減少一半,。也就是說,，對較大的系數(shù)K值，我們可以根據(jù)實際情況適當(dāng)?shù)匮娱L測定時間．合理設(shè)置測光點,，以減小誤差,。
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