1. 石蠟切片脫蠟和水化后,,用PBS(pH7.4)沖洗三次,,每次3分鐘(3x3`)。
2. 根據(jù)每一種抗體的要求,對(duì)組織抗原進(jìn)行相應(yīng)的修復(fù),。
3. 如果有必要,,每張切片加1滴(試劑A)室溫下孵育10分鐘,以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性,。
PBS沖洗3x3`,。
4. 除去PBS液,每張切片加1滴或50μl的第一抗體(用戶自選),,室溫下孵育60分鐘或4℃
過夜,,建議參見每種抗體的說明書。
5. PBS沖洗3x5`,。除去PBS液,,每張切片加1滴或50μl酶二抗聚合物(試劑B),室溫下孵
育40分鐘或37度孵育30分鐘或4度過夜,。PBS沖洗3x3`,。
6. 除去PBS液,每張切片加1滴或50μl新鮮配制的DAB或AEC溶液(詳見DAB或AEC使用
說明書),,顯微鏡下觀察3-5分鐘(DAB)或10分鐘(AEC),。
7. 自來水沖洗,蘇木素復(fù)染,,若有必要,,可用0.1%HCl分化,自來水沖洗,,PBS返藍(lán)。
8. 如果用DAB顯色,,則切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥,,(二甲苯透明),中性樹膠封固,;如果
用AEC顯色,,則切片不能酒精脫水,而直接用水性封片劑,。封片,。
灝洋生物 15:15:15
名稱 :connexin 43
產(chǎn)品編號(hào) :CM7269
價(jià)格/規(guī)格:0.1ml/20ug
技術(shù)指標(biāo) :小鼠抗人,大鼠,,小鼠 單克隆抗體 Ig分類:IgG2a
適用組織 :冰凍/石蠟
陽性部位:細(xì)胞漿
組織處理:0.1mol枸櫞酸緩沖夜-熱修復(fù)15分鐘(95度)
產(chǎn)品說明 :
產(chǎn)地: Cellscience
二步法(無生物素PV6000系列),,
實(shí)驗(yàn)步驟使用說明:
試劑盒組成
試劑A: 3% H2O2
試劑B: Polymerized HRP-Anti Mouse或Rabbit IgG 3.0ml/6.0ml/18ml(根據(jù)一抗宿主而定)
PV6001(兔)適用于兔來源的一抗
PV6002(小鼠)適用于小鼠來源的一抗
PV6000 (通用型) 適用于兔,小鼠,,大鼠來源的一抗
3.0ml- 價(jià)格 ¥300.00 / 6.0ml- 價(jià)格 ¥580.00 / 18ml- 價(jià)格 ¥1780.00
試劑盒規(guī)格及貯存條件
規(guī)格:3ml(50片)/6ml(120 片)/18ml(360 片)
貯存條件:本試劑盒宜4℃保存,,穩(wěn)定期1 年
免疫組化染色步驟
1. 石蠟切片脫蠟和水化后,用PBS(pH7.4)沖洗三次,,每次3分鐘(3x3`),。
2. 根據(jù)每一種抗體的要求,,對(duì)組織抗原進(jìn)行相應(yīng)的修復(fù)。
3. 如果有必要,,每張切片加1滴(試劑A)室溫下孵育10分鐘,,以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。
PBS沖洗3x3`,。
4. 除去PBS液,,每張切片加1滴或50μl的第一抗體(用戶自選),室溫下孵育60分鐘或4℃
過夜,,建議參見每種抗體的說明書,。
5. PBS沖洗3x5`。除去PBS液,,每張切片加1滴或50μl酶二抗聚合物(試劑B),,室溫下孵
育40分鐘或37度孵育30分鐘或4度過夜。PBS沖洗3x3`,。
6. 除去PBS液,,每張切片加1滴或50μl新鮮配制的DAB或AEC溶液(詳見DAB或AEC使用
說明書),顯微鏡下觀察3-5分鐘(DAB)或10分鐘(AEC),。
7. 自來水沖洗,,蘇木素復(fù)染,若有必要,,可用0.1%HCl分化,,自來水沖洗,PBS返藍(lán),。
8. 如果用DAB顯色,,則切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥,(二甲苯透明),,中性樹膠封固,;如果
用AEC顯色,則切片不能酒精脫水,,而直接用水性封片劑,。封片。