1. 石蠟切片脫蠟和水化后,，用PBS(pH7.4)沖洗三次,，每次3分鐘（3x3`）,。
2. 根據(jù)每一種抗體的要求,，對組織抗原進(jìn)行相應(yīng)的修復(fù)。
3. 如果有必要,，每張切片加1滴（試劑A）室溫下孵育10分鐘,，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。
PBS沖洗3x3`,。
4. 除去PBS液,，每張切片加1滴或50μl的第一抗體(用戶自選)，室溫下孵育60分鐘或4℃
過夜,，建議參見每種抗體的說明書,。
5. PBS沖洗3x5`。除去PBS液,，每張切片加1滴或50μl酶二抗聚合物(試劑B),，室溫下孵
育40分鐘或37度孵育30分鐘或4度過夜。PBS沖洗3x3`,。
6. 除去PBS液,，每張切片加1滴或50μl新鮮配制的DAB或AEC溶液（詳見DAB或AEC使用
說明書）,，顯微鏡下觀察3-5分鐘（DAB）或10分鐘（AEC）。
7. 自來水沖洗,，蘇木素復(fù)染,，若有必要，可用0.1%HCl分化,，自來水沖洗,，PBS返藍(lán)。
8. 如果用DAB顯色,，則切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥,，(二甲苯透明)，中性樹膠封固,；如果
用AEC顯色,，則切片不能酒精脫水，而直接用水性封片劑,。封片,。
灝洋生物 15:15:15
名稱 ：connexin 43
產(chǎn)品編號 ：CM7269
價格/規(guī)格：0.1ml/20ug
技術(shù)指標(biāo) ：小鼠抗人，大鼠,，小鼠 單克隆抗體 Ig分類：IgG2a
適用組織 ：冰凍/石蠟
陽性部位：細(xì)胞漿
組織處理：0.1mol枸櫞酸緩沖夜-熱修復(fù)15分鐘（95度）
產(chǎn)品說明 ：
產(chǎn)地: Cellscience
二步法（無生物素PV6000系列）,，
實驗步驟使用說明：
試劑盒組成
試劑A: 3% H2O2
試劑B: Polymerized HRP-Anti Mouse或Rabbit IgG 3.0ml/6.0ml/18ml（根據(jù)一抗宿主而定）
PV6001（兔）適用于兔來源的一抗
PV6002（小鼠）適用于小鼠來源的一抗
PV6000 (通用型) 適用于兔，小鼠,，大鼠來源的一抗
3.0ml- 價格 ￥300.00 / 6.0ml- 價格 ￥580.00 / 18ml- 價格 ￥1780.00
試劑盒規(guī)格及貯存條件
規(guī)格：3ml（50片）/6ml(120 片)/18ml(360 片)
貯存條件：本試劑盒宜4℃保存,，穩(wěn)定期1 年
免疫組化染色步驟
1. 石蠟切片脫蠟和水化后，用PBS(pH7.4)沖洗三次,，每次3分鐘（3x3`）,。
2. 根據(jù)每一種抗體的要求，對組織抗原進(jìn)行相應(yīng)的修復(fù),。
3. 如果有必要,，每張切片加1滴（試劑A）室溫下孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性,。
PBS沖洗3x3`,。
4. 除去PBS液，每張切片加1滴或50μl的第一抗體(用戶自選),，室溫下孵育60分鐘或4℃
過夜,，建議參見每種抗體的說明書。
5. PBS沖洗3x5`,。除去PBS液,，每張切片加1滴或50μl酶二抗聚合物(試劑B)，室溫下孵
育40分鐘或37度孵育30分鐘或4度過夜。PBS沖洗3x3`,。
6. 除去PBS液,，每張切片加1滴或50μl新鮮配制的DAB或AEC溶液（詳見DAB或AEC使用
說明書），顯微鏡下觀察3-5分鐘（DAB）或10分鐘（AEC）,。
7. 自來水沖洗,，蘇木素復(fù)染，若有必要,，可用0.1%HCl分化,，自來水沖洗，PBS返藍(lán),。
8. 如果用DAB顯色,，則切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥，(二甲苯透明),，中性樹膠封固；如果
用AEC顯色,，則切片不能酒精脫水,，而直接用水性封片劑。封片,。
