開展凝血檢測對臨床疾病的診斷具有重要意義,,除了對出血疾病的篩選與診斷外,還用于血檢前狀態(tài)的檢查,,所以保證實驗結(jié)果準確性至關(guān)重要,現(xiàn)介紹如下,。
1 標本的采集
(1)采集血標本前,要讓病人處于空腹和平靜狀態(tài),,情緒激動,、劇烈運動和神經(jīng)緊張會引起血小板數(shù)增多,血小 板,、凝血和纖溶活性的增強,。(2)采血時,止血帶不應(yīng)扎得太緊或時間太長,,因長時間結(jié)扎會使因子Ⅷ和組織纖溶酶源激活劑(t-PA)釋放和活化。(3)要用一次性塑料注射器和塑料試管,,以減少血小板和凝血因子的活化,,進針要順利,第一支注射器采血2ml應(yīng)棄去再換另一支注射器取實驗用血,,這樣可以避免混入組織液,,血液與抗凝集要充分混勻;否則影響凝血檢測的準確性,。
2 標本的儲存和運輸
(1)標本采集后打入塑料或硅化的試管內(nèi),,并且立刻塞緊蓋子,否則會有CO2揮發(fā),,pH增高,,影響APTT,、PT延長。(2)要及早分離血漿,,最好在2h內(nèi)分離出來,,對于當前不能做的標本,可將血漿分離分裝在帶塞子的塑料管內(nèi),,冷凍在-20℃的冰箱內(nèi),,對需要存較長時間的標本冰凍存于-80℃的冰箱內(nèi),冰凍的血漿融化時不能靜置于室溫中逐漸融化,,這樣會有纖維蛋白遇冷沉淀蛋白析出,,應(yīng)放置37℃水浴中輕輕搖動,使其迅速溶化,。(3)標本需要在室溫下運送,,必須室溫運送,因低溫會損傷血小板,,活化因子Ⅶ和因子Ⅺ,,使PT、APTT結(jié)果縮短,。必需低溫的標本要在4℃以下運送,以防止因子Ⅴ和因子Ⅱ降解,。
3 試劑的選擇
3.1 抗凝劑 要用抗凝劑為0.109mol/L的檸檬酸鈉,,它能有效地阻止因子Ⅴ和Ⅷ的活化,嚴格按1:9的比例抗凝,,當HCT>55%或<25%時,,應(yīng)按如下公式重新核算抗凝劑的用量,抗凝劑量(ml)=0.00185×全血量(ml)×[100-HCT(%)]:不應(yīng)使用變質(zhì)的枸櫞酸鹽溶液,,否則會使PT,、APTT試驗結(jié)果偏低。
3.2 檢測試劑 按照儀器的性能選用儀器配套的試劑,,進口儀器,,選用進口配套試劑,否則結(jié)果不準確,,復溶的試劑,,最好是現(xiàn)用現(xiàn)配,否則復溶后放置時間越長,,越容易影響結(jié)果的準確性,暫時不用的復溶試劑要及時放回冰箱內(nèi)冷藏,。
4 儀器設(shè)備
儀器狀態(tài)的好壞,,直接影響實驗的結(jié)果,,所以全自動凝血儀要放在避光、透風的室內(nèi),,并且要保證室內(nèi)溫度控制在25℃左右,,開機前要做好準備工作,檢查儀器的各個部件,,看是否有異常,,做好每天的保養(yǎng)和維護,確保儀器的正常運行,。
5 技術(shù)
要嚴格按照操作規(guī)程操作,,熟練掌握實驗原理方法和步驟,做到熟能生巧,,精益求精,。
1 標本的采集
(1)采集血標本前,要讓病人處于空腹和平靜狀態(tài),,情緒激動,、劇烈運動和神經(jīng)緊張會引起血小板數(shù)增多,血小 板,、凝血和纖溶活性的增強,。(2)采血時,止血帶不應(yīng)扎得太緊或時間太長,,因長時間結(jié)扎會使因子Ⅷ和組織纖溶酶源激活劑(t-PA)釋放和活化。(3)要用一次性塑料注射器和塑料試管,,以減少血小板和凝血因子的活化,,進針要順利,第一支注射器采血2ml應(yīng)棄去再換另一支注射器取實驗用血,,這樣可以避免混入組織液,,血液與抗凝集要充分混勻;否則影響凝血檢測的準確性,。
2 標本的儲存和運輸
(1)標本采集后打入塑料或硅化的試管內(nèi),,并且立刻塞緊蓋子,否則會有CO2揮發(fā),,pH增高,,影響APTT,、PT延長。(2)要及早分離血漿,,最好在2h內(nèi)分離出來,,對于當前不能做的標本,可將血漿分離分裝在帶塞子的塑料管內(nèi),,冷凍在-20℃的冰箱內(nèi),,對需要存較長時間的標本冰凍存于-80℃的冰箱內(nèi),冰凍的血漿融化時不能靜置于室溫中逐漸融化,,這樣會有纖維蛋白遇冷沉淀蛋白析出,,應(yīng)放置37℃水浴中輕輕搖動,使其迅速溶化,。(3)標本需要在室溫下運送,,必須室溫運送,因低溫會損傷血小板,,活化因子Ⅶ和因子Ⅺ,,使PT、APTT結(jié)果縮短,。必需低溫的標本要在4℃以下運送,以防止因子Ⅴ和因子Ⅱ降解,。
3 試劑的選擇
3.1 抗凝劑 要用抗凝劑為0.109mol/L的檸檬酸鈉,,它能有效地阻止因子Ⅴ和Ⅷ的活化,嚴格按1:9的比例抗凝,,當HCT>55%或<25%時,,應(yīng)按如下公式重新核算抗凝劑的用量,抗凝劑量(ml)=0.00185×全血量(ml)×[100-HCT(%)]:不應(yīng)使用變質(zhì)的枸櫞酸鹽溶液,,否則會使PT,、APTT試驗結(jié)果偏低。
3.2 檢測試劑 按照儀器的性能選用儀器配套的試劑,,進口儀器,,選用進口配套試劑,否則結(jié)果不準確,,復溶的試劑,,最好是現(xiàn)用現(xiàn)配,否則復溶后放置時間越長,,越容易影響結(jié)果的準確性,暫時不用的復溶試劑要及時放回冰箱內(nèi)冷藏,。
4 儀器設(shè)備
儀器狀態(tài)的好壞,,直接影響實驗的結(jié)果,,所以全自動凝血儀要放在避光、透風的室內(nèi),,并且要保證室內(nèi)溫度控制在25℃左右,,開機前要做好準備工作,檢查儀器的各個部件,,看是否有異常,,做好每天的保養(yǎng)和維護,確保儀器的正常運行,。
5 技術(shù)
要嚴格按照操作規(guī)程操作,,熟練掌握實驗原理方法和步驟,做到熟能生巧,,精益求精,。