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1,、如何計算提取率,？
1) 回收前樣品中，往往含有非目的DNA 片段,、引物,、dNTP 等，所以不能用測回收前后吸光度的的方法計算回收率,；
2) 可將回收前后DNA 片段一起電泳,，使用凝膠成像系統(tǒng)拍照后，用配套的軟件進行電泳條帶灰度對比,；
3) 注意,，電泳條件及拍攝條件將對灰度對比結(jié)果造成很大影響，請仔細操作,，以減小誤差,。
2、如何簡易測算提取率,？
取膠回收后的DNA溶液體積的1/5—1/10,，與等體積的回收前的DNA溶液的5-10倍稀釋液一起電泳，肉眼觀察回收后的條帶相對于回收前條帶的亮度,，粗略測算回收率（如亮度只有一半時,，其回收率可粗略為50%）。
3,、如何看待提取得率,？
影響回收率的因素很多,，如DNA片段大小、點樣量,、凝膠種類,、電泳緩沖液的緩沖能力、切膠操作,、紫外燈照射強度和時間,、溶膠是否徹底等等，所以不能單憑1-2次的實驗來判斷其質(zhì)量好壞,，最好是多做幾次實驗或用幾種不同品牌的產(chǎn)品做平行對照實驗,，結(jié)果相對真實。
4,、回收率為什么與點樣量和片段大小有關,？
DNA片斷越大，和固相基質(zhì)的結(jié)合力越強,，就越難洗脫,，回收率就低；DNA的量越少,，相對損失越大,，回收率越低。
5,、用膠回收試劑盒從凝膠中回收DNA得率低是什么原因,？
1） 膠塊溶解不完全，可適當延長水浴時間和上下顛倒的次數(shù)以及增加溶膠液的比例,；
2） 膠塊體積太大,，應使用槍頭搗碎，還不能充分溶解則先將其切為小塊,，分多次回收,；
3） 紫外燈下切膠時間過長，導致DNA部分降解,，應盡量把切膠時間控制在30s以內(nèi),；
4） 洗滌液使用后未及時蓋嚴瓶蓋，乙醇揮發(fā),，影響回收效率,；
5） TAE或TBE電泳緩沖液不新鮮，失去了緩沖能力,，導致PH值升高,，降低DNA和膜的吸附力，應及時更換電泳緩沖液,，最好使用新鮮配制的電泳緩沖液,，效果更好；
6） 回收前的樣品量太少,，加大點樣量,；
7） 洗脫前，預先65℃預熱洗脫液,、延長室溫靜置時間,、增加洗脫次數(shù)可以有效提高回收率30%以上。
6,、加入溶膠液溫浴后,，液體仍很粘稠或后續(xù)步驟有堵柱子現(xiàn)象？
1） 膠塊溶解不充分,，可再補加一些溶膠液或延長水浴時間并增加上下顛倒次數(shù)幫助溶膠,；
2） 膠塊體積過大，應盡量切除多余部分,，并將其切為小碎塊,，分幾次回收；
3） 水浴溫度是否達到規(guī)定溫度65℃,，用溫度計檢測,。
7、瓊脂糖凝膠塊不溶,？
1） 瓊脂糖質(zhì)量不好,；
2） 含目的片斷的凝膠在空氣中放置過久，使膠塊失水干躁,，建議切膠后立即進行回收或?qū)⒛z塊保存于4 ℃或-20℃,；
3） 制膠的電泳緩沖液濃度過高或陳舊。
8,、點樣時發(fā)現(xiàn)DNA樣品有漂出點樣孔外的現(xiàn)象,？
柱子上的乙醇未完全揮發(fā)干凈，延長室溫下空柱靜置時間以確保乙醇完全揮發(fā)干凈,。
9,、能否使用去離子水洗脫回收？
可以,，但是實驗室所用去離子水一般PH值偏低,，可用NaOH適當調(diào)高PH值＞7.0，以增加回收得率,。
10,、能否使用TE（PH8.0）洗脫？可以,。
11,、可否使用小于30μl的洗脫液進行洗脫,？
不可以。因為說明書提供的最少洗脫體積是能完全覆蓋吸附膜的最小體積,。
12,、關于DNA片段大小與回收率的問題？
100bp-500bp,，30-60%,；500bp-4kb，80-95%,；4kb以上,，30-50%。
13,、OD值與瓊脂糖凝膠中的DNA產(chǎn)量不相符,？
從柱子上洗脫下來的痕量雜質(zhì)增加了A260的值。
14,、吸光度純度測定時應注意哪些問題,？
吸光度測量的是未知樣品與調(diào)零標準之間的相對吸光度，所以請用與洗脫液體相同的液體,，對測量樣品進行稀釋和調(diào)零,。
15、為什么溶膠不徹底會影響回收結(jié)果的純度,？
在電泳過程中,，DNA會與大分子的多糖緊密的結(jié)合在一起，凝膠的種類和質(zhì)量不同,，DNA與之結(jié)合力也不同,，只有凝膠充分溶解DNA才能充分釋放，否則,，凝膠將與DNA一起沉淀下來,，洗脫后將影響回收結(jié)果的純度。
