血細胞分析儀是醫(yī)院臨床檢驗應(yīng)用非常廣泛的儀器之一,隨著科學(xué)技術(shù)日新月異的發(fā)展,,血細胞分析的技術(shù)也從幾年前的三分類轉(zhuǎn)向現(xiàn)在的五分類,,同時現(xiàn)代血細胞分析儀的五分類技術(shù)許多采用了先進的技術(shù),,如鞘流技術(shù)、激光技術(shù)等,。五分類血細胞分析儀器的檢測方法:
1 采用阻抗,、激光散射和熒光染色技術(shù)檢測法
直流電阻抗法(DC)用于測量細胞體積大小。激光散射產(chǎn)生的前向散射光,、側(cè)向散射光和側(cè)向熒光可用于探測白細胞體積大小,、細胞內(nèi)含物的情況(細胞核以及顆粒情況),側(cè)向熒光則可以反映細胞內(nèi)脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的含量,,特有的嗜酸性粒細胞檢測溶血劑Str-matolyzer-EO可將除了嗜酸細胞以外的所有細胞溶解或萎縮,,含有完整嗜酸細胞的液體通過小孔可以按照電阻法計數(shù)技術(shù)進行計數(shù)。在嗜堿細胞通道中,使用特殊溶血劑Strmatolyzer-BA可將除了嗜堿細胞以外的所有細胞溶解或萎縮,,含有完整嗜堿細胞的液體通過小孔可以按照電阻法計數(shù)技術(shù)進行計數(shù),。幼稚細胞檢查通道(IMI)可以根據(jù)幼稚細胞膜比成熟細胞膜表面含有脂質(zhì)較少的現(xiàn)象,在細胞稀釋懸液中加入硫化氨基酸,,由于占位不同,,結(jié)合在幼稚細胞表面的氨基酸較多,對溶血劑有抵抗作用,,當(dāng)加入溶血劑后成熟細胞易被溶解,,而幼稚細胞不易被破壞,可通過電阻法檢測出來,。綜合各個測量方法,,得到白細胞五分類的圖形和數(shù)據(jù)。
2 電阻抗和射頻電導(dǎo)聯(lián)合檢測法
這種方法是分別采用四個檢測系統(tǒng)來檢測不同類型的細胞:(1)淋巴細胞,、單核細胞和中性粒細胞檢測系統(tǒng):在細胞懸浮液中加入溶血劑使紅細胞溶解,,而使白細胞保持完整,細胞漿及核形態(tài)近似于生理狀態(tài),,當(dāng)這些細胞通過檢測系統(tǒng)時,,對白細胞進行電阻抗法(測量細胞體積)和射頻電導(dǎo)法(檢測細胞核和顆粒密度)的聯(lián)合檢測,結(jié)果將細胞分成淋巴細胞,、單核細胞和中性粒細胞三個群體,。(2)嗜酸性細胞和嗜堿性細胞兩種檢測系統(tǒng):在細胞懸浮液中加入特殊的溶血劑,除嗜酸性細胞和嗜堿性細胞外,,其他細胞均被溶解或萎縮,,再對保持完整的嗜酸性細胞或嗜堿性細胞進行計數(shù)。(3)幼稚細胞檢測系統(tǒng):在細胞懸浮液中加入硫化氨基酸,,由于占位不同,,結(jié)合在幼稚細胞的氨基酸比成熟細胞多,且對溶血劑有抵抗作用,,當(dāng)加入溶血劑時,,成熟細胞被溶解,只保留著可能存在的幼稚細胞用來計數(shù),。
3 多角度激光偏振光散射檢測法
采用這種技術(shù)的儀器使用鞘流液將標(biāo)本血稀釋,,稀釋后白細胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài),只有嗜堿性細胞由于其吸濕的特性而使細胞結(jié)構(gòu)有輕微改變,。紅細胞內(nèi)的血紅蛋白在高滲透壓的作用下,,從細胞中分離出來。而鞘流的水份則進入紅細胞內(nèi),,使細胞膜結(jié)構(gòu)仍然完整,,它與鞘流的折光系數(shù)相同,不影響白細胞的檢測。儀器同時從四個角度來檢測通過激光束的細胞所產(chǎn)生的散射光,,0°前角散射光用來測定細胞的體積,,10°狹角散射光用來測定細胞結(jié)構(gòu),90°垂直散射光對細胞內(nèi)部顆粒及細胞質(zhì)進行測量,,90°消偏振光散射將嗜酸性細胞從中性粒細胞和其它細胞中分離出來,。利用上述方法進行五分類的儀器,最終結(jié)果均呈現(xiàn)在高分辨率的白細胞分布圖上,。運用計算機圖像技術(shù),,以各種彩色像素代表一定的細胞濃度,使細胞亞群和異常情況易于識別,,可以從三維空間的不同方位觀察分離的白細胞亞群,。通過某種操作,使三維軸旋轉(zhuǎn),,就可展示不同方位的細胞分布情況。
4 采用圖像分析的單純細胞檢測法
該技術(shù)采用圖像分析法,,將血片染色,,用含有掃描鏡頭的顯微鏡掃描每個視野,將獲取的細胞圖像與儀器內(nèi)存儲的標(biāo)準(zhǔn)圖像進行對照分析,,判斷該細胞的類型,。此類儀器需要大型的計算機系統(tǒng)支持,由于在當(dāng)時電子計算機圖形識別和分析技術(shù)還不很發(fā)達,,因此該類設(shè)備發(fā)展收到一定程度的限制,,分析速度慢,在細胞判斷的準(zhǔn)確性上也不盡人意,,沒有流行起來,。