細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng),失去了機(jī)體的調(diào)節(jié)和控制,。因此,,除滿足營養(yǎng)的要求外,還必須使細(xì)胞生存環(huán)境盡量接近活體的環(huán)境,。外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度,、滲透壓、酸堿度等均能影響細(xì)胞的生長,。
一,、溫度
一般哺乳類及禽類細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃。溫度過高或過低都會影響到細(xì)胞的生長,。細(xì)胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強(qiáng),,在低溫下,細(xì)胞的代謝活力及核分裂降低,。溫度不低于0℃時,,雖影響細(xì)胞代謝,但并無傷害作用,;把細(xì)胞置于25~35℃時,,細(xì)胞仍能生存和生長,但速度減緩,;放在40℃數(shù)小時后,,再置回37℃培養(yǎng)細(xì)胞仍能繼續(xù)生長。但如果在40℃下暴露時間太長,,對細(xì)胞生長不利,,甚至變圓脫落于瓶壁。若溫度過低,在降到冰點以下時,,細(xì)胞因胞外水和胞質(zhì)結(jié)冰而受損死亡,。但若向培養(yǎng)液中加入甘油或二甲亞砜等保護(hù)劑,封入安瓿中后,,置于液氮中,,可起保護(hù)作用,此時細(xì)胞可耐受-70℃以下溫度,,能長期儲存,,解凍后細(xì)胞復(fù)蘇,仍能繼續(xù)生長增殖,,細(xì)胞生物性狀不受任何影響,。此為保存細(xì)胞的主要手段。
高溫對細(xì)胞培養(yǎng)不利,。細(xì)胞在39~40℃培養(yǎng)1小時,,能受到一定損傷,但仍有可能恢復(fù),,但不能忍受溫度再升高2℃,,持續(xù)數(shù)小時,即在41~42℃中培養(yǎng)1小時,,細(xì)胞損傷嚴(yán)重,溫度至43℃以上時細(xì)胞多數(shù)被殺死,。高溫主要引起酶的滅活,、類脂質(zhì)破壞,核分裂的破壞,,產(chǎn)生凝固酶使細(xì)胞發(fā)生凝固,,另外使蛋白質(zhì)變性。因此,,體外培養(yǎng)細(xì)胞時一定要避免高溫,。
二、滲透壓
細(xì)胞在高滲溶液或低滲溶液中,,可以立即發(fā)生皺縮或腫脹,、破裂。所以,,滲透壓是體外培養(yǎng)細(xì)胞的重要條件之一,。哺乳動物和其他動物組織細(xì)胞體外培養(yǎng)的滲透壓的維持主要與NaCl有關(guān),但不能忽視其他電介質(zhì)滲透壓的關(guān)系,。滲透壓與單位體積溶媒內(nèi)溶質(zhì)的分子數(shù)和離子數(shù)成正比。為此,按一定比例控制培養(yǎng)液中離子平衡,,維持正常滲透壓是很重要的,。這不僅是為了維持細(xì)胞張力,而且是為了調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝,。因為細(xì)胞外離子輸送和離子濃度改變著其他營養(yǎng)物質(zhì)的輸送(如氨基酸,、蔗糖等),直接影響細(xì)胞基本合成系統(tǒng),。
理想的滲透壓因細(xì)胞的類型及種族而異,,人血漿滲透壓為290mmol/L,被視為是體外培養(yǎng)人類細(xì)胞的理想滲透壓,。哺乳類動物細(xì)胞的滲透壓一般為290~300mmol/L。人胚肺成纖維細(xì)胞為250~325mmol/L,,鼠則為310mmol/L左右,。在實際應(yīng)用中,260~320mmol/L的滲透壓可適于大多數(shù)細(xì)胞,。
三,、氣體環(huán)境和pH
體外培養(yǎng)細(xì)胞需要理想的氣體環(huán)境,氧和二氧化碳是細(xì)胞生存必須的條件之一,。氧參加細(xì)胞的三羧酸循環(huán),,產(chǎn)生能量以供給細(xì)胞生長、增殖和合成各種所需成分,。有些細(xì)胞在低氧條件下,,可借糖酵解取得能量,但多數(shù)細(xì)胞低氧時不能生存,。氧張力通常維持在略低于大氣狀態(tài),,若氧分壓超過大氣中氧的含量可能對有些細(xì)胞有害,。采用開放式培養(yǎng)時(碟皿或培養(yǎng)瓶松蓋培養(yǎng)或培養(yǎng)板培養(yǎng)),,一般要把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳的混合氣體環(huán)境中。
CO2既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,,又是細(xì)胞生長所必需的成分,,并與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。在密閉瓶中CO2濃度偏低的情況下,,細(xì)胞容易生長,;一般不能低于1%,否則有損細(xì)胞,。CO2增加將使pH下降,。大多數(shù)細(xì)胞適于在pH7.2~ pH 7.4條件下生長,,低于pH6.8或高于pH7.6對細(xì)胞有害,甚至退變或死亡,。各種細(xì)胞對pH的要求不盡相同,。一般原代培養(yǎng)細(xì)胞對pH的變動耐受性差,永生性細(xì)胞系和惡性細(xì)胞對pH的變動耐力強(qiáng),。但總的來說,,細(xì)胞對堿性不如對酸性的變化耐受,偏酸的條件比偏堿的環(huán)境對細(xì)胞生長有利,。細(xì)胞在生長過程中隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動的加強(qiáng),,不斷釋放CO2,使培養(yǎng)基變酸,,pH發(fā)生變化,。所以,為了維持培養(yǎng)環(huán)境恒定的pH,,多采用在培養(yǎng)液中加入磷酸鹽等緩沖劑的方法,。磷酸緩沖劑中的NaHCO3可供給CO2,但CO2易于逸出,,故只適用于封閉式培養(yǎng),。若開放式培養(yǎng)還是置于含有5%CO2的氣體環(huán)境中為宜。為克服NaHCO3調(diào)整的麻煩,,也可用羥乙基哌嗪乙硫磺酸(N-2-hydroxyethyl piperazine-N'-ethanesulfonic acid, Hepes),,它對細(xì)胞無毒性,也不起緩沖作用,,主要作用是防止pH迅速變動,,在開瓶通氣培養(yǎng)或活細(xì)胞觀察時能維持較恒定的pH。
四,、無毒和無菌
無毒和無菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要環(huán)境條件。細(xì)胞在活體內(nèi),,偶爾有細(xì)菌或有害物質(zhì)入侵,,因體內(nèi)有強(qiáng)大的解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng),可將其解毒或清除,,而不易受損害,。但在離體的環(huán)境中,失去了防御系統(tǒng),,一旦有害物質(zhì)入侵或細(xì)菌污染,,可導(dǎo)致細(xì)胞死亡,前功盡棄,。如培養(yǎng)瓶皿,、支持物,、培養(yǎng)基、瓶蓋,、瓶塞上若有細(xì)胞毒性,,在培養(yǎng)過程中可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此,,在選用這些器皿,、材料時要注意,若這些物品消毒不徹底,,帶菌或操作過程不小心使細(xì)胞污染,,也會導(dǎo)致細(xì)胞死亡。若出現(xiàn)交叉污染,,可使實驗室原來的細(xì)胞系失去原有特性,,應(yīng)引起足夠的重視(后面有詳述)。
五,、輻射線和超聲波
(一)可見光
可見光的波長是3900~7800Å,。可見光的各種有色光能引起細(xì)胞退變,,延長核分裂的間期,,還可顯著降低細(xì)胞的附壁能力。因此,,體外培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)避免日光直接照射,,最好在黑暗中進(jìn)行培養(yǎng)或短期存放。
(二)紫外線
弱紫外線下耐受能力強(qiáng)的細(xì)胞變化不大,,但對敏感的細(xì)胞有損害,。紫外線強(qiáng)時,新分離的細(xì)胞顯示:不能進(jìn)行完全的有絲分裂,;在有絲分裂時增加了脫水收縮,;在有絲分裂時細(xì)胞質(zhì)的起泡減少。Elrlich腹水癌細(xì)胞經(jīng)紫外線照射后,,用飛點紫外線顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)被照射表面形成水泡,,隨后細(xì)胞膨脹,損害也漸變嚴(yán)重,。
(三)放射線
X射線對細(xì)胞有明顯損傷,。β射線可影響細(xì)胞核的分裂。γ射線使核分裂數(shù)減少并出現(xiàn)不正常的核分裂,,可使細(xì)胞死亡,。
(四)超聲波和振動
在超聲波振動下,細(xì)胞很快會破裂,,開始是胞質(zhì)發(fā)生紊亂的流動,,原生質(zhì)膠體結(jié)核也有明顯變化,,若停止超聲波振動可回復(fù)。細(xì)胞致死的原因是由于產(chǎn)生空化作用所致,。當(dāng)超聲波在2.5W/cm2時,,細(xì)胞受損,染色體發(fā)生畸變,,首先發(fā)生畸變的是核染色體,。
六、細(xì)胞接種濃度(密度)
在體外培養(yǎng)細(xì)胞中,,細(xì)胞接種數(shù)對細(xì)胞的生長有影響,,適宜的接種密度,可以促使細(xì)胞增殖,,接種密度太低或太高都不利于細(xì)胞的生長增殖,。如果培養(yǎng)液與細(xì)胞的容積比例大于2000:1,生長物質(zhì)彌散到細(xì)胞外的比例將是細(xì)胞內(nèi)達(dá)到低于最小限度的濃度,,此時細(xì)胞不能再增殖,,培養(yǎng)液中的pH變堿,抑制細(xì)胞生長,,細(xì)胞變圓不能貼壁,,甚至引起細(xì)胞死亡等。如果接種密度太高,,每個細(xì)胞周圍培養(yǎng)液的容積降至0.007mm3以下,,由于彌散率的降低,細(xì)胞內(nèi)生物質(zhì)的濃度增加,,容易使排除物或其他代謝產(chǎn)物達(dá)到飽和,,能量來源也很快耗盡,因此也會妨礙細(xì)胞的增殖,。
如何選擇適宜的接種濃度要根據(jù)細(xì)胞的代謝和生長繁殖速度以及工作的需要而確定,。一般來說,細(xì)胞代謝旺盛,、生長速度快的細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞,,接種濃度宜偏低,;而正常組織細(xì)胞生長較慢,,代謝不夠旺盛,接種濃度可偏高,;如果是為了保種或不需急用,,接種濃度可偏低些;有時為了便于觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu),,接種濃度也可適當(dāng)降低,。
七、容器轉(zhuǎn)動速度和懸浮攪動速度
有時為了研究的需要而將培養(yǎng)細(xì)胞在容器中進(jìn)行旋轉(zhuǎn)或攪動,,如貼壁細(xì)胞在旋轉(zhuǎn)管中培養(yǎng),,使轉(zhuǎn)鼓的轉(zhuǎn)速提高,細(xì)胞增殖率隨之提高,。其原因可能是轉(zhuǎn)動使足夠的營養(yǎng)流動和較充分的氧化作用之故,。
當(dāng)懸浮攪拌培養(yǎng)細(xì)胞時,攪拌速度既不能太快,,也不能太慢,。如太慢,細(xì)胞易結(jié)團(tuán),、下沉和貼壁,,不利于細(xì)胞在懸浮狀態(tài)下增殖。如果太快,,容易起泡沫,,細(xì)胞易窒息致死,同時,,強(qiáng)烈地攪動易使細(xì)胞因機(jī)械損傷而破裂,。所以選擇適宜的攪拌速度很重要。如BHK21的攪拌速度適宜為460~330r/min,;淋巴細(xì)胞(Raji)株,在200 r/min 和400 r/min 時細(xì)胞數(shù)不增不減,,或稍有下降,,而攪拌速度增加到600 r/min時出現(xiàn)生長,;類淋巴細(xì)胞(Namalva)生長速度快,在80~100 r/min 時既不結(jié)團(tuán),,又不需加抗泡沫劑,,且細(xì)胞生長仍然很快,。各種細(xì)胞的適宜攪拌速度不一致,,通常與細(xì)胞的特性和質(zhì)量有關(guān),予以注意,。
一,、溫度
一般哺乳類及禽類細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃。溫度過高或過低都會影響到細(xì)胞的生長,。細(xì)胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強(qiáng),,在低溫下,細(xì)胞的代謝活力及核分裂降低,。溫度不低于0℃時,,雖影響細(xì)胞代謝,但并無傷害作用,;把細(xì)胞置于25~35℃時,,細(xì)胞仍能生存和生長,但速度減緩,;放在40℃數(shù)小時后,,再置回37℃培養(yǎng)細(xì)胞仍能繼續(xù)生長。但如果在40℃下暴露時間太長,,對細(xì)胞生長不利,,甚至變圓脫落于瓶壁。若溫度過低,在降到冰點以下時,,細(xì)胞因胞外水和胞質(zhì)結(jié)冰而受損死亡,。但若向培養(yǎng)液中加入甘油或二甲亞砜等保護(hù)劑,封入安瓿中后,,置于液氮中,,可起保護(hù)作用,此時細(xì)胞可耐受-70℃以下溫度,,能長期儲存,,解凍后細(xì)胞復(fù)蘇,仍能繼續(xù)生長增殖,,細(xì)胞生物性狀不受任何影響,。此為保存細(xì)胞的主要手段。
高溫對細(xì)胞培養(yǎng)不利,。細(xì)胞在39~40℃培養(yǎng)1小時,,能受到一定損傷,但仍有可能恢復(fù),,但不能忍受溫度再升高2℃,,持續(xù)數(shù)小時,即在41~42℃中培養(yǎng)1小時,,細(xì)胞損傷嚴(yán)重,溫度至43℃以上時細(xì)胞多數(shù)被殺死,。高溫主要引起酶的滅活,、類脂質(zhì)破壞,核分裂的破壞,,產(chǎn)生凝固酶使細(xì)胞發(fā)生凝固,,另外使蛋白質(zhì)變性。因此,,體外培養(yǎng)細(xì)胞時一定要避免高溫,。
二、滲透壓
細(xì)胞在高滲溶液或低滲溶液中,,可以立即發(fā)生皺縮或腫脹,、破裂。所以,,滲透壓是體外培養(yǎng)細(xì)胞的重要條件之一,。哺乳動物和其他動物組織細(xì)胞體外培養(yǎng)的滲透壓的維持主要與NaCl有關(guān),但不能忽視其他電介質(zhì)滲透壓的關(guān)系,。滲透壓與單位體積溶媒內(nèi)溶質(zhì)的分子數(shù)和離子數(shù)成正比。為此,按一定比例控制培養(yǎng)液中離子平衡,,維持正常滲透壓是很重要的,。這不僅是為了維持細(xì)胞張力,而且是為了調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝,。因為細(xì)胞外離子輸送和離子濃度改變著其他營養(yǎng)物質(zhì)的輸送(如氨基酸,、蔗糖等),直接影響細(xì)胞基本合成系統(tǒng),。
理想的滲透壓因細(xì)胞的類型及種族而異,,人血漿滲透壓為290mmol/L,被視為是體外培養(yǎng)人類細(xì)胞的理想滲透壓,。哺乳類動物細(xì)胞的滲透壓一般為290~300mmol/L。人胚肺成纖維細(xì)胞為250~325mmol/L,,鼠則為310mmol/L左右,。在實際應(yīng)用中,260~320mmol/L的滲透壓可適于大多數(shù)細(xì)胞,。
三,、氣體環(huán)境和pH
體外培養(yǎng)細(xì)胞需要理想的氣體環(huán)境,氧和二氧化碳是細(xì)胞生存必須的條件之一,。氧參加細(xì)胞的三羧酸循環(huán),,產(chǎn)生能量以供給細(xì)胞生長、增殖和合成各種所需成分,。有些細(xì)胞在低氧條件下,,可借糖酵解取得能量,但多數(shù)細(xì)胞低氧時不能生存,。氧張力通常維持在略低于大氣狀態(tài),,若氧分壓超過大氣中氧的含量可能對有些細(xì)胞有害,。采用開放式培養(yǎng)時(碟皿或培養(yǎng)瓶松蓋培養(yǎng)或培養(yǎng)板培養(yǎng)),,一般要把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳的混合氣體環(huán)境中。
CO2既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,,又是細(xì)胞生長所必需的成分,,并與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。在密閉瓶中CO2濃度偏低的情況下,,細(xì)胞容易生長,;一般不能低于1%,否則有損細(xì)胞,。CO2增加將使pH下降,。大多數(shù)細(xì)胞適于在pH7.2~ pH 7.4條件下生長,,低于pH6.8或高于pH7.6對細(xì)胞有害,甚至退變或死亡,。各種細(xì)胞對pH的要求不盡相同,。一般原代培養(yǎng)細(xì)胞對pH的變動耐受性差,永生性細(xì)胞系和惡性細(xì)胞對pH的變動耐力強(qiáng),。但總的來說,,細(xì)胞對堿性不如對酸性的變化耐受,偏酸的條件比偏堿的環(huán)境對細(xì)胞生長有利,。細(xì)胞在生長過程中隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動的加強(qiáng),,不斷釋放CO2,使培養(yǎng)基變酸,,pH發(fā)生變化,。所以,為了維持培養(yǎng)環(huán)境恒定的pH,,多采用在培養(yǎng)液中加入磷酸鹽等緩沖劑的方法,。磷酸緩沖劑中的NaHCO3可供給CO2,但CO2易于逸出,,故只適用于封閉式培養(yǎng),。若開放式培養(yǎng)還是置于含有5%CO2的氣體環(huán)境中為宜。為克服NaHCO3調(diào)整的麻煩,,也可用羥乙基哌嗪乙硫磺酸(N-2-hydroxyethyl piperazine-N'-ethanesulfonic acid, Hepes),,它對細(xì)胞無毒性,也不起緩沖作用,,主要作用是防止pH迅速變動,,在開瓶通氣培養(yǎng)或活細(xì)胞觀察時能維持較恒定的pH。
四,、無毒和無菌
無毒和無菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要環(huán)境條件。細(xì)胞在活體內(nèi),,偶爾有細(xì)菌或有害物質(zhì)入侵,,因體內(nèi)有強(qiáng)大的解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng),可將其解毒或清除,,而不易受損害,。但在離體的環(huán)境中,失去了防御系統(tǒng),,一旦有害物質(zhì)入侵或細(xì)菌污染,,可導(dǎo)致細(xì)胞死亡,前功盡棄,。如培養(yǎng)瓶皿,、支持物,、培養(yǎng)基、瓶蓋,、瓶塞上若有細(xì)胞毒性,,在培養(yǎng)過程中可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此,,在選用這些器皿,、材料時要注意,若這些物品消毒不徹底,,帶菌或操作過程不小心使細(xì)胞污染,,也會導(dǎo)致細(xì)胞死亡。若出現(xiàn)交叉污染,,可使實驗室原來的細(xì)胞系失去原有特性,,應(yīng)引起足夠的重視(后面有詳述)。
五,、輻射線和超聲波
(一)可見光
可見光的波長是3900~7800Å,。可見光的各種有色光能引起細(xì)胞退變,,延長核分裂的間期,,還可顯著降低細(xì)胞的附壁能力。因此,,體外培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)避免日光直接照射,,最好在黑暗中進(jìn)行培養(yǎng)或短期存放。
(二)紫外線
弱紫外線下耐受能力強(qiáng)的細(xì)胞變化不大,,但對敏感的細(xì)胞有損害,。紫外線強(qiáng)時,新分離的細(xì)胞顯示:不能進(jìn)行完全的有絲分裂,;在有絲分裂時增加了脫水收縮,;在有絲分裂時細(xì)胞質(zhì)的起泡減少。Elrlich腹水癌細(xì)胞經(jīng)紫外線照射后,,用飛點紫外線顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)被照射表面形成水泡,,隨后細(xì)胞膨脹,損害也漸變嚴(yán)重,。
(三)放射線
X射線對細(xì)胞有明顯損傷,。β射線可影響細(xì)胞核的分裂。γ射線使核分裂數(shù)減少并出現(xiàn)不正常的核分裂,,可使細(xì)胞死亡,。
(四)超聲波和振動
在超聲波振動下,細(xì)胞很快會破裂,,開始是胞質(zhì)發(fā)生紊亂的流動,,原生質(zhì)膠體結(jié)核也有明顯變化,,若停止超聲波振動可回復(fù)。細(xì)胞致死的原因是由于產(chǎn)生空化作用所致,。當(dāng)超聲波在2.5W/cm2時,,細(xì)胞受損,染色體發(fā)生畸變,,首先發(fā)生畸變的是核染色體,。
六、細(xì)胞接種濃度(密度)
在體外培養(yǎng)細(xì)胞中,,細(xì)胞接種數(shù)對細(xì)胞的生長有影響,,適宜的接種密度,可以促使細(xì)胞增殖,,接種密度太低或太高都不利于細(xì)胞的生長增殖,。如果培養(yǎng)液與細(xì)胞的容積比例大于2000:1,生長物質(zhì)彌散到細(xì)胞外的比例將是細(xì)胞內(nèi)達(dá)到低于最小限度的濃度,,此時細(xì)胞不能再增殖,,培養(yǎng)液中的pH變堿,抑制細(xì)胞生長,,細(xì)胞變圓不能貼壁,,甚至引起細(xì)胞死亡等。如果接種密度太高,,每個細(xì)胞周圍培養(yǎng)液的容積降至0.007mm3以下,,由于彌散率的降低,細(xì)胞內(nèi)生物質(zhì)的濃度增加,,容易使排除物或其他代謝產(chǎn)物達(dá)到飽和,,能量來源也很快耗盡,因此也會妨礙細(xì)胞的增殖,。
如何選擇適宜的接種濃度要根據(jù)細(xì)胞的代謝和生長繁殖速度以及工作的需要而確定,。一般來說,細(xì)胞代謝旺盛,、生長速度快的細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞,,接種濃度宜偏低,;而正常組織細(xì)胞生長較慢,,代謝不夠旺盛,接種濃度可偏高,;如果是為了保種或不需急用,,接種濃度可偏低些;有時為了便于觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu),,接種濃度也可適當(dāng)降低,。
七、容器轉(zhuǎn)動速度和懸浮攪動速度
有時為了研究的需要而將培養(yǎng)細(xì)胞在容器中進(jìn)行旋轉(zhuǎn)或攪動,,如貼壁細(xì)胞在旋轉(zhuǎn)管中培養(yǎng),,使轉(zhuǎn)鼓的轉(zhuǎn)速提高,細(xì)胞增殖率隨之提高,。其原因可能是轉(zhuǎn)動使足夠的營養(yǎng)流動和較充分的氧化作用之故,。
當(dāng)懸浮攪拌培養(yǎng)細(xì)胞時,攪拌速度既不能太快,,也不能太慢,。如太慢,細(xì)胞易結(jié)團(tuán),、下沉和貼壁,,不利于細(xì)胞在懸浮狀態(tài)下增殖。如果太快,,容易起泡沫,,細(xì)胞易窒息致死,同時,,強(qiáng)烈地攪動易使細(xì)胞因機(jī)械損傷而破裂,。所以選擇適宜的攪拌速度很重要。如BHK21的攪拌速度適宜為460~330r/min,;淋巴細(xì)胞(Raji)株,在200 r/min 和400 r/min 時細(xì)胞數(shù)不增不減,,或稍有下降,,而攪拌速度增加到600 r/min時出現(xiàn)生長,;類淋巴細(xì)胞(Namalva)生長速度快,在80~100 r/min 時既不結(jié)團(tuán),,又不需加抗泡沫劑,,且細(xì)胞生長仍然很快,。各種細(xì)胞的適宜攪拌速度不一致,,通常與細(xì)胞的特性和質(zhì)量有關(guān),予以注意,。