1,、來源:293細(xì)胞是轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細(xì)胞系,,293T細(xì)胞由293細(xì)胞派生,同時表達(dá)SV40大T抗原,,含有SV40復(fù)制起始點(diǎn)與啟動子區(qū)的質(zhì)??梢詮?fù)制。用Ca3(PO4)2轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)50%,。蛋白表達(dá)水平高,,轉(zhuǎn)染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較 容易地檢測到表達(dá)的蛋白。瞬時轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞是過表達(dá)蛋白并獲得細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式,。
2,、形態(tài)為上皮細(xì)胞,貼壁細(xì)胞,,能致瘤,。
3,、染色體核型:亞三倍體人細(xì)胞系,。染色體眾數(shù)為64,30%的細(xì)胞有64 條染色體,。4.2%的細(xì)胞染色體數(shù)目更多,。多數(shù)細(xì)胞der(1)t(1;15) (q42;q13), der(19)t(3;19) (q12;q13), der(12)t(8;12) (q22;p13),還有四條標(biāo)記染色體,有的細(xì)胞另有5條標(biāo)記染色體,。der(1)與M8 (or Xq+)常常成對出現(xiàn),。N17 與 N22各有四條。值得注意的是多數(shù)細(xì)胞有三條X染色體,,兩條Xq+,,一條Xp+。
4,、293細(xì)胞系是原代人胚腎細(xì)胞轉(zhuǎn)染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化細(xì)胞,。表達(dá)轉(zhuǎn)染的腺病毒5的基因。早期報道認(rèn)為此細(xì)胞含有Ad 5基因組左端和右端[RF32764],,現(xiàn)已清楚僅含有左端序列,,此細(xì)胞系人腺病毒滴度高。室溫不貼壁,,37℃幾日后重新貼壁,。表達(dá)由整合素beta-1 亞基與玻基結(jié)合素受體 alpha-v 亞基組成的?;Y(jié)合素細(xì)胞表面受體,。
5、293:棄培養(yǎng)基,,含0.25% 胰酶, 0.03% EDTA 消化液洗滌,,棄去,,加1-2ml消化液室溫或37℃消化。加入新鮮培養(yǎng)基,,吸出,,分到新培養(yǎng)皿中。一傳二至一傳四,。
293T:生長快,,通常倍增時間不到一 天 。每3~4 天1:10至1:20稀釋,,5% CO2條件下培養(yǎng),。細(xì)胞貼壁疏松,可只用EDTA消化,,不要用胰蛋白酶過度消化,。
每兩到三天換 液一次。
6,、凍存液:95%培養(yǎng)基,;5%,DMSO;
7,、培養(yǎng)條件:ATCC培養(yǎng)基:90%的MEM Eagle,,加入2mM L-谷氨酰胺,1.5g/L碳酸氫鈉,,0.1 mM必需氨基酸,,1.0 mM 丙酮酸鈉;10%加熱滅活的馬血清37℃培養(yǎng),。