1,、來源:293細胞是轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細胞系,,293T細胞由293細胞派生,同時表達SV40大T抗原,,含有SV40復(fù)制起始點與啟動子區(qū)的質(zhì)??梢詮?fù)制。用Ca3(PO4)2轉(zhuǎn)染效率可高達50%,。蛋白表達水平高,,轉(zhuǎn)染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較 容易地檢測到表達的蛋白。瞬時轉(zhuǎn)染293T細胞是過表達蛋白并獲得細胞內(nèi)及細胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式,。
2,、形態(tài)為上皮細胞,貼壁細胞,,能致瘤,。
3,、染色體核型:亞三倍體人細胞系。染色體眾數(shù)為64,,30%的細胞有64 條染色體,。4.2%的細胞染色體數(shù)目更多。多數(shù)細胞der(1)t(1;15) (q42;q13), der(19)t(3;19) (q12;q13), der(12)t(8;12) (q22;p13),還有四條標記染色體,,有的細胞另有5條標記染色體,。der(1)與M8 (or Xq+)常常成對出現(xiàn)。N17 與 N22各有四條,。值得注意的是多數(shù)細胞有三條X染色體,,兩條Xq+,一條Xp+,。
4,、293細胞系是原代人胚腎細胞轉(zhuǎn)染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化細胞。表達轉(zhuǎn)染的腺病毒5的基因,。早期報道認為此細胞含有Ad 5基因組左端和右端[RF32764],,現(xiàn)已清楚僅含有左端序列,此細胞系人腺病毒滴度高,。室溫不貼壁,,37℃幾日后重新貼壁。表達由整合素beta-1 亞基與?;Y(jié)合素受體 alpha-v 亞基組成的?;Y(jié)合素細胞表面受體。
5,、293:棄培養(yǎng)基,,含0.25% 胰酶, 0.03% EDTA 消化液洗滌,棄去,,加1-2ml消化液室溫或37℃消化,。加入新鮮培養(yǎng)基,吸出,,分到新培養(yǎng)皿中,。一傳二至一傳四。
293T:生長快,,通常倍增時間不到一 天 ,。每3~4 天1:10至1:20稀釋,5% CO2條件下培養(yǎng),。細胞貼壁疏松,,可只用EDTA消化,不要用胰蛋白酶過度消化,。
每兩到三天換 液一次,。
6,、凍存液:95%培養(yǎng)基;5%,DMSO,;
7,、培養(yǎng)條件:ATCC培養(yǎng)基:90%的MEM Eagle,加入2mM L-谷氨酰胺,,1.5g/L碳酸氫鈉,,0.1 mM必需氨基酸,1.0 mM 丙酮酸鈉,;10%加熱滅活的馬血清37℃培養(yǎng),。