大腸桿菌表達(dá)外源蛋白
1）會(huì)產(chǎn)生氣泡是因?yàn)槟愕奶筋^位置沒放好,。探頭一定要接近底部,，約1cm（我一般是距底部0.5mm）,。功率根據(jù)儀器不同會(huì)有所不同，但你可以觀察液面,，有波動(dòng)但不要太劇烈就好,。
2）破3S停10S，破二十至三十才查看一下效果,。
3）變幅桿位置擺放也要注意,，聽聲音如果不對(duì)的話就要及時(shí)調(diào)整。另外可以從菌濃度方面考慮,。 在破碎時(shí)試著加大體積,強(qiáng)度最好不要超過60%.
4）嘗試超8s停8s,，對(duì)有些菌體蛋白來說，你的方法很難散熱,，導(dǎo)致蛋白變性產(chǎn)生氣泡,，最好停頓時(shí)間稍長(zhǎng)一些，這種情況多見于包涵體形式的蛋白,。
鏈霉菌（放線菌）超聲破碎,，用的方法條件是什么？
前處理一般就是配置成一定濃度的菌懸液,。
使用超聲破碎時(shí)采用的具體條件是：
(1)取細(xì)菌的24 h培養(yǎng)液于5 000 r／min 下離心5 min收集菌體．
(2)用pH 7．5的Na2HPO -NaH2PO 緩沖液洗滌3次,，再用該緩沖液將菌體配成1：3的菌懸液．置于40mL大塑料試管內(nèi)．
(3)將大塑料試管置于冰浴中，采用超聲波破碎(功率200 W,，1／2”探頭,，破碎30 s，間歇30 S)．
(4)破碎液于12 000 r／min下高速冷凍離心30 min,，收集細(xì)胞碎片和上清夜．
超聲破菌流程與上述基本一致,，就是洗滌菌體也可以用預(yù)冷的生理鹽水或pH8的Tris－HCl,，洗滌一次就可以。另外,，超聲劑量隨樣品量,、菌體改變比較大，功率可以到400－600w,，超5s,，停5s，冰浴,，要加終濃度1 mM的PMSF,。為確定合適的超聲強(qiáng)度和次數(shù)，有必要隨時(shí)鏡檢觀察菌體是否完全破碎,。
放線菌屬于原核生物系統(tǒng)進(jìn)化樹上的（G＋C）摩爾百分含量（mol％）高的革蘭氏陽性菌（Eubacteria）分枝類群,，它雖然具有原核生物特有的分子生物學(xué)特性，但在其不同類群中,，細(xì)胞壁的化學(xué)組分變化很大.
