血細(xì)胞分析儀是醫(yī)院臨床檢驗(yàn)應(yīng)用非常廣泛的儀器之一,,隨著科學(xué)技術(shù)日新月異的發(fā)展,,血細(xì)胞分析的技術(shù)也從幾年前的三分類轉(zhuǎn)向現(xiàn)在的五分類,,同時(shí)現(xiàn)代血細(xì)胞分析儀的五分類技術(shù)許多采用了先進(jìn)的技術(shù),,如鞘流技術(shù),、激光技術(shù)等,。五分類血細(xì)胞分析儀器的檢測方法:
1 采用阻抗、激光散射和熒光染色技術(shù)檢測法
直流電阻抗法(DC)用于測量細(xì)胞體積大小,。激光散射產(chǎn)生的前向散射光,、側(cè)向散射光和側(cè)向熒光可用于探測白細(xì)胞體積大小、細(xì)胞內(nèi)含物的情況(細(xì)胞核以及顆粒情況),,側(cè)向熒光則可以反映細(xì)胞內(nèi)脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的含量,,特有的嗜酸性粒細(xì)胞檢測溶血?jiǎng)㏒tr-matolyzer-EO可將除了嗜酸細(xì)胞以外的所有細(xì)胞溶解或萎縮,含有完整嗜酸細(xì)胞的液體通過小孔可以按照電阻法計(jì)數(shù)技術(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù),。在嗜堿細(xì)胞通道中,,使用特殊溶血?jiǎng)㏒trmatolyzer-BA可將除了嗜堿細(xì)胞以外的所有細(xì)胞溶解或萎縮,含有完整嗜堿細(xì)胞的液體通過小孔可以按照電阻法計(jì)數(shù)技術(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù),。幼稚細(xì)胞檢查通道(IMI)可以根據(jù)幼稚細(xì)胞膜比成熟細(xì)胞膜表面含有脂質(zhì)較少的現(xiàn)象,,在細(xì)胞稀釋懸液中加入硫化氨基酸,由于占位不同,,結(jié)合在幼稚細(xì)胞表面的氨基酸較多,,對溶血?jiǎng)┯械挚棺饔茫?dāng)加入溶血?jiǎng)┖蟪墒旒?xì)胞易被溶解,,而幼稚細(xì)胞不易被破壞,,可通過電阻法檢測出來。綜合各個(gè)測量方法,,得到白細(xì)胞五分類的圖形和數(shù)據(jù),。
2 電阻抗和射頻電導(dǎo)聯(lián)合檢測法
這種方法是分別采用四個(gè)檢測系統(tǒng)來檢測不同類型的細(xì)胞:(1)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞檢測系統(tǒng):在細(xì)胞懸浮液中加入溶血?jiǎng)┦辜t細(xì)胞溶解,,而使白細(xì)胞保持完整,,細(xì)胞漿及核形態(tài)近似于生理狀態(tài),當(dāng)這些細(xì)胞通過檢測系統(tǒng)時(shí),,對白細(xì)胞進(jìn)行電阻抗法(測量細(xì)胞體積)和射頻電導(dǎo)法(檢測細(xì)胞核和顆粒密度)的聯(lián)合檢測,,結(jié)果將細(xì)胞分成淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞三個(gè)群體,。(2)嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞兩種檢測系統(tǒng):在細(xì)胞懸浮液中加入特殊的溶血?jiǎng)?,除嗜酸性?xì)胞和嗜堿性細(xì)胞外,其他細(xì)胞均被溶解或萎縮,,再對保持完整的嗜酸性細(xì)胞或嗜堿性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),。(3)幼稚細(xì)胞檢測系統(tǒng):在細(xì)胞懸浮液中加入硫化氨基酸,由于占位不同,,結(jié)合在幼稚細(xì)胞的氨基酸比成熟細(xì)胞多,,且對溶血?jiǎng)┯械挚棺饔茫?dāng)加入溶血?jiǎng)r(shí),,成熟細(xì)胞被溶解,,只保留著可能存在的幼稚細(xì)胞用來計(jì)數(shù),。
3 多角度激光偏振光散射檢測法
采用這種技術(shù)的儀器使用鞘流液將標(biāo)本血稀釋,稀釋后白細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài),,只有嗜堿性細(xì)胞由于其吸濕的特性而使細(xì)胞結(jié)構(gòu)有輕微改變,。紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白在高滲透壓的作用下,從細(xì)胞中分離出來,。而鞘流的水份則進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi),,使細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)仍然完整,它與鞘流的折光系數(shù)相同,,不影響白細(xì)胞的檢測,。儀器同時(shí)從四個(gè)角度來檢測通過激光束的細(xì)胞所產(chǎn)生的散射光,0°前角散射光用來測定細(xì)胞的體積,,10°狹角散射光用來測定細(xì)胞結(jié)構(gòu),,90°垂直散射光對細(xì)胞內(nèi)部顆粒及細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行測量,90°消偏振光散射將嗜酸性細(xì)胞從中性粒細(xì)胞和其它細(xì)胞中分離出來,。利用上述方法進(jìn)行五分類的儀器,,最終結(jié)果均呈現(xiàn)在高分辨率的白細(xì)胞分布圖上。運(yùn)用計(jì)算機(jī)圖像技術(shù),,以各種彩色像素代表一定的細(xì)胞濃度,,使細(xì)胞亞群和異常情況易于識(shí)別,可以從三維空間的不同方位觀察分離的白細(xì)胞亞群,。通過某種操作,,使三維軸旋轉(zhuǎn),就可展示不同方位的細(xì)胞分布情況,。
4 采用圖像分析的單純細(xì)胞檢測法
該技術(shù)采用圖像分析法,,將血片染色,用含有掃描鏡頭的顯微鏡掃描每個(gè)視野,,將獲取的細(xì)胞圖像與儀器內(nèi)存儲(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)圖像進(jìn)行對照分析,,判斷該細(xì)胞的類型。此類儀器需要大型的計(jì)算機(jī)系統(tǒng)支持,,由于在當(dāng)時(shí)電子計(jì)算機(jī)圖形識(shí)別和分析技術(shù)還不很發(fā)達(dá),,因此該類設(shè)備發(fā)展收到一定程度的限制,分析速度慢,,在細(xì)胞判斷的準(zhǔn)確性上也不盡人意,,沒有流行起來。