六六六(HCH)是一種廣譜性有機(jī)氯殺蟲(chóng)劑,,我國(guó)20世紀(jì)六,、七十年代曾大量施用,。由于六六六是一種“持久性有機(jī)污染物”(POPs,,是Persist Organic Pollutants的簡(jiǎn)寫(xiě)),,中文翻譯是鑒于持久性有機(jī)污染物(POPs)已對(duì)人類(lèi)健康和環(huán)境構(gòu)成日趨嚴(yán)重的威脅。2001年5月22-23日,,聯(lián)合國(guó)環(huán)境署在斯德哥爾摩組織召開(kāi)了《關(guān)于持久性有機(jī)污染物的斯德哥爾摩公約》的外交全權(quán)代表會(huì)議,,并通過(guò)了《斯德哥爾摩公約》。中國(guó)政府于2001年5月22-23日簽署,?!端沟赂鐮柲s》旨在減少或消除持久性有機(jī)物的排放,保護(hù)人類(lèi)健康和生態(tài)環(huán)境免受其危害,。
將克隆得到的脫鹵素酶基因和綠色熒光蛋基因在有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑降解菌中實(shí)現(xiàn)了功能性表達(dá),,構(gòu)建了一株能快速降解六六六及同時(shí)礦化有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的基因工程菌,通過(guò)檢測(cè)綠色熒光蛋可以實(shí)現(xiàn)對(duì)該工程菌的在線監(jiān)測(cè)。本研究首先構(gòu)建了含有脫鹵素酶基因(linA 和 linB )和綠色熒光蛋白基因(egfp)的廣宿主表達(dá)載體,,3個(gè)基因分別由不同的組成型啟動(dòng)子調(diào)控其表達(dá),,將該重組載體轉(zhuǎn)化至本實(shí)驗(yàn)室已分離到的野生型有機(jī)磷農(nóng)藥降解菌Stenotrophomonas sp.YC-1中,篩選培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因工程菌,,通過(guò)測(cè)定重組菌中LinA,、LinB酶活性和GFP熒光活性證實(shí)了上述3個(gè)基因在重組菌中的功能性表達(dá)。同時(shí),,研究證明YC-1在轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒前后它的生長(zhǎng)特性及降解能力均沒(méi)有發(fā)生變化,。通過(guò)氣相色譜測(cè)定了該重組菌在無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中和實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的土壤中對(duì)10ppmγ-六六六和100ppm甲基對(duì)硫磷的共降解作用,結(jié)果表明:該菌對(duì)γ-六六六和甲基對(duì)硫磷均具有快速的降解能力,。本研究為該基因工程菌應(yīng)用于消除土壤和農(nóng)作物中六六六及有機(jī)磷農(nóng)藥殘留奠定了基礎(chǔ),。同時(shí),由于脫鹵素酶LinB的底物廣譜性,,該工程菌還具有降解環(huán)境中多種鹵代化合物及其它污染物的潛力。