六六六(HCH)是一種廣譜性有機氯殺蟲劑,,我國20世紀六,、七十年代曾大量施用。由于六六六是一種“持久性有機污染物”(POPs,,是Persist Organic Pollutants的簡寫),,中文翻譯是鑒于持久性有機污染物(POPs)已對人類健康和環(huán)境構(gòu)成日趨嚴重的威脅,。2001年5月22-23日,聯(lián)合國環(huán)境署在斯德哥爾摩組織召開了《關(guān)于持久性有機污染物的斯德哥爾摩公約》的外交全權(quán)代表會議,,并通過了《斯德哥爾摩公約》,。中國政府于2001年5月22-23日簽署?!端沟赂鐮柲s》旨在減少或消除持久性有機物的排放,,保護人類健康和生態(tài)環(huán)境免受其危害。
將克隆得到的脫鹵素酶基因和綠色熒光蛋基因在有機磷殺蟲劑降解菌中實現(xiàn)了功能性表達,,構(gòu)建了一株能快速降解六六六及同時礦化有機磷農(nóng)藥殘留的基因工程菌,,通過檢測綠色熒光蛋可以實現(xiàn)對該工程菌的在線監(jiān)測。本研究首先構(gòu)建了含有脫鹵素酶基因(linA 和 linB )和綠色熒光蛋白基因(egfp)的廣宿主表達載體,,3個基因分別由不同的組成型啟動子調(diào)控其表達,,將該重組載體轉(zhuǎn)化至本實驗室已分離到的野生型有機磷農(nóng)藥降解菌Stenotrophomonas sp.YC-1中,篩選培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因工程菌,,通過測定重組菌中LinA,、LinB酶活性和GFP熒光活性證實了上述3個基因在重組菌中的功能性表達。同時,,研究證明YC-1在轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒前后它的生長特性及降解能力均沒有發(fā)生變化,。通過氣相色譜測定了該重組菌在無機鹽培養(yǎng)基中和實驗室規(guī)模的土壤中對10ppmγ-六六六和100ppm甲基對硫磷的共降解作用,結(jié)果表明:該菌對γ-六六六和甲基對硫磷均具有快速的降解能力,。本研究為該基因工程菌應(yīng)用于消除土壤和農(nóng)作物中六六六及有機磷農(nóng)藥殘留奠定了基礎(chǔ),。同時,由于脫鹵素酶LinB的底物廣譜性,,該工程菌還具有降解環(huán)境中多種鹵代化合物及其它污染物的潛力,。