六六六(HCH)是一種廣譜性有機(jī)氯殺蟲劑,,我國20世紀(jì)六,、七十年代曾大量施用,。由于六六六是一種“持久性有機(jī)污染物”(POPs,,是Persist Organic Pollutants的簡寫),,中文翻譯是鑒于持久性有機(jī)污染物(POPs)已對人類健康和環(huán)境構(gòu)成日趨嚴(yán)重的威脅,。2001年5月22-23日,聯(lián)合國環(huán)境署在斯德哥爾摩組織召開了《關(guān)于持久性有機(jī)污染物的斯德哥爾摩公約》的外交全權(quán)代表會(huì)議,,并通過了《斯德哥爾摩公約》,。中國政府于2001年5月22-23日簽署。《斯德哥爾摩公約》旨在減少或消除持久性有機(jī)物的排放,,保護(hù)人類健康和生態(tài)環(huán)境免受其危害,。
將克隆得到的脫鹵素酶基因和綠色熒光蛋基因在有機(jī)磷殺蟲劑降解菌中實(shí)現(xiàn)了功能性表達(dá),構(gòu)建了一株能快速降解六六六及同時(shí)礦化有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的基因工程菌,,通過檢測綠色熒光蛋可以實(shí)現(xiàn)對該工程菌的在線監(jiān)測,。本研究首先構(gòu)建了含有脫鹵素酶基因(linA 和 linB )和綠色熒光蛋白基因(egfp)的廣宿主表達(dá)載體,3個(gè)基因分別由不同的組成型啟動(dòng)子調(diào)控其表達(dá),,將該重組載體轉(zhuǎn)化至本實(shí)驗(yàn)室已分離到的野生型有機(jī)磷農(nóng)藥降解菌Stenotrophomonas sp.YC-1中,,篩選培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因工程菌,通過測定重組菌中LinA,、LinB酶活性和GFP熒光活性證實(shí)了上述3個(gè)基因在重組菌中的功能性表達(dá),。同時(shí),研究證明YC-1在轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒前后它的生長特性及降解能力均沒有發(fā)生變化,。通過氣相色譜測定了該重組菌在無機(jī)鹽培養(yǎng)基中和實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的土壤中對10ppmγ-六六六和100ppm甲基對硫磷的共降解作用,,結(jié)果表明:該菌對γ-六六六和甲基對硫磷均具有快速的降解能力。本研究為該基因工程菌應(yīng)用于消除土壤和農(nóng)作物中六六六及有機(jī)磷農(nóng)藥殘留奠定了基礎(chǔ),。同時(shí),,由于脫鹵素酶LinB的底物廣譜性,該工程菌還具有降解環(huán)境中多種鹵代化合物及其它污染物的潛力,。