中藥活性成分結(jié)構(gòu)復(fù)雜,、類型多樣,、含量低,、不穩(wěn)定，因此分離純化較為困難,，目前主要依賴于硅膠柱色譜,、大孔吸附樹(shù)脂柱色譜、聚酞胺柱色譜,、凝膠柱色譜,、高效逆流色譜、制備型高效液相色譜等色譜技術(shù),。為了得到純度高的活性成分,，需經(jīng)多種溶劑萃取和反復(fù)柱色譜，不僅溶劑消耗量大,、環(huán)境污染嚴(yán)重,，而且效率和收率也較低。
近年來(lái),，一種以與目標(biāo)分子具有高度識(shí)別的分子印跡聚合物（MIPs）為固定相進(jìn)行的色譜分離技術(shù)——分子印跡技術(shù)（MIT）在中藥活性成分分離純化中的應(yīng)用研究廣泛展開(kāi),，涉及黃酮、多元酚,、生物堿,、甾體、香豆素等多種結(jié)構(gòu)類型的化合物,。這些研究均取得了較好的效果,，為在生產(chǎn)實(shí)踐中推廣該技術(shù)提供了依據(jù)。
■現(xiàn)狀：MIT分離中藥研究逐步展開(kāi)
目前,，有關(guān)MIT在藥學(xué)領(lǐng)域的文獻(xiàn)半數(shù)以上涉及手性物的分離和分析,，而其在中藥活性成分的分離純化中的應(yīng)用雖然還不是很多，但都收到了較好的效果,。
黃酮：目前所報(bào)道的利用MIT分離純化的黃酮類化合物多以槲皮素為模板,、丙烯酞胺為功能單體。例如,，北京大學(xué)化學(xué)與分子工程學(xué)院的謝建春等首先將槲皮素MIPs直接用于銀杏葉提取物水解液的分離,，得到了槲皮素和與其結(jié)構(gòu)相似的山柰酚，其中槲皮素的回收率為89%,，從而證明了利用MIPs直接從中藥中獲得具有相同藥效的化合物的可能性,。Zhu等則以槲皮素為模板制備的MIPs作為固相萃取材料，篩選到了藏藥緣毛錦雞兒中兩個(gè)活性比槲皮素強(qiáng)的表皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑：（E）-piceatannol和butein,，兩者回收率分別為80%和76%,。
此外,，謝建春等還以2,2-羥甲基丁醇三甲基丙烯酯（TRIM）為交聯(lián)劑制備了槲皮素MIPs，將其用于分子印跡固相萃?。∕IP-SPE），從服用了銀杏葉提取物水解液的大鼠血漿中分離并測(cè)定出槲皮素和異鼠李素,，表明該MIP-SPE能有效潔凈水溶性生物樣品,，并直接進(jìn)行定量測(cè)定。
多元酚：茶多酚中的兒茶素類成分結(jié)構(gòu)相似,，尤其是表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）和其對(duì)映體沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（GCG）,，常規(guī)方法難以分離。中南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院的雷啟福等嘗試以EGCG為模板,，以α-甲基丙烯酸為功能單體,，以乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑制備了MIPs，從茶多酚中分離富集EGCG獲得了滿意效果,。該院的向海艷等以白藜蘆醇為模板,，以丙烯酞胺為功能單體，以偶氮二異丁腈為引發(fā)劑制備了MIPs,，并對(duì)虎杖提取液進(jìn)行了分離,，僅經(jīng)過(guò)兩步洗脫（甲醇淋洗后，5%醋酸甲醇溶液洗脫）,，就得到了白藜蘆醇及少量白藜蘆醇苷,，且兩者達(dá)到了良好的分離效果。
生物堿：MIT在生物堿中的應(yīng)用較多,，特別是手性異構(gòu)體的分離與測(cè)定,。例如，Dong等以中藥麻黃中的成分（-）-ehedrine為模板,，以甲基丙烯酸為功能單體,，合成了（-）-ehedrine分子印跡聚合物，該聚合物對(duì)（-）-ehedrine有良好的選擇性和親和力,。將其用于分子印跡固相萃?。∕IP-SPE），直接從麻黃中提取出了（-）-ehedrine,，經(jīng)高效液相分析,，純度較高，回收率和精密度良好,，表明MIP-SPE能直接用于麻黃中（-）-ehedrine的定量測(cè)定,。
華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院的陳移嬌等以咖啡因?yàn)槟０澹捎盟芤簯腋【酆戏ㄖ苽淞宋⒚准?jí)分子印跡聚合物微球（MIPMs）,，當(dāng)以茶葉堿為競(jìng)爭(zhēng)分子時(shí),，該MIPMs對(duì)咖啡因有很強(qiáng)的吸附和特異性選擇識(shí)別能力,，能對(duì)茶葉中的咖啡因進(jìn)行分離富集。Xie等用哈爾滿（harman）為模板制備了MIPs,，并作為液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)的固定相,，分離和在線鑒別了駱駝蓬種籽甲醇提取物中兩個(gè)和哈爾滿結(jié)構(gòu)類似的抗癌組分：哈爾明堿（harmine）和哈馬林（harmaline）。
甾體：甾體類化合物結(jié)構(gòu)相似,，采用常規(guī)方法很難對(duì)某一組分進(jìn)行分離純化和定量測(cè)定,。而甾體分子大多含有羥基取代基，可以利用其和功能單體形成氫鍵或酯鍵,，制備出相應(yīng)的MIPs,，使之得到高效分離。目前,，應(yīng)用MIT選擇性分離,、分析甾體分子已成為關(guān)注的熱點(diǎn)，但多數(shù)涉及人體內(nèi)的一些活性物質(zhì),，如膽固醇,、皮質(zhì)醇等，用于植物中甾體成分的分離純化較少,。
油菜素甾酮被認(rèn)為是一種可以刺激植物生長(zhǎng)的活性物質(zhì),，但常規(guī)提取過(guò)程非常繁瑣。Kuglmiya等利用p-乙烯基苯硼酸和油菜素甾酮中的兩組順式羥基發(fā)生酯化作用,，制備了共價(jià)MIPs,。由于該法所得的MIPs對(duì)模板具有嚴(yán)謹(jǐn)、精確的吸附,，能夠防止同樣具有順式羥基的雌激素三醇等成分的干擾,。：Hu等用MIP-SPE從秦皮中提取得到了秦皮乙素，并通過(guò)選擇洗滌和洗脫溶劑,，設(shè)計(jì)了一個(gè)分離秦皮乙素和其結(jié)構(gòu)類似物秦皮甲素,、香豆素、7-氧基香豆素及瑞香素的方案,。
■挑戰(zhàn)：技術(shù)難題仍需攻克
雖然MIT在中藥分離中的應(yīng)用研究已日益廣泛,，而且與其他色譜分離技術(shù)相比，它具有許多獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn),，包括分子識(shí)別性強(qiáng),、固定相制備簡(jiǎn)便快速、操作簡(jiǎn)單且溶劑消耗量小,、模板和MIPs都可以回收再利用等,。但是，作為一種新型的分離手段,，MIT本身還存在許多有待解決的問(wèn)題,，如分子印跡和識(shí)別過(guò)程的機(jī)制和定量描述,、功能單體和交聯(lián)劑的選擇局限性等。
首先,，MIT應(yīng)用的有些模板往往十分昂貴或難于得到,，且通常每合成1克干聚合物就需要50~100微摩爾/升的模板，模板需要量較大,，回收率也有待進(jìn)一步提高,。
其次，MIT在特殊的分離領(lǐng)域的應(yīng)用還需大力研究,，由于結(jié)合位點(diǎn)的非均勻性和實(shí)際可利用官能團(tuán)的數(shù)量有限，MIPs作為高效液相色譜（HPLC）固定相時(shí)常常出現(xiàn)色譜峰過(guò)寬和拖尾的情況,，從而使柱效降低,，影響了分離效果。因此,，為獲得較大批量的產(chǎn)物,，達(dá)到較大規(guī)模的制備水平，需要進(jìn)一步增加聚合物中的實(shí)際有效結(jié)合位點(diǎn)以增加分離柱容量,。
三是目前制備相對(duì)分子質(zhì)量較高的成分的MIPs有一定困難,，所以現(xiàn)在使用的模板均為小分子的苷元，需要進(jìn)一步開(kāi)發(fā)中藥活性成分的模板,。MIPs的聚合方法多樣,，包括溶液聚合（本體聚合）法、懸浮聚合法,、原位聚合法,、種子聚合法、表面印跡法等,，而在上述文獻(xiàn)中,，多用溶液聚合法。這種方法需研磨過(guò)篩,，費(fèi)時(shí)費(fèi)力,，材料損失也較多。
盡管MIT具有上述種種局限性,，還有待進(jìn)一步深入研究,，但由于其具備很高的選擇性以及優(yōu)良的理化特性，必然會(huì)隨著技術(shù)本身的不斷發(fā)展和應(yīng)用的逐漸增多,，而在中藥活性成分分離純化領(lǐng)域發(fā)揮越來(lái)越大的作用,。
