唐雪明 王正祥 邵蔚藍 劉吉泉 方慧英 諸葛健
江南大學(xué)教育部工業(yè)生物技術(shù)重點實驗室,無錫,214036
摘 要：在5L發(fā)酵罐中對重組堿性蛋白酶工程菌株BP071高產(chǎn)堿性蛋白酶的條件進行了研究, 通過提高通氣量和改變攪拌轉(zhuǎn)速,BP071可在發(fā)酵40 h內(nèi)達到產(chǎn)酶高峰,酶活力最高可達244 80 u/mL.利用快速蛋白液相層析(FPLC)技術(shù),建立了快速高效純化堿性蛋白酶的方案. 發(fā)酵液通過硫酸銨沉淀、DEAE-A-50脫色及聚乙二醇濃縮得粗酶,再經(jīng)過CM-Sephadex-C -50,、Sephadex-G-75柱層析后得到了單一組份的重組堿性蛋白酶,酶純度提高了76.2倍 .SDS-P AGE顯示重組堿性蛋白酶分子量為28 kD.酶學(xué)性質(zhì)研究表明,酶的最適作用pH為11,最適作用溫度為60℃,具有良好的pH穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性.Ca2+,、Mg2+對酶的穩(wěn)定性有促進作用,Hg2+、Ag+,、PMFS和DFP能強烈抑制酶的活力.SDS和Urea對酶的活力無影響.
關(guān)鍵詞：堿性蛋白酶, 基因工程菌BP071, 發(fā)酵條件, 重組酶的純化及 性質(zhì)
分類號：Q814 文獻標(biāo)識碼：A
文章編號：1000-3061(2002)06-0729-06
請看全文（PDF)
