血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接進(jìn)行測(cè)定,。它觀察在一定的容積中的微生物的個(gè)體數(shù)目，然后推算出含菌數(shù),，簡(jiǎn)便快捷,。但是在計(jì)數(shù)時(shí)包括死活細(xì)胞均被計(jì)算在內(nèi)，還有微小雜物也被計(jì)算在內(nèi),。這樣得出結(jié)果往往偏高,，因此適用于對(duì)形態(tài)個(gè)體較大的菌體或孢子進(jìn)行計(jì)數(shù)。

編輯本段

誤差來(lái)源

計(jì)算規(guī)則

血細(xì)胞計(jì)數(shù)的誤差分別來(lái)源于技術(shù)誤差和固有誤差,。其中由于操作人員采血不順利,，器材處理、使用不當(dāng),，稀釋不準(zhǔn)確,，細(xì)胞識(shí)別錯(cuò)誤等因素所造成的誤差屬技術(shù)誤差；而由于儀器（計(jì)數(shù)板,、蓋片,、吸管等）不夠準(zhǔn)確與精密帶來(lái)的誤差稱儀器誤差,，由于細(xì)胞分布不均勻等因素帶來(lái)的細(xì)胞計(jì)數(shù)誤差屬于分布誤差或計(jì)數(shù)域誤差（filederror）。儀器誤差和分布誤差統(tǒng)稱為固有誤差或系統(tǒng)誤差,。技術(shù)誤差和儀器誤差可通過(guò)規(guī)范操作,、提高熟練程度和校正儀器而避免或糾正，但細(xì)胞分布誤差卻難于徹底消除,。因此,，搞好紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的質(zhì)量控制一般需采用以下措施。

1．避免技術(shù)誤差,，糾正儀器誤差

（1）所用器材均應(yīng)清潔干燥,，計(jì)數(shù)板、血蓋片,、微量吸管及刻度吸管的規(guī)格應(yīng)符合要求或經(jīng)過(guò)校正,。①計(jì)數(shù)板的鑒定：要求計(jì)數(shù)室的臺(tái)面光滑、透明,，劃線清晰,，計(jì)數(shù)室劃線面積準(zhǔn)確。必要時(shí)采用嚴(yán)格校正的目鏡測(cè)微計(jì)測(cè)量計(jì)數(shù)室的邊長(zhǎng)與底面積,，用微米千分尺測(cè)量計(jì)數(shù)室的深度,。美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)局（NBS）規(guī)定每個(gè)大方格邊長(zhǎng)的誤差應(yīng)小于1%，即1±0.01mm,，深度誤差應(yīng)小于2%,，即0.1±0.002mm。若超過(guò)上述標(biāo)準(zhǔn),，應(yīng)棄之不用,。②血蓋片應(yīng)具有一定的重量，平整,、光滑,、無(wú)裂痕，厚薄均勻一致,，可使用卡尺多點(diǎn)測(cè)量（至少在9個(gè)點(diǎn)）,，不均勻度在0.002mm之內(nèi)。必要時(shí)采用平面平行儀進(jìn)行測(cè)量與評(píng)價(jià),，要求呈現(xiàn)密集平行的直線干涉條紋,。最簡(jiǎn)單的評(píng)價(jià)方法是將潔凈的蓋片緊貼于干燥的平面玻璃上，若能吸附一定的時(shí)間不脫落,，落下時(shí)呈弧線形旋轉(zhuǎn),，表示蓋片平整、厚薄均勻,。同時(shí),，合格的蓋片放置在計(jì)數(shù)室表面后,，與支持柱緊密接觸的部位可見(jiàn)到彩虹。精選出的蓋片與其他蓋片緊密重合后,，在掠射光線下觀察,，如見(jiàn)到完整平行的彩虹條紋表示另一枚蓋片質(zhì)量也符合要求。③目前臨床實(shí)驗(yàn)室多采用一次性微量采血管采集毛細(xì)血管血,，除注意定點(diǎn)購(gòu)買使用信譽(yù)較好廠家的產(chǎn)品外,，還應(yīng)對(duì)每一批量的采血管進(jìn)行抽樣檢查，可通過(guò)水銀稱重法或有色溶液比色法進(jìn)行校正,，誤差不應(yīng)超過(guò)±1%,。

（2）紅細(xì)胞稀釋液應(yīng)等滲、新鮮,、無(wú)雜質(zhì)微粒,。

（3）嚴(yán)格操作，從消毒,、采血,、稀釋、充池到計(jì)數(shù)都應(yīng)規(guī)范,，尤其應(yīng)注意的是血樣稀釋及充池時(shí)既要作到充分混勻,，又要防止劇烈震蕩為破壞紅細(xì)胞。必須一次性充滿計(jì)數(shù)室,，防止產(chǎn)生氣泡,，充入細(xì)胞懸液的量以不超過(guò)計(jì)數(shù)室臺(tái)面與血蓋片之間的矩形邊緣為宜。

（4）報(bào)告法定計(jì)量單位,。

2．縮小計(jì)數(shù)域誤差及分布誤差

縮小計(jì)數(shù)域誤差或分布誤差由于血細(xì)胞在充入計(jì)數(shù)室后呈隨機(jī)分布或稱Poisson分布（）,，而我們所能計(jì)數(shù)的細(xì)胞分布范圍是有限的，由此造成的計(jì)數(shù)誤差稱為計(jì)數(shù)域誤差或分布誤差,?？s小這種誤差的有效方法就是盡量擴(kuò)大細(xì)胞計(jì)數(shù)范圍和計(jì)數(shù)數(shù)目，一般先進(jìn)行誤差估計(jì),，然后決定所需計(jì)數(shù)的數(shù)目和計(jì)數(shù)范圍,，只要能將誤差控制在允許范圍內(nèi)即可,。Berkson指出,，當(dāng)使用同一支吸管、同一面計(jì)數(shù)室,，計(jì)數(shù)0.2mm2面積的細(xì)胞數(shù),，有望將CV控制在可接受的7%以內(nèi)。對(duì)于紅細(xì)胞計(jì)數(shù)而言,，由于紅細(xì)胞數(shù)量較多,，在計(jì)數(shù)室中顯得比較“擁擠”,，根據(jù)Poisson公式推斷。欲將誤差控制在變異百分?jǐn)?shù)5%以內(nèi),，至少需要在計(jì)數(shù)室中計(jì)數(shù)400個(gè)紅細(xì)胞,，因此要求計(jì)數(shù)五個(gè)中方格的紅細(xì)胞。事實(shí)上Berkson還通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明,，紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)域誤差為s=0.92,，較理論誤差（Poisson分布誤差）要小。

3．降低異常標(biāo)本的干擾誤差

排除異常標(biāo)本的干擾白細(xì)胞數(shù)量在正常范圍時(shí),，相對(duì)于紅細(xì)胞數(shù)量來(lái)講,，其影響可忽略，但如白細(xì)胞過(guò)高（>100×109/L）,，則應(yīng)對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行校正,。方法是：①實(shí)際RBC=計(jì)得RBC-WBC。如當(dāng)紅細(xì)胞換算后為3.5×1012/L,、白細(xì)胞換算后為100×109/L時(shí),，病人實(shí)際紅細(xì)胞數(shù)應(yīng)為3.4×1012/L。②在高倍鏡下計(jì)數(shù)時(shí),，避開(kāi)有核細(xì)胞,。有核細(xì)胞體積比正常紅細(xì)胞大，中央無(wú)凹陷,，無(wú)草黃色折光,，可隱約見(jiàn)到細(xì)胞核。此外,，當(dāng)病人急性嚴(yán)重貧血時(shí)網(wǎng)織紅細(xì)胞可提前大量釋放,，也給紅細(xì)胞計(jì)數(shù)帶來(lái)一定的干擾，而且影響網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值計(jì)算結(jié)果,。其校正方法有待探討,。