消毒和滅菌的基本常識(shí)和方法對(duì)于實(shí)驗(yàn)室生物安全是至關(guān)重要的。因此,，實(shí)驗(yàn)室和醫(yī)學(xué)廢棄物的處理應(yīng)遵守相關(guān)行業(yè)部門,、國(guó)家和國(guó)際的規(guī)定,。根椐衛(wèi)生部《微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》WS233-2002第6.2.2.2條款明確規(guī)定,，實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)和建造應(yīng)設(shè)置高壓滅菌鍋、化學(xué)消毒裝置,，實(shí)驗(yàn)后的一切廢棄物都必須進(jìn)行滅菌,、消毒處理；關(guān)于清除污染的特殊要求,，要根據(jù)實(shí)驗(yàn)工作類型以及所操作的感染性物質(zhì)的特性來(lái)決定,。《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》GB19489-2004的相關(guān)條款均提出設(shè)置高壓滅菌鍋的要求,。如在相關(guān)生物安全實(shí)驗(yàn)室未設(shè)置高壓滅菌鍋或化學(xué)消毒裝置或裝備了其設(shè)備但不符合規(guī)定要求的,，應(yīng)該講是一個(gè)不合格的生物安全實(shí)驗(yàn)室。當(dāng)然,，正確掌握滅菌和消毒技術(shù)亦是實(shí)驗(yàn)室生物安全保證的重要方面之一,。
消毒即通過(guò)物理或化學(xué)手段去除微生物（不一定殺滅其孢子）,；而滅菌殺滅和／或去除所有微生物及其孢子的過(guò)程；化學(xué)消毒滅菌通過(guò)液體化學(xué)試劑殺滅微生物繁殖體或芽孢,。然而,，消毒對(duì)象包括物體表面,、空氣和污染物等,，方式有擦洗消毒、熏蒸和浸泡等,。物理消毒滅菌包括紫外線,、高壓蒸汽滅菌、焚燒和HEPA過(guò)濾除菌等,。
通常加熱是最常用的清除病原污染的物理手段,。“干”熱沒(méi)有腐蝕性，可用來(lái)處理實(shí)驗(yàn)器材中可耐受≥160℃高溫的物品,，所需時(shí)間為2～4 h,。通常它的適用范圍是用于高溫下不損壞、不變質(zhì),、不蒸發(fā)物品的滅菌,；用于蒸汽或氣體不能穿透物品的滅菌，如玻璃,、油脂,、粉劑和金屬等制品的消毒滅菌。但高壓滅菌的濕熱法卻最為有效,。煮沸并不一定能殺死所有的微生物或病原體,，但如果其他方法（化學(xué)殺菌、清除污染,、高壓滅菌）不可行或沒(méi)有條件時(shí),，也可以作為一種最起碼的消毒措施。一旦滅菌后的物品必須小心操作和保存,，以保證在使用之前不再被污染,。
1 選擇原則
對(duì)于選擇消毒和滅菌方法的原則是（1）根據(jù)物品污染后危害程度來(lái)選擇。高度危險(xiǎn)的物品,，必須選用滅菌法滅菌,，其滅菌指數(shù)為106；中度危險(xiǎn)的物品,，可選用中效消毒法或高效消毒法,，要求消毒指數(shù)達(dá)103以上；凡低度危險(xiǎn)物品,，一般可用低效消毒方法或只作一般性清潔處理即可,。（2）根據(jù)污染微生物的種類和數(shù)量選擇消毒,、滅菌方法和使用劑量：1]受到致病性芽孢菌、真菌孢子和抗力強(qiáng),、危險(xiǎn)程度大的病毒污染的物體,，應(yīng)選用高效消毒法和滅菌法。2]受到致病性細(xì)菌和真菌,、親水病毒,、螺旋體、支原體,、衣原體應(yīng)選用中效以上消毒法,。3]受到一般細(xì)菌和親脂病毒污染的物品，可選用中效或低效消毒法,。4]物品上污染特別嚴(yán)重時(shí),，應(yīng)加大處理劑量和延長(zhǎng)消毒時(shí)間
2 消毒、滅菌工作中的自我防護(hù)
消毒因子大多是對(duì)人體有害,，因此,，在進(jìn)行消毒時(shí)一定要具有自我防護(hù)的措施，防止消毒操作中發(fā)生的意外事故,，同時(shí)應(yīng)防止由于操作方法不當(dāng)而對(duì)人引起的傷害,。熱力消毒滅菌：干熱滅菌防止燃燒，壓力蒸氣滅菌應(yīng)防止爆炸等,；紫外線,、微波消毒時(shí)應(yīng)防止對(duì)人的直接照射；氣體化學(xué)消毒,、滅菌劑要防止泄漏,；液體化學(xué)消毒、滅菌劑要防止過(guò)敏和對(duì)皮膚粘膜的傷害,；處理銳利器械時(shí)應(yīng)避免對(duì)人的損傷,。
3 消毒與滅菌方法
壓力蒸汽滅菌器是根據(jù)排放冷空氣的方式和程度不同，分為下排氣式壓力蒸汽滅菌器和預(yù)真空壓力蒸汽滅菌器二大類,。
下排氣式壓力蒸汽滅菌器：高壓滅菌即壓力飽和蒸汽滅菌是對(duì)實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行滅菌的最有效和最可靠的方法,。通過(guò)溫度設(shè)置和滅菌時(shí)間的組合將確保高壓滅菌器的滅菌效果。
134℃,、3 min,、b）126℃、10 min,、c）121℃,、15 min、115℃,、25 min
其滅菌方法為：
1）手提式壓力蒸汽滅菌方法
1] 在主體腔內(nèi)加入適量的清水,，將滅菌物品放入滅菌器內(nèi),；
2] 將頂蓋上的排氣軟管插入內(nèi)壁的方管中，蓋好后必須擰緊頂蓋,；
3] 打開(kāi)滅菌器的熱源,，開(kāi)啟排氣閥排完空氣后（約在水沸騰后10 min～15 min 關(guān)閉排氣閥；
4] 將壓力升至102.9 kPa(1.05 kg/㎡),溫度要求達(dá)121℃,維持到規(guī)定時(shí)間(根據(jù)物品性質(zhì)以及有關(guān)情況確定,一般20 min～30 min);
5] 需要干燥的物品,打開(kāi)排氣閥,慢慢放汽,待壓力恢復(fù)到零位后開(kāi)蓋取物.
2）臥式壓力蒸汽滅菌器滅菌方法
1] 將待滅菌物品放入滅菌柜室內(nèi),，關(guān)閉柜門并扣緊,；
2] 打開(kāi)進(jìn)氣閥，將蒸汽通入夾層預(yù)熱,；
3] 夾層壓力達(dá)102.9 kPa(1.05㎏/㎡)時(shí),調(diào)整控制閥到“滅菌”位置,，蒸汽通入滅菌室內(nèi),，此時(shí)柜內(nèi)冷空氣和冷凝水經(jīng)柜室阻氣器自動(dòng)排出,；
4] 當(dāng)柜內(nèi)壓力達(dá)102.9 kPa(1.05㎏/㎡),需維持20 min～30 min；
5] 需要干燥的物品,，滅菌后調(diào)整控制閥至“干燥”位置,，蒸汽被抽出，柜室內(nèi)呈負(fù)壓,，維持一定時(shí)間物品即達(dá)干燥要求,。
6] 對(duì)液體類物品，應(yīng)待自然冷卻到60℃以下,，再開(kāi)門取物,，不得使用快速排出蒸汽法，以防突然減壓,，液體劇烈沸騰或容器爆炸,。
預(yù)真空式高壓滅菌
其滅菌方法為：
1）預(yù)真空壓力蒸汽滅菌方法：
1] 將待滅菌的物品放入滅菌柜內(nèi)，關(guān)好柜門,，預(yù)真空壓力蒸汽滅菌整個(gè)過(guò)程約需25 min,。
2] 將蒸汽通入夾層，使壓力達(dá)107.8 kPa（1.1㎏/㎡）,，預(yù)熱4 min,；
3] 啟動(dòng)真空泵，抽除柜室內(nèi)空氣使壓力達(dá)2.0 kPa-2.7 kPa（排除柜室內(nèi)空氣98%左右）,；
4] 停止抽氣,，向柜室內(nèi)輸入飽和蒸汽，使柜內(nèi)壓力達(dá)205.8 kPa（2.1㎏/㎡）,，溫度達(dá)134℃,，維持滅菌時(shí)間3 min；
5] 停止輸入蒸氣,，再次抽真空使壓力達(dá)8.0 kPa,，使滅菌物品迅速干燥,；
6] 通入過(guò)濾后的潔凈空氣，使滅菌室壓力蒸汽回復(fù)為零,，溫度降至60℃以下,，即可開(kāi)門取出物品。
2)脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌方法：
1]將待滅菌的物品放入滅菌柜內(nèi),，關(guān)好柜門, 脈動(dòng)預(yù)真空壓力蒸汽滅菌整個(gè)過(guò)程需29 min～36 min,。
2]將蒸汽通入夾層，使壓力達(dá)107.8 kPa（1.1㎏/㎡）,，預(yù)熱4 min,；
3]啟動(dòng)真空泵，抽除柜室內(nèi)空氣使壓力達(dá)8.0 kPa,；
4]停止抽氣,，向柜室內(nèi)榆入飽和蒸汽，使柜室內(nèi)壓力達(dá)49 kPa（0.5㎏/㎡）,，溫度達(dá)106℃～115℃,，關(guān)閉蒸汽閥；
5]抽氣,，再次輸入蒸汽,，再次抽氣，如此反復(fù)3次～4次,；
6]最后一次輸入蒸汽,，使壓力達(dá)205.8 kPa（2.1㎏/㎡），溫度達(dá)132℃,，維持滅菌時(shí)間4 min,；
7]停止輸入蒸汽，抽氣,，當(dāng)壓力降到8.0 kPa,，打開(kāi)進(jìn)氣閥，使空氣經(jīng)高效濾器進(jìn)入柜室內(nèi),，使內(nèi)外壓力平衡,；
8]重復(fù)上述抽氣進(jìn)氣操作2次～3次；
9]待柜內(nèi)外壓力平衡（恢復(fù)到零位）,，溫度降至60℃以下,，即可開(kāi)門取出物品。
4 裝載注意事項(xiàng)
為了利于蒸汽的滲透和空氣排出,，高壓滅菌物品應(yīng)松散包裝放置在滅菌器內(nèi),。要使蒸汽能夠作用到其內(nèi)容物。同時(shí)應(yīng)按照下列要求進(jìn)行裝載。
1）下排氣滅菌器的裝載量不得超過(guò)柜室內(nèi)容量的80%,；預(yù)真空滅菌器的裝載量不得超過(guò)柜室容積90%,，同時(shí)預(yù)真空和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器的裝置量又分別不得小于柜室容積的10%和5%，以防止“小裝量效應(yīng)”,，殘留空氣影響滅菌效果,；
2）應(yīng)盡量將同類物品放在一起滅菌，若必須將不同類物品裝放在一起,，則以最難達(dá)到滅菌物品所需的溫度和時(shí)間為基準(zhǔn),；
3）物品裝放時(shí)，上下左右相互間均隔一定距離以利蒸汽置換空氣,；大型滅菌器,，物品應(yīng)放于柜室或推車上的載物架上；無(wú)載物架的中小型滅菌器,，可將物品放于網(wǎng)籃中,；
4）用于滅菌的大包放在上層，較易滅菌的小包放在下層,；金屬物品放下層,，織物包放上層，物品裝放不能貼靠門和四壁,，以防吸入較多的冷凝水；
5）金屬包應(yīng)平放,，盤,、碟、碗等應(yīng)處于豎立的位置,；纖維織物應(yīng)使折疊的方向與水平面成垂直狀態(tài),；玻璃瓶等應(yīng)開(kāi)口向下或側(cè)放以利蒸汽進(jìn)入和空氣排出；
6）啟閉式篩孔容器,，應(yīng)將篩孔的蓋打開(kāi),。
7）滅菌處理時(shí)的操作程序等要求：
1] 蒸汽的質(zhì)量要求。必須安裝氣水分離器,，確保滅菌過(guò)程中蒸汽的飽和度合格,；
2] 滅菌操作程序應(yīng)按壓力蒸汽滅菌器生產(chǎn)廠家的操作使用說(shuō)明書的規(guī)定進(jìn)行。
