消毒和滅菌的基本常識和方法對于實驗室生物安全是至關重要的,。因此,，實驗室和醫(yī)學廢棄物的處理應遵守相關行業(yè)部門,、國家和國際的規(guī)定,。根椐衛(wèi)生部《微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則》WS233-2002第6.2.2.2條款明確規(guī)定,，實驗室的設計和建造應設置高壓滅菌鍋,、化學消毒裝置,，實驗后的一切廢棄物都必須進行滅菌、消毒處理,；關于清除污染的特殊要求,，要根據(jù)實驗工作類型以及所操作的感染性物質的特性來決定?！秾嶒炇疑锇踩ㄓ脺蕜t》GB19489-2004的相關條款均提出設置高壓滅菌鍋的要求,。如在相關生物安全實驗室未設置高壓滅菌鍋或化學消毒裝置或裝備了其設備但不符合規(guī)定要求的，應該講是一個不合格的生物安全實驗室,。當然,，正確掌握滅菌和消毒技術亦是實驗室生物安全保證的重要方面之一。
消毒即通過物理或化學手段去除微生物（不一定殺滅其孢子）,；而滅菌殺滅和／或去除所有微生物及其孢子的過程,；化學消毒滅菌通過液體化學試劑殺滅微生物繁殖體或芽孢。然而,，消毒對象包括物體表面,、空氣和污染物等，方式有擦洗消毒,、熏蒸和浸泡等,。物理消毒滅菌包括紫外線、高壓蒸汽滅菌,、焚燒和HEPA過濾除菌等,。
通常加熱是最常用的清除病原污染的物理手段。“干”熱沒有腐蝕性,，可用來處理實驗器材中可耐受≥160℃高溫的物品,，所需時間為2～4 h。通常它的適用范圍是用于高溫下不損壞,、不變質,、不蒸發(fā)物品的滅菌；用于蒸汽或氣體不能穿透物品的滅菌,，如玻璃,、油脂、粉劑和金屬等制品的消毒滅菌,。但高壓滅菌的濕熱法卻最為有效,。煮沸并不一定能殺死所有的微生物或病原體，但如果其他方法（化學殺菌,、清除污染,、高壓滅菌）不可行或沒有條件時，也可以作為一種最起碼的消毒措施,。一旦滅菌后的物品必須小心操作和保存,，以保證在使用之前不再被污染,。
1 選擇原則
對于選擇消毒和滅菌方法的原則是（1）根據(jù)物品污染后危害程度來選擇。高度危險的物品,，必須選用滅菌法滅菌,，其滅菌指數(shù)為106；中度危險的物品,，可選用中效消毒法或高效消毒法,，要求消毒指數(shù)達103以上；凡低度危險物品,，一般可用低效消毒方法或只作一般性清潔處理即可,。（2）根據(jù)污染微生物的種類和數(shù)量選擇消毒、滅菌方法和使用劑量：1]受到致病性芽孢菌,、真菌孢子和抗力強,、危險程度大的病毒污染的物體，應選用高效消毒法和滅菌法,。2]受到致病性細菌和真菌,、親水病毒、螺旋體,、支原體,、衣原體應選用中效以上消毒法。3]受到一般細菌和親脂病毒污染的物品,，可選用中效或低效消毒法。4]物品上污染特別嚴重時,，應加大處理劑量和延長消毒時間
2 消毒,、滅菌工作中的自我防護
消毒因子大多是對人體有害，因此,，在進行消毒時一定要具有自我防護的措施,，防止消毒操作中發(fā)生的意外事故，同時應防止由于操作方法不當而對人引起的傷害,。熱力消毒滅菌：干熱滅菌防止燃燒,，壓力蒸氣滅菌應防止爆炸等；紫外線,、微波消毒時應防止對人的直接照射,；氣體化學消毒、滅菌劑要防止泄漏,；液體化學消毒,、滅菌劑要防止過敏和對皮膚粘膜的傷害；處理銳利器械時應避免對人的損傷,。
3 消毒與滅菌方法
壓力蒸汽滅菌器是根據(jù)排放冷空氣的方式和程度不同,，分為下排氣式壓力蒸汽滅菌器和預真空壓力蒸汽滅菌器二大類,。
下排氣式壓力蒸汽滅菌器：高壓滅菌即壓力飽和蒸汽滅菌是對實驗材料進行滅菌的最有效和最可靠的方法。通過溫度設置和滅菌時間的組合將確保高壓滅菌器的滅菌效果,。
134℃,、3 min、b）126℃,、10 min,、c）121℃、15 min,、115℃,、25 min
其滅菌方法為：
1）手提式壓力蒸汽滅菌方法
1] 在主體腔內(nèi)加入適量的清水，將滅菌物品放入滅菌器內(nèi),；
2] 將頂蓋上的排氣軟管插入內(nèi)壁的方管中,，蓋好后必須擰緊頂蓋；
3] 打開滅菌器的熱源,，開啟排氣閥排完空氣后（約在水沸騰后10 min～15 min 關閉排氣閥,；
4] 將壓力升至102.9 kPa(1.05 kg/㎡),溫度要求達121℃,維持到規(guī)定時間(根據(jù)物品性質以及有關情況確定,一般20 min～30 min);
5] 需要干燥的物品,打開排氣閥,慢慢放汽,待壓力恢復到零位后開蓋取物.
2）臥式壓力蒸汽滅菌器滅菌方法
1] 將待滅菌物品放入滅菌柜室內(nèi)，關閉柜門并扣緊,；
2] 打開進氣閥,，將蒸汽通入夾層預熱；
3] 夾層壓力達102.9 kPa(1.05㎏/㎡)時,調整控制閥到“滅菌”位置,，蒸汽通入滅菌室內(nèi),，此時柜內(nèi)冷空氣和冷凝水經(jīng)柜室阻氣器自動排出；
4] 當柜內(nèi)壓力達102.9 kPa(1.05㎏/㎡),需維持20 min～30 min,；
5] 需要干燥的物品,，滅菌后調整控制閥至“干燥”位置，蒸汽被抽出,，柜室內(nèi)呈負壓,，維持一定時間物品即達干燥要求。
6] 對液體類物品,，應待自然冷卻到60℃以下,，再開門取物，不得使用快速排出蒸汽法,，以防突然減壓,，液體劇烈沸騰或容器爆炸。
預真空式高壓滅菌
其滅菌方法為：
1）預真空壓力蒸汽滅菌方法：
1] 將待滅菌的物品放入滅菌柜內(nèi),，關好柜門,，預真空壓力蒸汽滅菌整個過程約需25 min。
2] 將蒸汽通入夾層，使壓力達107.8 kPa（1.1㎏/㎡）,，預熱4 min,；
3] 啟動真空泵，抽除柜室內(nèi)空氣使壓力達2.0 kPa-2.7 kPa（排除柜室內(nèi)空氣98%左右）,；
4] 停止抽氣,，向柜室內(nèi)輸入飽和蒸汽，使柜內(nèi)壓力達205.8 kPa（2.1㎏/㎡）,，溫度達134℃,，維持滅菌時間3 min；
5] 停止輸入蒸氣,，再次抽真空使壓力達8.0 kPa,，使滅菌物品迅速干燥；
6] 通入過濾后的潔凈空氣,，使滅菌室壓力蒸汽回復為零,，溫度降至60℃以下，即可開門取出物品,。
2)脈動真空壓力蒸汽滅菌方法：
1]將待滅菌的物品放入滅菌柜內(nèi),，關好柜門, 脈動預真空壓力蒸汽滅菌整個過程需29 min～36 min。
2]將蒸汽通入夾層,，使壓力達107.8 kPa（1.1㎏/㎡）,，預熱4 min；
3]啟動真空泵,，抽除柜室內(nèi)空氣使壓力達8.0 kPa,；
4]停止抽氣，向柜室內(nèi)榆入飽和蒸汽,，使柜室內(nèi)壓力達49 kPa（0.5㎏/㎡）,，溫度達106℃～115℃，關閉蒸汽閥,；
5]抽氣，再次輸入蒸汽,，再次抽氣,，如此反復3次～4次；
6]最后一次輸入蒸汽,，使壓力達205.8 kPa（2.1㎏/㎡）,，溫度達132℃，維持滅菌時間4 min,；
7]停止輸入蒸汽,，抽氣，當壓力降到8.0 kPa，打開進氣閥,，使空氣經(jīng)高效濾器進入柜室內(nèi),，使內(nèi)外壓力平衡；
8]重復上述抽氣進氣操作2次～3次,；
9]待柜內(nèi)外壓力平衡（恢復到零位）,，溫度降至60℃以下，即可開門取出物品,。
4 裝載注意事項
為了利于蒸汽的滲透和空氣排出,，高壓滅菌物品應松散包裝放置在滅菌器內(nèi)。要使蒸汽能夠作用到其內(nèi)容物,。同時應按照下列要求進行裝載,。
1）下排氣滅菌器的裝載量不得超過柜室內(nèi)容量的80%；預真空滅菌器的裝載量不得超過柜室容積90%,，同時預真空和脈動真空壓力蒸汽滅菌器的裝置量又分別不得小于柜室容積的10%和5%,，以防止“小裝量效應”，殘留空氣影響滅菌效果,；
2）應盡量將同類物品放在一起滅菌,，若必須將不同類物品裝放在一起，則以最難達到滅菌物品所需的溫度和時間為基準,；
3）物品裝放時,，上下左右相互間均隔一定距離以利蒸汽置換空氣；大型滅菌器,，物品應放于柜室或推車上的載物架上,；無載物架的中小型滅菌器，可將物品放于網(wǎng)籃中,；
4）用于滅菌的大包放在上層,，較易滅菌的小包放在下層；金屬物品放下層,，織物包放上層,，物品裝放不能貼靠門和四壁，以防吸入較多的冷凝水,；
5）金屬包應平放,，盤、碟,、碗等應處于豎立的位置,；纖維織物應使折疊的方向與水平面成垂直狀態(tài)；玻璃瓶等應開口向下或側放以利蒸汽進入和空氣排出,；
6）啟閉式篩孔容器,，應將篩孔的蓋打開,。
7）滅菌處理時的操作程序等要求：
1] 蒸汽的質量要求。必須安裝氣水分離器,，確保滅菌過程中蒸汽的飽和度合格,；
2] 滅菌操作程序應按壓力蒸汽滅菌器生產(chǎn)廠家的操作使用說明書的規(guī)定進行。
