基本原理

超氧化物歧化酶（SOD）能夠催化超氧陰離子（O2•-）歧化,，生成過氧化氫以及單質(zhì)氧,，是一種重要的抗氧化酶,。哺乳動物細(xì)胞溶質(zhì)中的SOD呈綠色,，并且由兩種亞單位構(gòu)成,，一種含有銅,，另一種含有鋅（Cu/Zn-SOD）,。線粒體和細(xì)菌SOD為紅紫色并含有錳（Mn-SOD）。E.coli含有Mn-SOD和Fe-SOD,。

為了測定SOD的活性,，研究人員嘗試了許多間接的或者直接的方法,，其中，NBT的間接法最為常用,，因?yàn)樗芊奖?。但是，NBT法有幾個缺點(diǎn),，例如生成的染料水溶性差,，而且會和黃嘌呤氧化酶的還原型發(fā)生反應(yīng)。雖然cytochrome C法也常被用來做SOD檢測,，但它和超氧化物反應(yīng)過于劇烈,，不能測定低水平的SOD。SOD Assay Kit-WST®使用了Dojindo自己發(fā)明的易溶于水的噻唑鹽：WST®-1（2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯基)-2氫-四唑鹽,二鈉鹽）,，能夠和超氧陰離子反應(yīng)生成水溶性的染料,，因此可以簡便地進(jìn)行SOD的檢測。WST®-1與超氧陰離子反應(yīng)的劇烈程度比cytochrome C小70倍,；因此,，它的檢測靈敏度非常高，并且能夠通過將樣品用buffer稀釋,，使背景的吸光度最小化,。WST®-1不會和黃嘌呤氧化酶的還原型發(fā)生反應(yīng)，因此,，能夠檢測SOD100%的抑制率,。WST®-1被超氧陰離子還原的比率與黃嘌呤氧化酶的活性線性相關(guān)，并且會被SOD所抑制（見下圖）,。因此,，SOD或者SOD類似物的IC50(50%的抑制濃度)就能用比色法來測定。

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