隨著高新技術的不斷出現(xiàn),，白細胞分類計數(shù)已由電阻抗法的三分類發(fā)展為同時使用多項技術聯(lián)合檢測白細胞，綜合分析各項數(shù)據(jù),，可得出較準確的分類結果,。這些技術包括體積分析、激光分析,、高頻傳導分析,、光散射分析和細胞化學等，但目前所用的普通血細胞分析儀仍不能對某些細胞進行準確識別,，如白血病細胞,、單核細胞、異常不典型淋巴細胞等,。各類五分類血細胞分析儀的質量保證有賴于參考方法的建立,。目前，白細胞分類計數(shù)的參考方法仍然是手工分類法,，即將血涂片進行瑞氏染色后,，在顯微鏡下對各種白細胞進行分類。手工分類法的不足之處在于：(1)技術人員進行細胞分類時,，存在主觀因素的影響,；(2)由于單核細胞、嗜堿性粒細胞數(shù)量較少,，分類時不能保證其結果準確度和精密度,；(3)血片細胞分布不均。
Hiibl等研究了使用流式細胞術進行白細胞五分類法,，這種方法使用了三種熒光染料標記的單克隆抗體對不同白細胞進行染色：FITC標記的抗CD45,PE/CYS標記的抗CD14,，PE標記的抗CD2,、抗CD16、抗HLA-DR單克隆抗體混合物,。根據(jù)各種白細胞表面抗原分布的不同對白細胞進行分類（表1見書42頁）,。
　　染色前先用細胞稀釋液破壞紅細胞，白細胞因表達CD45而與細胞碎片區(qū)分開,。嗜酸性和嗜堿性粒細胞不能被PE標記的單克隆抗體混合物染色或染色較淺,，且CD14陰性，而與其他細胞相區(qū)分,，被框入LSS(側向光散射)/CD45直方圖內,。在LSS/CD45直方圖內嗜酸性和嗜堿性粒細胞因表達CD45的強度不同及側向光散射特征存在差異而被分開。單核細胞表達CD14,，同時結合其側向光散射特征而被框入LSS/CD14區(qū),。單核細胞以外的細胞根據(jù)側向和前向光散射（FS）特征差異而在LSS/FS直方圖中分為兩群，一群包括淋巴細胞和嗜堿性粒細胞,，另一群包括中性粒細胞和嗜酸性粒細胞,。從淋巴細胞、嗜堿性粒細胞中減去嗜堿性粒細胞即為淋巴細胞,，從總數(shù)（100％）中減去嗜酸性粒細胞,、嗜堿性粒細胞、單核細胞,、淋巴細胞相對數(shù)，即得中性粒細胞相對數(shù),。
　　根據(jù)CD14區(qū)分單核細胞時,，有少量CD14陰性單核細胞可被漏檢，而在區(qū)分嗜酸性粒細胞時,，排除中性粒細胞是根據(jù)中性粒細胞表達CD16,，若存在大量CD16弱表達的成熟中性粒細胞，則這部分中性粒細胞會干擾嗜酸性粒細胞計數(shù),，使嗜酸性粒細胞結果偏高,，這種情況主要見于炎癥反應。研究還發(fā)現(xiàn),，選擇不同的標本處理方法和流式細胞儀,，雖然所得結果相關性較好，但不同細胞亞群計數(shù)結果間的差異具有明顯的統(tǒng)計學意義,，這體現(xiàn)了方法學選擇的重要性,。流式細胞儀白細胞五分類法綜合運用多種細胞表面標志和光散射特征對白細胞進行識別，具有較高的特異性,，其計數(shù)結果與手工分類法相關性較好,，而且重現(xiàn)性遠遠優(yōu)于手工分類法,，有望成為白細胞分類計數(shù)的參考方法。
　　綜上所述,，由于高新技術的發(fā)展和應用,，全血細胞計數(shù)及其相關指標檢測的參考方法也在逐步發(fā)展。血紅蛋白及紅細胞比積測定的參考方法相對較易建立,，而全血細胞計數(shù)由于影響因素較多,，難以建立合適的參考方法。以往手工操作的方法,，由于主觀因素影響和實際所能達到精度的限制,，已越來越不適應于現(xiàn)有的要求，半自動或全自動分析方法可能逐步取代手工操作成為參考方法,。流式細胞術及細胞標記技術的發(fā)展及應用,，極大地促進了細胞計數(shù)和分類的發(fā)展，將是今后主要的發(fā)展方向之一,。