隨著高新技術(shù)的不斷出現(xiàn)，白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)已由電阻抗法的三分類發(fā)展為同時(shí)使用多項(xiàng)技術(shù)聯(lián)合檢測白細(xì)胞,，綜合分析各項(xiàng)數(shù)據(jù),，可得出較準(zhǔn)確的分類結(jié)果。這些技術(shù)包括體積分析,、激光分析,、高頻傳導(dǎo)分析、光散射分析和細(xì)胞化學(xué)等,，但目前所用的普通血細(xì)胞分析儀仍不能對某些細(xì)胞進(jìn)行準(zhǔn)確識(shí)別,，如白血病細(xì)胞、單核細(xì)胞,、異常不典型淋巴細(xì)胞等,。各類五分類血細(xì)胞分析儀的質(zhì)量保證有賴于參考方法的建立。目前,，白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的參考方法仍然是手工分類法,，即將血涂片進(jìn)行瑞氏染色后，在顯微鏡下對各種白細(xì)胞進(jìn)行分類,。手工分類法的不足之處在于：(1)技術(shù)人員進(jìn)行細(xì)胞分類時(shí),，存在主觀因素的影響；(2)由于單核細(xì)胞,、嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量較少,，分類時(shí)不能保證其結(jié)果準(zhǔn)確度和精密度；(3)血片細(xì)胞分布不均,。
Hiibl等研究了使用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行白細(xì)胞五分類法,，這種方法使用了三種熒光染料標(biāo)記的單克隆抗體對不同白細(xì)胞進(jìn)行染色：FITC標(biāo)記的抗CD45,PE/CYS標(biāo)記的抗CD14，PE標(biāo)記的抗CD2,、抗CD16,、抗HLA-DR單克隆抗體混合物。根據(jù)各種白細(xì)胞表面抗原分布的不同對白細(xì)胞進(jìn)行分類（表1見書42頁）,。
　　染色前先用細(xì)胞稀釋液破壞紅細(xì)胞,，白細(xì)胞因表達(dá)CD45而與細(xì)胞碎片區(qū)分開。嗜酸性和嗜堿性粒細(xì)胞不能被PE標(biāo)記的單克隆抗體混合物染色或染色較淺，且CD14陰性,，而與其他細(xì)胞相區(qū)分,，被框入LSS(側(cè)向光散射)/CD45直方圖內(nèi)。在LSS/CD45直方圖內(nèi)嗜酸性和嗜堿性粒細(xì)胞因表達(dá)CD45的強(qiáng)度不同及側(cè)向光散射特征存在差異而被分開,。單核細(xì)胞表達(dá)CD14,，同時(shí)結(jié)合其側(cè)向光散射特征而被框入LSS/CD14區(qū)。單核細(xì)胞以外的細(xì)胞根據(jù)側(cè)向和前向光散射（FS）特征差異而在LSS/FS直方圖中分為兩群,，一群包括淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞,，另一群包括中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞。從淋巴細(xì)胞,、嗜堿性粒細(xì)胞中減去嗜堿性粒細(xì)胞即為淋巴細(xì)胞,，從總數(shù)（100％）中減去嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞,、單核細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞相對數(shù)，即得中性粒細(xì)胞相對數(shù),。
　　根據(jù)CD14區(qū)分單核細(xì)胞時(shí),，有少量CD14陰性單核細(xì)胞可被漏檢，而在區(qū)分嗜酸性粒細(xì)胞時(shí),，排除中性粒細(xì)胞是根據(jù)中性粒細(xì)胞表達(dá)CD16,，若存在大量CD16弱表達(dá)的成熟中性粒細(xì)胞，則這部分中性粒細(xì)胞會(huì)干擾嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù),，使嗜酸性粒細(xì)胞結(jié)果偏高,，這種情況主要見于炎癥反應(yīng)。研究還發(fā)現(xiàn),，選擇不同的標(biāo)本處理方法和流式細(xì)胞儀,，雖然所得結(jié)果相關(guān)性較好，但不同細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)結(jié)果間的差異具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,，這體現(xiàn)了方法學(xué)選擇的重要性,。流式細(xì)胞儀白細(xì)胞五分類法綜合運(yùn)用多種細(xì)胞表面標(biāo)志和光散射特征對白細(xì)胞進(jìn)行識(shí)別，具有較高的特異性,，其計(jì)數(shù)結(jié)果與手工分類法相關(guān)性較好，而且重現(xiàn)性遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于手工分類法,，有望成為白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的參考方法,。
　　綜上所述，由于高新技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用,，全血細(xì)胞計(jì)數(shù)及其相關(guān)指標(biāo)檢測的參考方法也在逐步發(fā)展,。血紅蛋白及紅細(xì)胞比積測定的參考方法相對較易建立，而全血細(xì)胞計(jì)數(shù)由于影響因素較多,，難以建立合適的參考方法,。以往手工操作的方法,，由于主觀因素影響和實(shí)際所能達(dá)到精度的限制，已越來越不適應(yīng)于現(xiàn)有的要求,，半自動(dòng)或全自動(dòng)分析方法可能逐步取代手工操作成為參考方法,。流式細(xì)胞術(shù)及細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用，極大地促進(jìn)了細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類的發(fā)展,，將是今后主要的發(fā)展方向之一,。