微量移液器的校準(zhǔn)方法有哪些,?愛寶醫(yī)療移液器:
定量移液器的校準(zhǔn)——稱量法
校準(zhǔn)應(yīng)在無(wú)通風(fēng)的房間,移液器和空氣溫度在20℃-25℃之間,,相對(duì)濕度必需在55%以上,。特別是當(dāng)移液量在50ul以下其空氣濕度應(yīng)越高越好以減少蒸發(fā)損失的影響。
在萬(wàn)分之一級(jí)別天平上放置一個(gè)小三角燒瓶,,用待標(biāo)定的移液器吸取蒸餾水(隔夜存放)加入小三角燒瓶?jī)?nèi)底部,,每次稱重后計(jì)量,去皮重后再加蒸餾水,,連續(xù)加蒸餾水 10次,。加蒸餾水的量根據(jù)待標(biāo)定的移液器不同規(guī)格而不同,見下表,。移液器10次標(biāo)定稱量在所要求的重量范圍之內(nèi)為合格移液器,;不合格移液器需要進(jìn)行調(diào)整。移液器標(biāo)定合格后,,填寫自校記錄,。
移液器規(guī)格 標(biāo)定使用蒸餾水量 要求重量范圍
0.5-10ul 2ul 1.75-2.25mg
5-40ul 10ul 9.8-10.2mg
40-200ul 70ul 69.4-70.6mg
200-1000ul 300ul 298.0-302.0mg
1- 5ml 2000ul 1990.0-2010.0mg
2- 10ml 3500ul 3485.0-3515.0mg
一、實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)單檢測(cè)
(一) 氣密性檢測(cè)
移液器吸滿液體后,,手持垂直放置15s,,檢查吸嘴的尖頭有無(wú)液滴,如有,,則說(shuō)明漏氣,。
(二) 準(zhǔn)確性檢測(cè)
1) 量程小于1μl,建議使用分光光度法檢測(cè),。將移液器調(diào)至目標(biāo)體積,,然后移取染料溶液,加入一定體積的蒸餾水中,,測(cè)定溶液的稀釋度(334nm或340nm),重復(fù)幾次移液操作,,計(jì)算移液器的精確度,。
2) 量程大于1μl,可以用稱重法檢測(cè),。通過(guò)對(duì)水的稱重,,轉(zhuǎn)換成體積(體積=質(zhì)量/密度),鑒別移液器的準(zhǔn)確性,。由于水的密度是隨著溫度變化而變化,,且稱量天平本身精確度不符合檢測(cè)要求,,檢測(cè)又大多在一個(gè)開放式空間內(nèi)操作,偏差在所難免,。因而,,此種稱量法只能現(xiàn)場(chǎng)粗略地判斷移液器的準(zhǔn)確性,進(jìn)一步的校準(zhǔn)必須在專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室操作進(jìn)行,。
注意:稱重法實(shí)驗(yàn)室必備條件是高度靈敏的分析天平(定期校準(zhǔn)),、雙蒸水和稱量容器。水,、移液器和吸嘴必須具有相同的溫度(20℃時(shí)水的密度為0.09982),。
二、專業(yè)校準(zhǔn)
移液器的工作量大,,長(zhǎng)期使用,,將會(huì)使彈簧彈力發(fā)生變形,加之本身是塑料,,不耐磨擦,,就會(huì)產(chǎn)生誤差。為了保證移液器傳遞液體量的準(zhǔn)確性,,必須對(duì)移液器進(jìn)行定期校準(zhǔn),。為了更好地發(fā)揮該類計(jì)量?jī)x器的作用,對(duì)新購(gòu)進(jìn)的儀器要進(jìn)行校準(zhǔn)才能使用,;對(duì)正在使用的計(jì)量?jī)x器,,由于長(zhǎng)期使用會(huì)造成其示值于度量對(duì)象的誤差,這種誤差若不進(jìn)行控制,,及時(shí)校正,,必定會(huì)影響科研工作。因此,,對(duì)使用的移液器要定期檢定,、校正,并建立檔案,,只有這樣才能使其在日常工作中更好的發(fā)揮作用,。
目前,在許多實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行的常規(guī)檢測(cè)并不能完全取代專業(yè)的校準(zhǔn)工作,,因?yàn)樾?zhǔn)對(duì)于外部環(huán)境,、工作條件及使用的精密儀器具有較高的技術(shù)要求,而這些條件往往是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室無(wú)法提供的?,F(xiàn)在一些大型的移液器制造商均采用全球統(tǒng)一的移液器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范,,利用專業(yè)軟件校正系統(tǒng),通過(guò)計(jì)算機(jī)對(duì)分析天平進(jìn)行在線控制,測(cè)量,、數(shù)據(jù)采集,、計(jì)算、結(jié)果評(píng)價(jià)等環(huán)節(jié)由軟件控制完成,,所有人為操作都被計(jì)算機(jī)記錄隨報(bào)告打印出來(lái),,采用電腦對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估認(rèn)證,完全排除了人為操縱校準(zhǔn)結(jié)果的可能性,,并制定當(dāng)?shù)卮砩烫峁I(yè)的校準(zhǔn)和維修服務(wù),。下面以eppendorf移液器公司為例,介紹其專業(yè)校準(zhǔn)操作,。
(一) 校準(zhǔn)的基本操作條件
操作室:獨(dú)立房間,,顯示溫度和濕度狀態(tài)。
溫度控制:15~30℃(±0.5℃)
濕度控制:60%~90%
工作臺(tái)面:防震,、防塵,、遠(yuǎn)離熱源、無(wú)陽(yáng)光直射,。
天平:0.000 01g精密分析天平(小數(shù)點(diǎn)后5位),,每年需由廠家進(jìn)行校準(zhǔn)。
防蒸發(fā)裝置:Eppendorf提供的濕度阱,,防止稱量液體的揮發(fā),。
測(cè)試介質(zhì):雙蒸水,每4h更換一次,,批次更換周期不大于2周,。
(二) 操作過(guò)程
1) 同溫化處理:校正前,所有移液器及校正介質(zhì)(如工作臺(tái),、天平,、雙蒸水等)置于相同操作間至少4h,以確保它們具有相同的溫度,。
2) 內(nèi)外部清洗,。
3) 潤(rùn)滑活塞。
4) 校準(zhǔn):采用三點(diǎn)校準(zhǔn)法,,即根據(jù)移液器量程范圍,,選取最低量程、中間值和最高量程三點(diǎn)分別測(cè)試10次,,各個(gè)測(cè)試點(diǎn)取其平均值,,計(jì)算其準(zhǔn)確度(inaccuracy)和精確度(imprecision),評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)符合DIN 12650要求,。
5) 校準(zhǔn)報(bào)告:可根據(jù)客戶需求提供給算計(jì)打印的標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告或PICASO校正報(bào)告,符合ISO、DIN或ASTM相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),。
三,、影響準(zhǔn)確性的因素
1) 操作錯(cuò)誤:包括30℃手持式移液器吸液;與吸嘴不匹配,,較易造成脫落,;殘留的試劑倒流,污染活塞和密封圈,;快速吸液排液,,導(dǎo)致部分液體殘留在吸頭上等都會(huì)影響準(zhǔn)確性。
2) 移液器損壞:包括移液器的頭部被刮擦,,斷裂受損,;活塞受污染;彈簧受腐蝕等,。
3) 操作條件的影響:包括未作調(diào)整吸取與水不同密度的液體,;樣品和移液器的差別太大等。