1 血球計數板
視待測菌懸液濃度,加無菌水適當稀釋(斜面一般稀釋100倍),,以每小格的菌數可數為度。
2.取潔凈的血球計數板一塊,,在計數區(qū)上蓋上一塊蓋玻片,。
3.將菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,,從計數板中間平臺兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴(不宜過多),,讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區(qū),勿使氣泡產生,,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液,。也可以將菌懸液直接滴加在計數區(qū)上(不要使計數區(qū)兩邊平臺沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片后,,造成計數區(qū)深度的升高),,然后加蓋蓋玻片(勿使產生氣泡)。
4.靜置片刻,,使細胞沉降到計數板上,,不再隨液體漂移。將血球計數板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩(wěn),,先在低倍鏡下找到計數區(qū)后,,再轉換高倍鏡觀察并計數。由于生活細胞的折光率和水的折光率相近,,觀察時應減弱光照的強度,。
5.計數時若計數區(qū)是由16個大方格組成,按對角線方位,,數左上,、左下、右上,、右下的4個大方格(即100小格)的菌數,。如果是25個大方格組成的計數區(qū),,除數上述四個大方格外,還需數中央1個大方格的血球計數板,。菌數(即80個小格),。為了保證計數的準確性,避免重復計數和漏記,,在計數時,,對沉降在格線上的細胞的統計應有統一的規(guī)定。如菌體位于大方格的雙線上,,計數時則數上線不數下線,,數左線不數右線,以減少誤差,。即位于本格上線和左線上的細胞計入本格,,本格的下線和右線上的細胞按規(guī)定計入相應的格中。見右圖:即本格中計數細胞為3個,。
6.對于出芽的酵母菌,,芽體達到母細胞大小一半時,即可作為兩個菌體計算,。每個樣品重復計數2-3次(每次數值不應相差過大,,否則應重新操作),按公式計算出每mL(g)菌懸液所含細胞數量,。
7.測數完畢,,取下蓋玻片,用水將血球計數板沖洗干凈,,切勿用硬物洗刷或抹擦,,以免損壞網格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風機吹干,,放入盒內保存。
材質:載玻片是在實驗時用來放置實驗材料的玻璃片,,呈長方形,,較厚,透光性較好,;蓋玻片是蓋在材料上,,避免液體和物鏡相接觸,以免污染物鏡,,呈正方形,,較薄,透光性較好,。
紅細胞計數公式:
紅細胞數/L=N*25/5*10*10^6*200
N為:五個中方格的RBC總數
N*25/5為:中央大方格RBC總數(即:0.1mm(ul)的RBC總數)
N*25/5*10為:1mm(ul)RBC總數
N*25/5*10*10^6為:1L的RBC總數
*200為血液的稀釋倍數
公式簡化后:紅細胞數/L=N/100*10^12
作用:載玻片是用顯微鏡觀察東西詩用來放東西的玻璃片,,然后將蓋玻片放置其上,用作觀察生物。
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